非小细胞肺癌中CD44v6的表达及意义

【摘要】  目的 探讨非小细胞肺癌中CD44v6的表达及其临床意义。方法 应用免疫组化法对72例非小细胞肺癌组织进行CD44v6检测。结果 CD44v6阳性染色定位于肺癌细胞质，阳性表达率为68%，其表达强度与非小细胞肺癌的组织学分级、淋巴结转移及临床分期呈显著相关（P均＜0.01），鳞癌CD44v6的表达率与腺癌有差异性（P＜0.05）， CD44v6的表达强度与病人的年龄、性别均无关（P均＞0.05）。结论 CD44v6在非小细胞肺癌的发生发展过程中有一定的作用，检测CD44v6可能成为判定非小细胞肺癌恶性程度、评估其侵袭性及转移性的重要指标。

【关键词】  CD44v6；非小细胞肺癌；免疫组织化学

Expression and significance of CD44v6 in nonsmallcell lung cancer

    ZHANG Hanhan  HU Jinxia  YU Yuan

    Department of Biochemistry, Binzhou Medical University, Yantai 264003

    【Abstract】  Objective  To investigate the relationship of the expression and significance of CD44v6 in nonsmallcell lung cancer (NSCLC)tissue.Methods  Immunohistochemical method was used to detect the expression of CD44v6 in 72 cases of NSCLC.Results  CD44v6  expressed in cytoplasm,the positive rate of CD44v6 was 68%.The expressive intensity of CD44v6 was significantly correlated with tissue grades, clinical stage and lymph node metastasis of NSCLC（P＜0.01）.It is showed that the expression of CD44v6 in SCC differently with that in ADC（P＜0.05）.The expressive intensity of CD44v6 was not related to age and gender（P＞0.05).Conclusions  CD44v6 may  play a role in NSCLC.The results suggest that  the expression of CD44v6 may be served as the important parameter of evaluating malignancy, invasion and metastasis in NSCLC. 

    【Key words】  CD44v6，NSCLC，immunohistochemistry

    肺癌是常见的恶性肿瘤之一，如今由肺癌及其转移瘤所致的死亡率已占癌症死亡率之首。尽早的发现、诊断及治疗是降低肺癌死亡率的有效途径，而要做到早发现、早诊断、早治疗就必须明确其发生、发展及转移机制。肺癌的形成是一个多阶段、多步骤的复杂过程［1］。CD44v6 是一种细胞粘附分子，研究表明，CD44v6 的过量表达与多种人体恶性肿瘤的发生、发展、侵袭和转移密切相关［2～5］。我们应用免疫组化法对组织学分级、临床分期、淋巴结转移等程度不同的72例非小细胞肺癌组织进行CD44v6的检测,探讨其在非小细胞肺癌发生与发展过程中的意义。

    1  对象与方法

    1.1  研究对象  滨州医学院附属医院2005—2007年间手术切除并经病理证实的NSCLC标本72例（所有病例术前均未行任何治疗）。72例病人年龄在35～72岁，其中男59例，女13例。鳞癌32例（Ⅰ级5例、Ⅱ级15例、Ⅲ级12例），腺癌40例（Ⅰ级10例、Ⅱ级12例、Ⅲ级18例）。肿瘤直径≤5 cm者50例， ＞5 cm者22例。所有病例均有淋巴结情况记录，其中有转移者40例，无转移者32例。按1997年肺癌国际分期修正系统进行临床分期：I期29例，Ⅱ期19例，Ⅲ期24例。所有标本均经10%甲醛固定，常规石蜡包埋，4 μm厚连续切片。

    1.2  主要试剂  鼠抗人CD44v6、P16单克隆抗体为丹麦Dako公司产品，SP免疫组化试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。

    1.3  免疫组化染色  采用免疫组织化SP法。切片经常规二甲苯脱蜡梯度乙醇水化。一抗孵育前切片经0.01 M柠檬酸型缓冲液(pH= 6.0) 煮沸抗原修复。操作步骤按产品说明书进行。DAB显色，镜下观察，自来水终止显色。实验采用已知CD44v6阳性胃癌组织作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。

    1.4  结果判定  以肺癌细胞胞质内呈棕黄色颗粒状着色为CD44v6表达阳性，无着色者为阴性。①按染色强度记分：无染色为0分；棕黄色为1分；深棕黄或棕褐色为2分。②按阳性细胞百分比计分：≤5％为0分，6％～30％为1分；31％～70％为2分；≥71％为3分。以上述①②两种计分方式相加所得的总分进行判断，总分0分为阴性（－），1～3分为弱阳性（＋），4～5分为强阳性（＋＋）。

    1.5  主要观察指标  CD44v6的表达与非小细胞肺癌患者性别、年龄、肿瘤大小、组织学分级、临床分期、淋巴结转移的关系。

    1.6  统计学分析  采用χ2检验和相关分析。所有数据均应用SPSS13.0 for windows 统计分析软件在计算机上进行，P＜0.05为差异有显著性。

    2  结果

    CD44v6阳性产物呈棕黄色或棕褐色颗粒状,定位于细胞质。在72例NSCLC中，23例阴性（－），34例弱阳性（＋），15例强阳性（＋＋），阳性表达率为68%； CD44v6的表达强度与非小细胞肺癌的组织学分级呈正相关（P＜0.01）、与NSCLC的临床分期呈正相关（P＜0.01），肺癌伴淋巴结转移组的CD44v6表达强度明显高于非淋巴结转移组（P＜0.01），鳞癌CD44v6的表达率与腺癌有差异性（P＜0.05），CD44v6的表达与患者的年龄、性别及原发瘤大小均无关。具体见表1。 表1  CD44v6在NSCLC中的表达与患者临床病理特征间的关系

　3  讨论

    肺癌是一种常见的肺部恶性肿瘤，其死亡率已占癌症死亡率之首，根据最新报告显示，肺癌、乳腺癌分别位居男、女性恶性肿瘤发病首位，男女恶性肿瘤死亡率最高的均为肺癌。肺癌的发生与发展是多因素共同作用的结果，这些因素中既包括癌基因的激活、抑癌基因的失活，也包括黏附分子的作用。白细胞分化抗原44(CD44)， 是一个近年来很受关注的介导细胞与细胞、细胞与基质间相互作用的细胞表面黏附分子，主要参与异质性黏附，即肿瘤细胞与宿主细胞和宿主基质的黏附，异质性黏附在肿瘤细胞侵袭转移中起促进作用。因此,CD44 能直接参与肿瘤的浸润和转移。CD44v6 是CD44 的一种拼接变异体,其表达可改变肿瘤细胞表面黏附分子的构成和功能,有助于肿瘤细胞获得转移潜能。其促进肿瘤细胞转移的机制可能是表达CD44v6 的肿瘤细胞与远隔的淋巴管和血管内某一配体结合,使转移至那里的肿瘤细胞更加稳定地寄宿与生长,有效形成转移瘤。研究表明CD44v6高表达与消化道肿瘤(胃癌、结肠癌、肝癌)及乳腺癌、非霍奇金淋巴瘤、黑素瘤等肿瘤转移密切相关［6］。

    本实验研究结果显示，CD44v6在非小细胞肺癌组织中的阳性表达率为68%，且CD44v6表达程度与非小细胞肺癌的组织学分级和临床分期呈显著正相关(P＜0. 01) 。并同时对比了肺癌伴淋巴结转移与不伴淋巴结转移患者的CD44v6 表达水平,结果提示CD44v6 表达与淋巴结转移密切相关(P＜0.01)，有淋巴结转移的患者中CD44v6的表达水平明显高于无淋巴结转移组。鳞癌CD44v6的表达率高于腺癌，这与大多数学者的报道一致。这些均提示CD44v6的表达在非小细胞肺癌发生、转移和临床进展过程中起着重要作用,检测CD44v6可作为判断肿瘤恶性程度、评估其侵袭性和转移性及判断预后的客观指标。

【参考文献】
  ［1］ 仲宁, 沈振亚. CD44v6 在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义［J］.苏州大学学报(医学版)，2008，28(2) :241243.

［2］ Kay F , Folker F , Lisboa BW. CD44 isoforms correlate with cellular differentiation but not with prognosis in human breast cancer［J］.Cancer Res , 1995 , 55(2) :544546.

［3］ 谷化平, 倪灿荣, 詹荣洲, 等. CD15 mRNA、CD44v6 mRNA 及 nm23H1 mRNA 在乳腺癌中的表达及其临床意义［J］.中华医学杂志,2000 ,80 (11) :854857.

［4］ Yamaguchi A , Goi T , Seki K,et al.Chinical significance of combined immunohistochemical detection of CD44v6 and sialyl Lex expression for colorectal cancer patients undergoing curative resection［J］.Oncology ,1998 ,55 (5) :400403.

［5］ Kainz C , Tempfer C , Kohlberger P ,et al.Immunohistochemical detection of adhesion molecule CD44 splice variants in lymphnode metastases of cervical cancer［J］.Int J Cancer ,1997 ,74(2) :185187.

［6］ Friendrichs K,Franke F,Lisboa　BW ,et al.CD44 isofoms correlate with cellular diffirentation, but not　with prognosis in human breast cancer［J］.Cancer Res,1995, 55 (22) : 54245433.

作者单位：滨州医学院生物化学教研室 烟台市 264003