厌氧菌感染与临床检验

    Anaerobic infections and clinical examination WU Duorong, ZHANG Shufang, ZHANG Dongxia,et al(Haikou Hospital Affiliated to Zhongnan University Xiangya Medical College,Haikou 570208,Hainan,PRChina)

     厌氧菌在感染性疾病中的致病作用日益受到临床重视。据文献报道，在菌血症中有10%可检出厌氧菌［1］，牙周炎及牙根管炎厌氧菌感染率高达9667%～100%［2，3］，肺部厌氧菌感染率高达411%～842%［4，5］，厌氧菌和需氧菌混合性感染率高达8223%［6］。临床感染的很多实例证明开展厌氧菌检验极为必要。

    1  厌氧菌感染

　　厌氧菌是一大群在无氧环境下生长的细菌，厌氧菌在人体肠道、口腔、泌尿生殖道的正常菌群中占优势。当人体菌群失调时，厌氧菌可能侵犯人体许多部位，发生内源性厌氧菌感染。且感染率相当高，其中部分是厌氧菌单独感染，而大部分是与需氧菌混合感染。感染早期总是以需氧菌占优势，待需氧菌耗尽环境中的氧，机体抵抗力削弱后，造成局部组织的氧化还原电势降低，便有利于厌氧菌生长，同时需氧菌为厌氧菌提供维生素K等生长因子，而厌氧菌能保护需氧菌免遭白细胞的吞噬，这种协同作用造成了厌氧菌感染的普遍性。过去厌氧菌感染以经验用药为主，因为厌氧菌对现已上市的药物的敏感性较好，因此一般情况下不需要做药敏试验［7］，多数情况下治疗效果满意。但是近年来，随着抗菌药物的广泛使用，厌氧菌的耐药性也逐年增高，出现了耐甲硝唑菌株，耐药率约为5%～10%左右［8］，所以单靠经验用药已无法得到满意的治疗效果，因此应重视和加强厌氧菌的培养和药敏试验。

    2  厌氧菌检验

    21  概况  过去我国厌氧菌培养在实验室检验中开展并不理想，临床医生重视的程度不够，大多数实验室没有将厌氧菌培养作为常规检验开展，加上厌氧菌培养方法学落后，且受培养基的配制和保存限制，制约了厌氧菌培养在实验室的正常开展，造成厌氧菌的漏检率很高。据报道［9］，我国从未开展厌氧菌培养的实验室占77%之多，有90%的实验室无鉴定厌氧菌的设备，几乎所有临床细菌室均不开展厌氧菌药敏试验。近年来，国内从临床感染病例中分离出厌氧菌的报道日益增多，临床医生已认识到厌氧菌在感染性疾病中的重要性，并能识别厌氧菌的重要特征，能认真、正确的采样送检，且厌氧菌培养技术不断进步，厌氧菌检验已成为临床细菌学检验的重要组成部分。为提高感染性疾病的病原学诊断水平，开展厌氧菌培养是非常必要的。据资料显示［10］，如仅做需氧菌培养，在23份漏检标本中检出9株厌氧菌，这说明在做细菌需氧培养的同时应做厌氧培养，否则将会造成大量病原菌漏检，它不仅关系到疾病诊断的正确性，且影响治疗效果或导致治疗不彻底。

    22  注意事项  ①标本选择：根据厌氧菌感染的临床特征，采取感染局部有气体产生；排出物有恶臭、带血、呈黑色或黄绿色；与肿瘤有关的感染；病程呈亚急性或慢性；发生在肛周、口腔、鼻窦、咽颊等部位的感染；长期使用氨基糖苷类抗生素无效者；应用甲硝唑、替硝唑治疗有效者。②标本送检：大气中的氧对厌氧菌有毒性作用，任何标本建议采用床边接种的方法，床边接种既能缩短标本接触空气的时间，又能较好把好标本的质量关。不在床边接种的标本必须立即放入输送培养基并马上送检。③检验人员的责任心：检验人员对厌氧标本要加倍重视，积极配合临床，主动到床边采集标本。厌氧菌培养成败关键在一个快字，标本采集后要马上接种并放置厌氧环境，对厌氧培养标本要做到标本到手后马上处理。厌氧菌生长物特别恶臭，所以观察结果时检验人员要不怕臭，仔细观察，多挑选可疑菌落做耐氧试验，这样才能成功地分离出厌氧菌。④标本涂片检查：在对标本作厌氧菌培养的同时进行涂片镜检，可早期把有厌氧菌生长的信息提供给临床，如普通需氧培养无细菌生长，但直接涂片见到大量细菌者，即可考虑为厌氧菌感染；如普通培养只有一种细菌生长但直接涂片可见两种或以上细菌者，可考虑患者为混合感染。这样可早期指导临床诊断，避免盲目用药造成耐药菌株产生，又可解决厌氧菌培养和药敏周期长的弊端。⑤培养基选择和培养环境：初代接种厌氧菌最好使用新鲜配制的培养基，还可适当选用一些选择培养基，培养基使用前须进行预还原。培养环境选用厌氧袋或厌氧罐，两种方法价廉操作简易；厌氧箱设备昂贵，操作繁杂，不利于临床实验室使用。目前厌氧菌培养用OxyplatesTM培养法较好［11］，它无需其它厌氧装置，它的划线和培养在一个标准的厌氧培养基中，且能被反复打开使用多次，无须预先还原，便于实验室的使用。这种培养方法省去了厌氧罐、厌氧袋、厌氧箱等复杂、昂贵的消耗品，又能较好地分离出厌氧菌。

　　厌氧菌的鉴定可选用API 20A、VITEK-ANI、MICRO-01D、气液色谱仪等设备鉴定。厌氧菌的药敏试验大部分实验室采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的琼脂稀释法［12］，该方法实用性强，适有于大量菌株测定，有的实验室使用浓度梯度法(Etest)或ATB-ANA试条的方法，操作简便、快速。

    3  厌氧菌感染的治疗

    厌氧菌感染的治疗除针对原发病外，抗厌氧菌的治疗最为重要。替硝唑、甲硝唑对大多数厌氧菌感染治疗有效，因此成为目前临床上抗厌氧菌的首选药物。由于多数厌氧菌感染是混合感染，联合使用抗厌氧菌和需氧菌药物是非常必要的。由于不同地区、不同医院厌氧菌的耐药谱不同，经验用药时要根据本地区、本实验室的药敏谱选药。因此为提高疗效，减少抗生素的毒副作用，最好根据药敏试验选择药物治疗。

    参考文献：

    ［1］ 张秀珍当代细菌检验与临床［M］北京：人民卫生出版社，1999234-248

    ［2］  孙黄洁，刘彦平，赵淑兰，等感染根管内厌氧菌的检测分析［J］北京口腔医学，1998，6：158

    ［3］  李卫星下颌智齿冠周炎厌氧菌检查及药敏研究［J］山西医科大学学报，2000，31：365

    ［4］  王菡侨，刘树卿，杨敬芳，等192例肺部感染的厌氧菌菌谱分析［J］中华医学感染学杂志，2001，11：68～69

    ［5］  黄勇斌，刘兴森，黄承斌，等胸腔和肺部厌氧菌感染培养分析［J］江西医学检验杂志，1998，16：24

    ［6］  王模荣，薛存宽老年患者肺部厌氧菌感染培养分析［J］临床医学，2003，23：4～6

    ［7］  张秀珍，陈东科，胡继红甲硝唑等药物对115株厌氧菌最底抑菌浓度测定［J］中华医学检验杂志，1996，19：366～368

    ［8］  Erwin ME,Fix AM,Jones RNThree independent yearly analyses of the spectrum and potency of metronidazole : a multicenter study of 1108 contemporary anaerobic clinical isolates［J］Diagn Microbiol Infect Dis, 2001,39:129～132

    ［9］ 张秀珍要加强我国临床细菌厌氧的培养技术［J］中华检验医学杂志，2002，3：133～134

    ［10］ 储从家，孔繁林，罗次节，等同时做需氧厌氧培养提高血(体)液细菌培养阳性率［J］中华检验医学杂志，2002，23：285

    ［11］ 吴多荣氧净（OxyplatesTM）厌氧菌培养法的实验室应用［J］中国热带医学，2004，4：617～619

    ［12］ Ptrick RManual of clinical Microbiology［M］7th ed Washington DC:ASM press,19991555～1560

    作者单位：中南大学湘雅医院附属海口医院(海口市人民医院)，海南 海口  570208.