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摘要:目的 探讨氟乙酰胺中毒时血柠檬酸盐和尿氟的动态变化。 方法 经口染毒制备SD大鼠中毒模型，按预实验的LD 50 结果设置高、中、低剂量组（剂量分别为21.50、10.00和4.64mg/kg），利用酶法测定血清柠檬酸盐，氧瓶燃烧和氟电极法测定尿氟，对中毒大鼠进行染毒前、染毒后3h、24h、3d、7d的动态监测。 结果 大鼠染毒后3h的监测点两项生物监测指标均明显升高，其中血柠檬酸盐高剂量组从染毒前（16.0±5.7）mmol/g Cr升至（50.4±13.1）mmol/g Cr，升高了2倍，为3组中升幅最大。尿氟的监测中，高剂量组有机氟也从（1.0±0.3）mg/g Cr升至（9.7±2.4）mg/g Cr、无机氟从（1.1±0.2）mg/g Cr升至（5.1±0.9）mg/g Cr，升高了4～8倍，均为3组中升幅最大;两项生物监测指标均随着中毒时间的延长而逐渐降低，第7d的监测点降至染毒前水平;抽搐、死亡与柠檬酸盐的含量有关。 结论 两项监测指标有较好的敏感性和特异性，共同时应用对氟乙酰胺中毒的临床诊断有重要的参考价值，所采用的方法简便、快速，适合推广应用。
关键词:氟乙酰胺;中毒;柠檬酸盐;尿氟
Study on dynamic levels of serum citrate and urine fluoride in rats exposed to fluoroacetamide.
ZHEN Qiao-ling，HUANG Jian-xun，LI Lai-yu，et al.（Guangdong Provincial Hospital of Occupational Diseases.Guangzhou510300，Guangdong，P.R.China）
Abstract:Objective To explore the dynamic changes in the biological monitoring indicators of serum citrate and urine fluoride in the rats induced by fluoroacetamide. Methods SD rats were exposed via mouth to fiuoroacetamide for making samples.All rats were divided into high dose，medium dose and low dose groups with the dosage of21.50mg/kg，10.00mg/kg，and4.64mg/kg re-spectively through the pre-experiment LD 50 results.The serum citrate was measured by enzyme method，urine fluoride was measured by methods of oxygen flask and fluoride ion selective electrode.Rats were detected with dynamic monitoring study before exposure，3h，24h，on the3rd day and on the7th day after exposure. Results ①The two biological monitoring indicators increased signifi-cantly3h after exposure.The serum citrate level in the high dose group increased significantly with the highest increment among all groups to（50.4±13.1）mmol/g Cr［two times of the original，（16.0±5.7）mmol/g Cr］.The organic fluoride in urine fluoride high dose group also increased significantly from（1.0±0.3）mg/g Cr to（9.7±2.4）mg/g Cr，and the inorganic one increased from（1.1±0.2）mg/g Cr to（5.1±0.9）mg/g Cr，with increment of4to8times of the original.②These two biological monitor-ing indicators decreased slowly with the exposure time，and dropped to the original level before exposure on the7th day.③Convul-sion and death of the animals related to the contents of citrate. Conclusion It was concluded that the application of these two bio-logical monitoring indicators with sensitivity and characteristic have important value for clinical diagnosis of fiuoroacetamide exposure，and the methods are effective，convenient and suitable for popularization.
Key words:Fluoroacetamide;Exposed;Citrate;Urine fluoride
氟乙酰胺（FCH 2 CONH 2 ）是一种高效、剧毒、内吸性强的有机氟杀虫灭鼠剂。由于药性剧毒，对人、畜危害大，国家早已禁止生产和使用。由于近年来投毒、误服等现象增多，致使其急性中毒事故不断发生，且易误诊 ［1～3］ ，但目前尚无简便、特异的生物监测指标。根据氟乙酰胺中毒机制推断，氟乙酰胺进入机体后脱去胺，变成氟乙酸，后者参与三羧酸循环，生成氟柠檬酸，阻断柠檬酸代谢，使三羧酸循环中断，因而被称为“致死性合成”。但柠檬酸在血液中是否升高，尚存在不同意见 ［4，5］ 。为此，根据中毒机制的推断，制备中毒大鼠模型，动态检测其代谢产物—血清柠檬酸盐和尿氟，并观察其变化规律，现将研究结果报告如下。
1 材料和方法
1.1 动物和实验方法 选择健康、体重180～220g的SD大鼠（粤检证第98A033号）制备氟乙酰胺动物急性中毒模型。根据预实验急性经口毒性LD 50 （9.37mg/kg）的结果，设置高剂量组（21.50mg/kg）、中剂量组（10.00mg/kg）和低剂量组（4.64mg/kg），低剂量组染毒6只、中剂量组染毒12只、高剂量组染毒18只，雌雄各半，一次经口染毒，不治疗，染毒后出现抽搐症状时为中毒标志。于染毒前和染毒后3h（高剂量组出现抽搐症状）、24h、3d、7d经眼眶静脉丛采集血样，每只每次0.5ml，用于测定柠檬酸盐;尿样由代谢笼收集，每只每次收集12h尿样，用于测定尿氟，均测定肌酐（Cr）。动物染毒后的3d内，每天用自来水灌胃2次，每只每次2ml。
1.2 观察指标 ①血清柠檬酸盐:酶法测定，按试剂盒说明书进行，测定结果中包含柠檬酸盐和柠檬酸，以柠檬酸盐称呼;②尿氟:以有机氟和无机氟表示。按本室建立的方法 ［6］ ，无机氟用氟电极法测定，有机氟用氧瓶燃烧—氟电极法测定。
1.3 主要试剂和仪器 ①试剂:氟乙酰胺（瑞士Fluka公司产品），柠檬酸测定试剂盒（德国Boehringer Mannheim公司产品）;②仪器:氟离子选择性电极，753BI微机型可见分光光度计等。
1.4 统计学分析 采用t检验、方差分析和Dunnett-t检验。
2 结果
2.1 动物中毒后的表现 初期比较烦躁、尔后活动减少等，3h后，高剂量组部分动物突然出现全身强直性、阵发性的抽搐症状，每次持续约十多秒钟，可反复发作，中剂量组也出现少部分动物抽搐。动物染毒后3h～3d内不进食、不活动、乏力、部分动物眼、鼻眶有血性分泌物，死亡鼠大多死于此期间。存活鼠5d后，多数精神状态好转。低剂量组死亡1只（7d后，雌性），中剂量组死亡6只（雌性4只、雄性2只），高剂量组染毒后24h内全部死亡。
2.2 中毒大鼠血柠檬酸盐动态监测 大鼠中毒后血柠檬酸盐迅速升高，染毒剂量越大升高的幅度越大，升高幅度最少的低剂量组亦比原来增加1倍，存活鼠染毒后24h监测点血柠檬酸盐升至最高，以后逐渐下降，染毒后7d监测点已降至染毒前水平，见表1。
2.3 中毒大鼠尿氟动态监测结果 大鼠中毒后尿氟迅速升高，染毒剂量越大升高的幅度越大，有机氟比无机氟升高的幅度更大，染毒后3h监测点尿氟升至最高，以后逐渐下降，染毒后7d监测点已降至染毒前水平，见表2。
表1 中毒大鼠血柠檬酸盐监测结果（x±s，mmol/g Cr）（略）
Table1 The results of determination of serum citrate in poisoned rats（x±s，mmol/g Cr）
表2 中毒大鼠尿氟监测结果（x±s，mg/g Cr）（略）
Table2 Results of determination of fluoroacetamide urine（x±s，mg/g Cr）
2.4 抽搐、死亡鼠的柠檬酸盐含量 在中剂量组的个体观察中，染毒后3h初次出现抽搐症状的中毒鼠血柠檬酸盐含量比自身染毒前升高1.5倍以上，此后还继续升高至24h检测点为高峰;染毒后24h检测点柠檬酸盐的含量高出染毒前3倍者100%死亡。
3 讨论
3.1 染毒后两项监测指标的水平变化明显，动物中毒模型制作成功，本文的动态监测结果表明，染毒后两项监测指标在短时间内急剧升高，3h或24h监测点已升至高峰，尔后缓慢下降，第7d基本恢复到染毒前水平。两项监测指标水平的明显变化和动物中毒后的抽搐等典型症状的出现，表示动物中毒模型制作成功，引用此数据作分析推断可靠。
3.2 监测指标的应用价值 本实验中，高剂量组出现的中毒症状严重、死亡率高，两项检测指标随着剂量的增加而增升高，是特异性的表现;染 （下转第469页）（上接第438页） 毒后3h的检测点两项指标已有成倍的升高，表明检测指标具有敏感性。理论上，人类正常的日常生活中是不存在和氟乙酸结构相似的物质，因此，在临床上若此两项代谢产物的监测指标同时增高，对氟乙酰胺中毒的诊断有较大的特异性。据报道，人口服氟乙酰胺急性毒性LD 50 为2～10mg/kg ［5］ ，与大鼠经口急性毒性的LD 50 较接近，我们于近期对氟乙酰胺中毒4d后的3例患者检测这两项指标均明显增高，发病中和病愈后分别为:血柠檬酸盐（41.7±14.2）和（15.4±4.0）mmol/g Cr，尿氟中有机氟（6.7±2.4）和（0.8±0.4）mg/g Cr、无机氟（4.2±1.5）和（0.9±0.4）mg/gCr，差异均有显著性（P<0.01），因此，这两项具有特异性和敏感性的监测指标，利用于对人氟乙酰胺中毒时的监测诊断，具有重要的参考价值。
3.3 中毒机制的进一步探讨 本文的结果表明，氟乙酰胺进入机体后，生成氟柠檬酸盐，阻断柠檬酸盐代谢，使三羧酸循环中断，血液中的氟柠檬酸盐大量聚集，可检测到柠檬酸盐显著升高。氟乙酸、氟柠檬酸盐对神经系统有直接刺激作用，可能是引起抽搐的主要因素之一，抽搐的反复发作，进行性加重是致死的主要原因。本文的结果还显示，中毒鼠初次出现抽搐时柠檬酸盐含量比自身染毒前约高出1.5倍，此后还继续上升，表明血中柠檬酸盐的含量达一定程度时可引起抽搐;染毒后24h柠檬酸盐含量高出自身染毒前3倍的中毒鼠100%死亡，表明柠檬酸盐的含量与抽搐和死亡都有很大的关系。
本文较系统地研究了大鼠氟乙酰胺中毒后血柠檬酸盐和尿氟的变化情况。研究结果验证了中毒假说机制，同时为中毒机制的进一步完善提供了实验资料。研究结果对氟乙酰胺中毒的临床诊断有重要的参考价值，所采用的方法简便、快速，适合推广应用。
参考文献:
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［5］朱子扬，龚兆庆，汪国良.中毒急救手册［M］.第3版.上海:上海科学技术出版社，1996，945～948.
［6］郑巧玲，李来玉.氧瓶燃烧—电极法测定尿中无机氟和有机氟［J］.中国职业医学，2000，27（6）:42～43.
基金项目:广东省医学科研基金资助（No.961903）
作者单位:广东省职业防治院，广东广州 510300.