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Experimental study on the toxicology of Bee Propolis capsule.
ZHENG Ding-xian，ZHAO Yu-mei，HUANG Ye-yu，et al.
（Hainan Provincial Center for Disease Control and Prevention，Haikou570203，Hainan，P.R.China）
摘要:目的 对蜂胶软胶囊的食用安全性进行毒理学实验评价。 方法 采用急性毒性试验、遗传毒性试验（Ames试验、小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验）和30d喂养试验进行检测评价。 结果 雌雄小鼠经口LD 50 均大于20.0g/kg体重，Ames试验、小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验三项遗传毒性试验结果均为阴性。30d喂养试验未见试验大鼠的生长发育、血液学、生化、脏体比及组织病理学有异常变化。 结论 蜂胶软胶囊急性毒性分级属无毒级、无遗传毒性，初步估计最大无损害作用剂量大于3.33g/kg体重，相当于人体推荐摄入量的100倍。
关键词:蜂胶软胶囊;急性毒性;遗传毒性;最大无损害作用剂量;食用安全性
蜂胶是蜜蜂用从植物幼芽与树干上采集来的树脂混入它的上颚腺分泌物和蜂蜡等加工而成的一种具有芳香气味的胶状固体物质。蜂胶的成分相当复杂，其中有多种很强的生理活性物质。不同地区的蜂胶所含化合物的种类和数量差别很大，因此具有不同的生理活性 ［1］ 。海南某企业拟开发蜂胶作为保健食品，为了确保食用安全，我们对其开发生产的蜂胶软胶囊进行了第一、二阶段的毒理学实验。
1 材料和方法
1.1 材料 蜂胶软胶囊，660mg/粒（每粒含内容物500mg）。内容物呈棕褐色粘稠状，人体推荐摄入量为每日2.0g/60kg体重（2粒/次，2次/d），由海南某企业提供。以植物油为溶剂配制成所需浓度供小鼠急性毒性试验、小鼠骨髓微核试验、小鼠精子畸形试验、30d喂养试验用，以吐温80为助溶剂配制成乳液供Ames试验使用。
1.2 实验动物 BALB/CICRC57小鼠和SD大鼠，合格证号:沪动合证字153号和152号，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供。SPF动物房，合格证号:医动字第30-024号。
1.3 方法
1.3.1 急性毒性试验 选雌雄小鼠各10只（18.0～22.0g），实验前隔夜禁食（16h），不禁水。剂量为20.0g/kg体重，灌胃容量为20ml/kg体重，给药后观察1wk，记录中毒表现及死亡情况，判定其最大耐受量（MTD），按毒性分级标准评价其急性毒性强弱。
1.3.2 遗传毒性试验
1.3.2.1 小鼠骨髓微核试验 选小鼠50只（25.0～30.0g），随机分为5组，雌雄各半。设2.5g/kg、5.0g/kg和10.0g/kg体重3个剂量组、溶剂对照组（植物油）及阳性对照组（环磷酰胺40mg/kg体重）。灌胃给药2次（灌胃容量20ml/kg体重），间隔24h，于末次给药后6h处死动物，取股骨常规制片、镜检，每鼠计数1000个骨髓嗜多染红细胞（PCE），观察含微核的细胞数并统计微核率（‰）。
1.3.2.2 小鼠精子畸形试验 选雄性小鼠25只（25.0～31.5g），随机分为5组，每组5只。设2.5g/kg、5.0g/kg和10.0g/kg体重3个剂量组、溶剂对照组（植物油）及阳性对照组（环磷酰胺40mg/kg体重）。灌胃给药（灌胃容量20ml/kg体重），连续给药5d。于第35d处死动物，取两侧附睾按常规制片、镜检。每鼠计数1000个精子，记录精子畸形数并统计畸形率（%）。
1.3.2.3 Ames试验 采用平板掺入法，选鼠伤寒沙门菌突变型菌株TA 97 、TA 98 、TA 100 和TA 102 ，样品有效成分含量25%，实验时各剂量组样品含量为32μg/皿、160μg/皿、800μg/皿、4000μg/皿、20000μg/皿，同时设未处理对照组、溶剂对照组（5%吐温-80）及阳性对照组，在加与不加S 9 混合液的条件下进行实验，阴性结果重复测试一次。
1.3.3 30d喂养试验 选SD大鼠80只，其中雄性40只，体重为（113.0±5.8）g;雌性40只，体重为（103.9±8.7）g。将实验动物随机分为4组，每组20只，雌雄各半。设3个剂量组（0.84g/kg、1.67g/kg和3.33g/kg体重，相当于人体推荐摄入量的25、50和100倍）和溶剂对照组（植物油）。以10ml/kg体重的灌胃量，每天灌胃一次，连续30d。每天观察动物的一般状况、有无中毒表现和死亡;每周称体重和饲料，计算增重、进食量和食物利用率;实验结束采血测定血常规、生化指标和进行组织病理学检查。
1.3.4 实验数据的分析与处理 全部数据采用SPSS软件包进行统计处理（小鼠精子畸形试验用Wilcoxon秩和检验，微核试验用双侧t检验，其余用单因素方差分析）。
2 结果
2.1 急性毒性试验 实验期间，动物进食和饮水正常，生长发育良好，未见明显中毒反应、无一死亡。雌雄小鼠经口MTD大于20.0g/kg体重，属无毒级。
2.2 遗传毒性试验
2.2.1 小鼠骨髓微核试验 经双侧t检验，各剂量组雌雄小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率与溶剂对照组比较，差别无显著性（P>0.05）;而阳性对照组微核率与溶剂对照组比较差别具有高度显著性（P<0.01）。
2.2.2 小鼠精子畸形试验 经Wilcoxon秩和检验，各剂量组精子畸形率与溶剂对照组比较差别无显著性（P>0.05），而阳性对照组精子畸形率与溶剂对照组比较差别具有高度显著性（P<0.01）。
2.2.3 Ames试验 各剂量组的回变菌落数均未超过未处理对照组的2倍，而阳性对照组的回变菌落数均超过未处理对照组的2倍。
2.3 30d喂养试验
2.3.1 一般表现 实验期间，各组动物行动灵活，反应敏捷，被毛整洁，目光有神，眼鼻口无分泌物，进食饮水正常，生长发育良好，均未见明显中毒反应，无一死亡。
2.3.2 对大鼠体重、增重、进食量、食物利用率的影响 经方差分析，各剂量组雌雄鼠始重、第1～4wk体重、增重、进食量和食物利用率与对照组比较差别无显著性（P>0.05）。见表1。
表1 蜂胶软胶囊对大鼠食物利用率的影响（略）
2.3.3 血常规检查结果 雌雄大鼠各剂量组血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数及其分类与对照组比较差别无显著性（P>0.05）。
2.3.4 血液生化检查结果 由表2可见，雌雄鼠各剂量组血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三酯、血糖、总蛋白、白蛋白与对照组比较差别无显著性（P>0.05）。
表2 蜂胶软胶囊对大鼠生化指标的影响（略）
2.3.5 病理检查 各剂量组动物解剖大体观察未见异常变化;肝体比、肾体比、脾体比和睾体比或卵体比与对照组比较差别无显著性（P>0.05）;病理学检查可见，镜下高剂量组雌鼠1例肝脏炎症细胞浸润，对照组雌鼠1例肝细胞空泡变，其余肝脏浆膜完整，中央静脉、肝小叶、门管区结构清楚，肝细胞索围绕中央静脉呈放射状排列;肾脏被膜完整，皮质肾小球、肾小囊结构清楚，肾小管排列规则;胃肠浆膜、肌层、粘膜、粘膜下层结构清楚;脾被膜完整，红髓、白髓结构清楚;睾丸白膜完整，可见各级生精细胞;卵巢白膜完整，可见各级卵泡。
3 讨论
蜂胶是一种天然的活性物质，具有多种生物学功能 ［2～4］ ，已广泛地应用于医药、化工、食品、美容等领域。蜂胶的提取工艺非常复杂，生产过程中有很多的污染机会。为确保蜂胶软胶囊食用安全，依据卫生部《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版） ［5］ 的规定，我们选择了一组试验检测蜂胶软胶囊的急性毒性、遗传毒性和无损害作用剂量。实验结果表明，蜂胶软胶囊雌雄性小鼠经口LD 50 大于20.0g/kg体重，根据急性毒性分级标准，属无毒级;小鼠精子畸形试验、Ames试验、小鼠骨髓微核试验三项遗传毒性试验结果均为阴性;30d喂养试验显示大鼠体重、总食物利用率、血常规、血液生化指标、脏体比以及肝、肾、脾、胃、十二指肠、睾丸和卵巢的病理组织学检查均未见异常改变。初步估计蜂胶软胶囊的最大无损害作用剂量大于3.33g/kg体重，相当于人体推荐摄入量的100倍。综上所述，蜂胶软胶囊在本实验研究剂量范围内是毒理学安全的保健食品。
参考文献:
［1］周静，王飞飞，俞美香，等.巴西蜂胶化学成分的研究及安全性评价［J］.食品科学，2005，26（10）:236～239.
［2］侯晓薇.在模拟口腔条件下对蜂胶防齿作用的研究［J］.中国生物医学工程学报，2003，22（2）:55～58.
［3］崔桂友.蜂胶中具有抗氧化活性的木脂素［J］.食品科学，2002，23（12）:117～120.
［4］毛咣明，徐彩菊.等.皇浆蜂胶对小鼠免疫功能的影响［J］.实用预防医学，2002，9（5）:559～560.
［5］中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范［S］.2003.