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摘要:目的 研究Fas在人体大肠癌及癌旁组织中的表达。 方法 应用SP免疫组化方法（链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法）对49例大肠癌及癌旁组织中的Fas基因的表达进行检测。 结果 凋亡基因Fas在大肠癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织（P<0.05），且高分化腺癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织（P<0.05），但在不同分级的大肠癌及其癌旁组织之间的阳性率无明显差异。 结论 分化低的大肠腺癌癌旁组织中的细胞凋亡活动较活跃，有利于肿瘤的浸润与破坏。
关键词:大肠癌;凋亡基因;Fas免疫组化
The expression and significance of apoptotic genes Fas in large intestine cancer and neighboring tissues.
ZHANG Ji-hong，SUN Bo，JIANG Jing，et al.
（Affiliated Hospital of Beihua University，Jilin132001，Jilin，P.R.China）
Abstract:Objective To investigate the expression of Fas in colonic cancer and near-by tissues. Methods The expression of Fas genes in colonic cancer and near-by tissues of49cases was determined by applying a method of SP immunohistochemical（streptomycin avidin-peroxidase connection）. Results The results revealed that the positive expressive rate of apoptotic genes Fas in cilonic cancer was higher than in near-by tissues（P<0.05）and the expression rate in the tissuesof well-differentiated adenocar cinoma was also higher than that in the near-by tissues（P<0.05）.The positive rate in colonic cancers of different grade was not significafltly different from that in their near-by tissues. Conclusion The apoptosis cells are more active in the near-by tissues of colonic adenocarcinoma of low-differentiation，which is in favour of infiltroition and diffusion of tumor.
Key words:Colonic cancer;Apoptotic genes，Fas;Immuno histochemistry
Fas抗原（CD95）是一种膜受体，属于TNFR/NGFR家族成员，表达于多种类型的细胞表面。即往的研究表明，Fas广泛表达于胸腺细胞、活化的T/B细胞、NK细胞、单核细胞等免疫细胞表面，是介导细胞凋亡、维持细胞数量稳定的重要分子。现已证明，肿瘤的发生与发展，与凋亡调控过程有密切关系，而凋亡调控基因目前至少可以分为两大类，即凋亡抑制基因和促凋亡基因，其中Fas为促凋亡基因的重要成员之一，然而，关于Fas与肿瘤关系的研究报道甚少，本文所做的是关于Fas与大肠癌及癌旁组织关系的研究。
1 材料与方法
1.1 标本 为北华大学附属医院近1年来的手术切除标本及镜检标本（以手术切除标本为主）共49例，其中结肠癌30例，直肠癌19例，男性19例，女性30例;平均年龄男性57.5岁，女性56.3岁。根据WHO病理分类标准分为高分化腺癌15例，中分化腺癌19例，低分化腺癌5例，黏液腺癌10例。标本均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，切片厚4μm，分别做HE染色及免疫组织化学染色。
1.2 试剂 鼠抗人Fas单克隆抗体及SP试剂盒（过氧化酶标记的链霉卵白素染色试剂盒）（Strptavidin/ peroxidase），材料购置于中山生物技术有限公司。
1.3 实验与方法 采用链霉菌抗生物素-过氧化物酶连接法（SP法）已知阳性切片作为阳性对照，PBS代替第一抗体作为阴性对照。实验步骤按照SP试剂盒说明进行。Fas工作浓度为1:100，检测需进行微波抗原修复，加一抗后将切片置4℃过夜，加生物素标记的二抗和辣根酶标记的链酶卵白素工作液，用DAB显色，显微镜下观察显色结果。
1.4 结果判断标准 以胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性细胞。
1.5 统计学处理 不同分级大肠癌及癌旁Fas表达阳性率用χ 2 校正检验及Fisher精确概率检验法（T<1，n<40），P<0.05为相差显著。
2 结果
癌组织Fas阳性率比癌旁组织高（χ 2 =4.048，P<0.05），但在不同分级的大肠癌之间其阳性率无明显差异，且不同分化腺癌的癌旁组织Fas表达亦无明显差异，从不同分化大肠癌与其癌旁组织比较（P<0.05），而中、低分化腺癌及黏液腺癌与癌旁组织之间无明显差异。见表1。
表1 49例大肠癌及癌旁组织中Fas的表达（略）
3 讨论
Fas与神经生长因子受体、CD40等同属于肿瘤坏死因子受体家族 ［1］ ，当其配体（FasL）与其结合后便引起细胞凋亡，既程序性细胞死亡（Programmed cell death PCD）是由基因或其他一些因素调控的活细胞自我消亡过程。这一过程的紊乱与许多疾病发生发展有关，与肿瘤发生发展的关系尤为密切。近年来，人们十分重视Fas与疾病关系的研究。骆抗先等以原位杂交平行检测肝细胞病毒感染和Fas表达，两者的强度和分布并一致，说明Fas表达未必与感染一致 ［2］ 。在Fas与疾病的研究同时，有的人把目光投向了Fas的临床应用研究，夏成青等在人类同种异体肾组织中的研究中，提示Fas的表达可能与排斥反应有关，且可能与排斥反应的类型无关 ［3］ 。Matsuno等发现肾移植1h后中Fas即有中到重度表达，以后随着排斥反应严重程度加重，Fas的表达水平也越来越高 ［4］ 。Fas（Apo-1CD95）是一种48KD单链穿膜蛋白，表达于记忆T细胞、活化的T/B细胞、NK细胞和未分化胸腺细胞。Fas在肿瘤中的表达一直是其研究的重点。Strand等研究了22例肝细胞癌患者的CD95系统，所有的肝细胞癌已经部分或全部失去了基本由正常肝细胞表达的CD95的表达，并因此而逃避了CD95介导的杀伤作用 ［5］ 。本人在人大肠癌及其癌旁组织Fas的表达情况中发现不同分级大肠癌的Fas阳性表达率无显著性差异，但值得注意的是，癌组织Fas阳性率明显高于癌旁组织，且高分化腺癌及其癌旁组织的Fas表达阳性率有明显差异（P<0.05），中、低分化腺癌及粘液腺癌Fas阳性表达率与癌旁组织无显著性差异。而彭绍华等对Fas在不同分级及肿瘤是否转移关系上的研究，结果发现53.1%大肠癌Fas抗原表达阳性，且高分化腺癌和未分化癌Fas抗原阳性表达率明显低于分化差癌和转移癌，其认为Fas抗原与大肠癌分化程度、生物学行为及预后有密切关系，Fas抗原阳性者可能其恶性程度高和预后不良 ［6］ 。本人的研究结果提示，分化高的大肠癌组织旁的细胞凋亡活动相对较差，而分化差的癌组织旁的细胞凋亡活动相对活跃，这样有利于肿瘤的局部浸润和播散。而就大肠癌组织本身来讲，Fas的表达与肿瘤的恶性程度无关。Fas作为促凋亡基因的重要成员之一，在大肠癌组织的高表达是否可以认为与大肠癌的普遍预后较好有关，这一结论在今后的研究中尚需得到证实。
参考文献:
［1］Shima Y，Nishimoto N，Ogata A，et al.Myeloma cells express Fas antigen/APO-1（CD95）bet only some are senitive to anti-Fas antibody resulting in apoptosis［J］.Blood，1998，85:757～764.
［2］Nambu Y，Hughes SJ，et al.Lack of cell surface Fas/APO-1experssion in pulmonary adenocarcinomas［J］.J Clin Invest，1998，101（5）:1102～1110.
［3］夏成青，赵宏颖.Fas与FasL在人类同种异体移植肾组织中的表达及意义［J］.肾脏病与透析肾移植杂志，:2000.7（4）:320～322.
［4］Matsuno T，Sasaki H，Nakagawa K，et al.Fas antigen expression and apopto-sis in kedney allogreft［J］.Transplant Proc.1999，29:177.
［5］ Strand S，Hofmann WJ，Hug H，et al.Lymphocyte apoptosis induced by CD95（APO-1/Fas）ligand-erpressing tumor cell a mechanism of immune evasion?［J］.Nature Medicine，1998，2:1361～1366.
［6］彭绍华，杨剑锋.大肠癌组织Bax蛋白和Fas抗原表达及意义［J］.中国现代医学杂志，1998，8（9）:46～47.