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【摘要】 目的 探讨减少血小板细菌污染的方法,以提高临床输注血小板的安全性。 方法 首先采用血液采集前采血器材的检查、采血环境的严格消毒及献血者严格筛选，同时改进献血者进针区皮肤消毒方法和对手工血小板去除白细胞；其次去除最初采集的部分血液，再进行血小板输血前细菌培养检查三种预防措施来减少血小板污染。另采用法国生物梅里埃公司BacT/Alert 120细菌监测系统进行需氧瓶及厌氧培养瓶细菌培养，培养阳性者转种培养，转种培养阳性者进行细菌鉴定。 结果 采取预防措施后，手工混合血小板细菌污染率由0.72%降低至0.45%(P<0.01)，单采血小板细菌污染率由0.47%降至0.23%(P<0.01)，总的细菌污染率由0.62%降至0.29%(P<0.01)。 结论 采取预防措施，可减少血小板细菌污染，对提高临床血小板输注安全具有重要意义。
【关键词】 血小板 细菌 污染 预防 输血
Measures of preventing contamination of blood platelets with bacteria and clinical application.
LIU Fu-ping, LIU Ren-qiang, YE Zhu-jiang, et al.
(Dongguan Municial Blood Center, Dongguan 523930, Guangdong, P. R. China)
Abstract：Objective To explore the way in reducing contamination of blood platelet with bacterium for enhancing the safety in clinical use of platelet. Methods Three precautionary measures were taken including examining blood donor equipments, sterilizing blood donation environment, screening blood donors strictly and depleting white blood cells from pooled platelets; excluding some initial collected blood, performing bacterial culture before platelets transfusion; the positive samples were subcultivated and identiufied for bacteria if it was positive in aerobic cultivation or anaerobic culture with BacT/Alert 12 monitoring system. Results The rates of bacterial contamination in pooled platelets were decreased from 0.72% to 0.45%(P<0.01), the rates of platelets pheresis were from 0.47% to 0.23%(P<0.01) and the total rates of contamination was decreased from 0.62% to 0.29%(P<0.01). Conclusion Precautionary measures can reduce bacterial contamination of blood platelet and it is of significance in enhancing the safety of clinical poleatelet transfusion.
Key words：Platelet; Bacterial contamination; Precautionary measures; Transfusion
血小板制品的细菌污染问题日益受到关注并成为输血安全的重要课题［1］。国外的研究表明血小板的细菌污染率为1：1000～1：3000［2］，混合血小板细菌污染率为0.24%～0.84%［3,4］,输注每单位血小板可能产生细菌感染的风险估计是传播HIV-1/2、HCV、HBV和HTLV-Ⅰ/Ⅱ风险总和的50～250倍［5］。以往的研究显示手工混合血小板细菌污染率为0.72%，单采血小板细菌污染比例为0.47%［6］，但临床调查未出现发热、寒颤、血压降低、休克等败血症表现。在美国，估计是受污染血液发生率的1/4～1/10［7］。因此，美国血库协会（AABB）在《血站和输血机构标准》（第22版）中要求血站和血库采取措施减少血小板制品的细菌污染,并要求对血小板制品做细菌检测。根据实际情况，我们从2003年对手工混合血小板及单采血小板全部进行单人份细菌培养，对血小板的细菌污染问题和采取预防措施减少血小板细菌污染进行了研究，现将情况报道如下。
1 材料与方法
1.1 实验仪器与材料 BacT/Alert 120全自动细菌培养仪及需氧瓶（BacT/Alert Culture Bottle BPA）、厌氧瓶（BacT/Alert Culture Bottle BPN）为法国生物梅里埃（bioMeriux）公司产品，超净工作台，无菌注射器，美国FORMA血小板恒温振荡保存箱，消毒液、带15ml留样袋的三联采血袋等。细菌鉴定结果由东莞市人民医院提供。
1.2 样本来源 2006年1月～2007年3月，收集制备的手工混合血小板665例和单采血小板1 755例。
1.3 输血前细菌培养及鉴定 单采血小板采集后放(22±2)℃振荡保存，24h后混匀留样15ml于样品袋中；手工混合血小板（7～9袋混合）根据临床需要汇集过滤去除白细胞，留样15ml于样品袋内，在需氧瓶（BacT/Alert Culture Bottle BPA）和厌氧瓶（BacT/Alert Culture Bottle BPN）各接种4ml样品，以BacT/Alert 120全自动细菌培养仪进行细菌培养，余下的样品热合保存，在细菌培养阳性后再接种培养鉴定。细菌培养6h后仪器未显示细菌生长即可发往临床使用，继续观察到7d仍未显示细菌生长者细菌培养阴性。在培养期间任何时间显示阳性结果，均进行转种及重新取样培养，转种培养仍为阳性者，送东莞市人民医院进行细菌鉴定。
1.4 无症状菌血症献血者的筛查 血液采集前认真检查采血器材和加强采血环境消毒，防止因采血器材破损或采血环境消毒不严引起细菌污染，献血前测量体温，认真填写献血健康征询表，询问病史和严格体检，单采血小板采前作白细胞计数及分类，排除菌血症和潜在的菌血症献血者，避免血液引起感染。
1.5 改进献血者进针区皮肤消毒方法 2006年前实施对献血者进针区皮肤消毒采用安尔碘消毒液消毒2次（消毒时间约1min）；2006年改用2%碘酊消毒后（待干约1min），75%酒精脱碘消毒，观察消毒效果。
1.6 白细胞去除对血小板细菌污染的影响 对手工混合血小板用美国PALL血小板去白细胞过滤器进行过滤去除白细胞后，留样进行细菌培养，观察血小板白细胞去除对血小板细菌污染的影响。
1.7 去除献血者最初采集的血液 采用一种在采血针附近带有1个15ml血样收集袋的三联采血袋，将血液穿刺后流出的最初15ml血液收集在样品收集袋内，进行细菌培养，观察去除最初采集的15ml血液后细菌污染情况的变化。
1.8 统计学分析 对采取预防措施前后血小板细菌污染率的比较采用Poisson分布u检验进行统计分析。
2 结果
2.1 同时采取1.4、1.5、1.6的预防措施后，手工混合血小板与单采血小板细菌培养结果见表1。
表1 手工混合血小板与单采血小板细菌培养结果（略）
注:2例转种阳性，1例阴性；4例转种阳性，5例转种阴性。
2.2 去除献血者最初采集的15ml血液后，手工血小板与单采血小板细菌培养结果见表2。
表2 去除献血者最初采集的血液后，手工血小板与单采血小板细菌培养结果（略）
2.3 2006年未采取预防措施前与采取预防措施后血小板细菌污染比较结果见表3。
表3 2006年采取预防措施前后细菌污染结果比较（略）
注:u=32.82,P<0.01; u=107.69,P<0.01;u=150.73,P<0.01。
3 讨论
血小板输注中细菌污染是一个仍未完全解决的难题。造成血液细菌污染源包括献血者、穿刺处的皮肤、周围环境、采血器材以及采供血过程。皮肤上的细菌进入血液主要是因为采血针在穿刺皮肤时，针的空腔造成皮肤栓子或组织碎片，由此将细菌带入血液。由于血小板在20℃～24℃振荡保存，细菌容易生长繁殖，血小板制品细菌污染明显增加。因此，于2003年对血小板的细菌污染情况和采取预防措施减少血小板细菌污染进行研究。结果显示手工混合血小板细菌污染率为0.72%（7～9人份混合），单采血小板细菌污染率为0.47%，总的细菌污染率为0.62%，污染的细菌主要是皮肤表面的葡萄球菌、棒状杆菌、革兰阳性杆菌等普通细菌。2006年起主要是采取无症状菌血症献血者的筛查，改进献血者进针区消毒方法，去除手工混合血小板中白细胞等措施［8～10］，从表1可见，手工混合血小板细菌污染率为0.62%，单采血小板细菌污染率为0.36%，血小板细菌总污染率为0.42%。手工混合血小板初筛阳性，细菌污染率比以前增加，主要是2006年8月血小板细菌检测改由另一部门完成，由于培训不够，经验不足，操作不规范，1个月内有8例细菌培养阳性，其中传代培养为假阳性5例，1例未作鉴定，导致细菌污染率增加，但总的细菌污染率为0.42%，与2005年细菌污染率相比差异有显著性（P<0.05）。2006年11月，对分离手工浓缩血小板的全血和单采血小板去除最初流出的15ml血液，观察血小板细菌培养结果，从表2可见，手工混合血小板细菌污染率为0.28%，单采血小板未发现细菌污染，血小板细菌总污染率为0.10%，与前面比较，细菌污染率存在显著差异，细菌污染大大降低，因此去除最初的15ml血液对预防血液细菌污染，提高血小板输注安全性有重要意义［11］。
2006～2007年3月，对制备少白细胞混合血小板665份，单采血小板1 755份，其中血液发出后细菌培养确认有菌生长共7例，对临床情况进行跟踪未出现发热、寒颤、心率加快、血压降低、继发恶心、呕吐、腹泻、少尿、休克、呼吸系统症状和严重危及生命的反应。因为血小板输血引发的败血症的危险程度很难估计，大多接受血小板的病人病情危重，在输血小板时，有相当一部分病人接受了抗生素治疗。另外，许多发热反应被误认为是非溶血性发热反应，或是病人潜在疾病造成的，因而部分掩盖了败血症的症状，而没有进行彻底的调查。
综上所述，对血小板细菌污染及采取相关预防措施，可以大大减少血小板细菌污染，但仍无法避免采供血过程中的细菌污染，加之采血后抑制细菌生长的技术有限，因此在输注前对血小板进行细菌筛查，将受污染的血小板及时检出或及早发现并采取应急措施是减少血液细菌污染危险的重要措施。2002年AABB推荐了几种筛查方法，包括pH检测、革兰氏或吖啶染色显微镜检、取样细菌培养。其中bioMeriux BacT/Alert 全自动细菌培养系统和Pall BDS细菌检测系统对血小板细菌检测其灵敏度和可靠性是目前所有检测方法中最高的。但血小板细菌筛查必须达到一定的敏感性和特异性，同时应考滤可操作性和成本。一般认为，如果在保存期取样，推存采用最灵敏的方法，在输注前几小时取样，应采用快速的方法，但其灵敏度较低，如何做到两者兼顾有待进一步研究。
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作者单位：东莞市中心血站，广东 东莞 523930.