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【关键词】 金黄色葡萄球菌；食物中毒
Tracing of origin of a food poisoning due to Staphylacoccus aureus.
ZHANG Le-yi, JIANG De-mei, LI Yi.
（Wenzhou Municipal Center for Disease Control and Prevention, Wenzhou 325000, Zhejiang, P. R. China）
2006年9月，市区某小学发生了一起由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒，我们在常规培养的同时，对该起食物中毒进行了溯源检测。先运用小型VIDAS设备检测样品中的金黄色葡萄球菌肠毒素，证实样品中有金黄色葡萄球菌肠毒素存在，进一步用PCR对其进行分型。结果在引发食物中毒的食品的生产厂家的两名工人咽拭子中分离检测到与病人同一型别的金黄色葡萄球菌肠毒素。由此对本次食物中毒的原因有了一个较圆满的解释。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 试剂 金黄色葡萄球菌分离鉴定用国产试剂。VIDAS SET2试剂由法国生物梅里埃公司提供。Taq酶购自宝生物工程（大连）有限公司。引物等其他PCR试剂购自上海生工公司。
1．1．2 引物的设计与合成根据张严俊等报道［1］，合成扩增SEA、SEB、SEC、SED、SEE基因的PCR引物，扩增产物大小分别应为257、478、317、482、350bp。
1．2 方法
1．2．1 标本采集 样品包括食物中毒当天的剩余食品3份（其中一份是鱼饼），呕吐物2份。溯源调查采集的样品包括事发第二天厂家生产的食品（鱼饼）及3名食品加工人员的咽拭子。
1．2．2 菌株分离鉴定 按《食品卫生微生物检验》（GB4789.10-2003）进行，根据菌落形态、溶血、革兰氏染色、镜检、血浆凝固酶、生化反应特性来判定。
1．2．3 金黄色葡萄球菌肠毒素测定 当天食品及呕吐物用7.5%NaCl肉汤增菌液增菌10h后，直接吸取0.5ml于VIDAS Staph（SET2）试剂条，再按VIDAS操作手册测定。VIDAS Staph（SET2）是用VIDAS自动化设备进行酶联荧光免疫分析测肠毒素A、B、C、C1、C2、C3、D、E、H血清型。溯源调查的样品（包括食品及咽拭子标本）均是从分离出的菌株经肉汤增菌进行毒素测定的（菌株由区疾控中心分离得）。
1．2．4 PCR定性测肠毒素型别 取金黄色葡萄球菌培养物于1ml的三蒸水中，100℃15min煮沸后，10 000r/min 离心2min，取上清液为PCR反应模板。
2 结果
3份食品经分离培养证实了从鱼饼中分离到金黄色葡萄球菌，且经VIDAS Staph检测出金黄色葡萄球菌肠毒素阳性。1份呕吐物检出金黄色葡萄球菌，肠毒素阳性。厂家的溯源样品中，1份鱼饼检出金黄色葡萄球菌且肠毒素阳性，3份咽拭子标本检出两份金黄色葡萄球菌且肠毒素阳性。PCR结果：鱼饼、咽拭子标本中的金黄色葡萄球菌的肠毒素均为A型肠毒素。
3 讨论
金黄色葡萄球菌是引起食物中毒的一种重要细菌。在美国金黄色葡萄球菌引起的食物中毒仅次于大肠杆菌引起的食物中毒，位居第二位，占细菌性食物中毒的33％［2］。病原菌仅限产肠毒素性金黄色葡萄球菌，主要以SEA-SEC等5种血清型为主（75％），以A型肠毒素最常见。健康人的咽喉、鼻腔、皮肤、头发等常带有产肠毒素（SEs）的菌株，易经手或空气污染食品，而引起食物中毒。金黄色葡萄球菌引起的食物中毒在我市的食物中毒中也是最常见的。2005年发生5起，2006年连续发生3起。在基层实验室由于受实验条件的限制，在对金黄色葡萄球菌引起的食物中毒的判定时，往往仅根据集体发病症状、可疑食物，且在食物中或在患者标本中检出金黄色葡萄球菌就做出判定。而在金黄色葡萄球菌食物中毒判定标准中［3］，规定必须在食品中检出肠毒素或从中毒食品、呕吐物中培养出金黄色葡萄球菌，且其菌株检出同一型别肠毒素或不同呕吐物中检出金黄色葡萄球菌，其肠毒素为同一型别时才能判定为金黄色葡萄球菌食物中毒。监督部门在许多时候由于受条件限制也没进一步溯源，多数认为是食物在二次加工中污染，然后对工厂卫生提出整改意见。在这次的食物中毒调查中，我们对生产厂家工人咽拭子进行了培养，结果居然在工人的咽部培养出金黄色葡萄球菌且肠毒素阳性。肠毒素在一般的温度加热不被破坏，使食物污染后而引发食物中毒。在调查过程中我们还发现，工厂里用食品包装袋包装的鱼饼检出了金黄色葡萄球菌及肠毒素，而散装的未检出金黄色葡萄球菌，也证实了是由于包装过程中鱼饼受到了人为的污染。我们在本市食品污染物调查中发现，市场上的熟食的金黄色葡萄球菌的污染率达17.14%（6/35），产肠毒素率达36.33%，在各类食品中污染率居第一。扬州市食源性调查中也表明［4］，熟食中金黄色葡萄球菌的检出率达3.13%，产肠毒素率为58.33%。由此可见熟食的卫生问题不容忽视，对这些行业从业人员更要加强管理，提高卫生意识，必须强制生产和销售食品的从业人员在工作时戴口罩及手套，以防止污染减少食物中毒发生。对于金黄色葡萄球菌食物中毒的检测，我们现在建立的快速方法是，对食品或呕吐物通过提取肠毒素或通过7.5%NaCl增菌后直接用VIDAS检测,3～10h可出初步结果，肛拭标本增菌后再检测，同时直接划帕克平板分离培养，或7.5%NaCl肉汤增菌后划平板分离目标菌，检测出肠毒素后，运用PCR对肠毒素作出分型。
【参考文献】
［1］ 张严俊，张俊彦，梅玲玲，等.金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分型和分布［J］.中国卫生检验杂志,2005,15（6）:682～684.
［2］ 王赞信，张俊彦，朱敏，等.一起食物中毒金黄色葡萄球菌肠毒素基因的检测［J］.中国卫生检验杂志,2006,16（6）:665～666.
［3］ 中华人民共和国卫生部.葡萄球菌食物中毒诊断标准及处理原则WS/T80-1996［S］. 1999.
［4］ 巢国祥，焦新安，周丽萍，等.食源性金黄色葡萄球菌流行特征、产肠毒素特性及耐药性研究［J］.中国卫生检验杂志,2006,16（8）:904～906.
作者单位：温州市疾病预防控制中心， 浙江 温州 325000； 温州市瓯海区疾病预防控制中心， 浙江 温州 325000.