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【摘要】 目的 建立头孢西酮钠含量测定及有关物质测定的HPLC法。 方法 反相高效液相色谱法，流动相：0.2mol/L的磷酸二氢钾：乙腈=85：15； 检测波长为280； 流速为1ml/min；进样量：20μl。 结果 头孢西酮钠在0.0804～0.294mg/ml浓度范围内峰面积与浓度线性关系良好，r=0.99999,最低检限为0.02ng,本方法的重复性与精密性良好(RSD%=0.23%,n=6) 经专属性试验，可知杂质峰与主峰分离良好，理论塔板数均大于4000，分离度均大于3。该方法的平均回收率为100.62%(n=9)。 结论 该方法简便，灵敏度高，结果准确，可用于头孢西酮钠原料药含量及有关物质的检测。
【关键词】 头孢西酮钠 HPLC法 含量 有关物质
Determinatin of content of Cefazedone Sodium relevant substances by RP-LPLC.
WANG Kang-jun.
(Hainan Provinical Instiute for Drug Inspection,Haikou 571101, Hainan,P.R.China)
Abstract：Objective To determine the contents of Cefazedone Sodium by reversed-phase high-performance liquid cheomatography (RP-HPLC). Methods Column was VP-ODS (200mm×4.6mm×5mm), the mobile phase was 0.2mol/L Potassium dihydrogen phosphate and Acetonitrile in the ratio of 85:15.The detection wavelength was 280nm and the flow rate was 1.0ml/min. Injection sample was 20μl. Results Excellent linear relation in the range of 0.0804～0.294mg/ml (r=0.99999) was observed in refosporin.The limit of detection was 2ng,both repetition and precision were good (RSD<1.4%,n=6). Conclusion RP-HPLC is a simple ,sensitive ,and accurate method and it can be used fro determination of the content and the relevant substances of the Cefazedone Sodium.
Key words：Cefazedone Sodium Sterile; High-performance liquid phase chromatography; Content
头孢西酮钠属于第一代的头孢类抗生素。目前国家没有标准，本品收载于韩国的医药标准，采用反相高效液相色谱测定头孢西酮钠原料药的含量及有关物质的方法；鉴于此，有必要对国产该品种建立有效的检验方法，以便更好的控制该品种的质量。故对反相高效液相色谱测定头孢西酮钠原料药的含量及有关物质的方法进行了研究，并建立了有效的检验方法。
1 材料与方法
1.1 仪器与试药 岛津LC-2010型高效液相色谱仪泵、LC-2010 紫外-可见光多波长检测器、Class vp6.12工作站；岛津紫外UV-2100型；BP221S 电子分析天平；磷酸二氢钠 (分析纯)，乙腈(色谱纯)，纯化水； 头孢西酮钠原料药 (批号：20040701), 对照品（批号：20040701含量99.8%），均由海南某制药股份有限公司提供。
1.2 色谱条件 VP-ODS依利特 (4.6mm×200mm,5μm)；流动相：0.2mol/L的磷酸二氢钾：乙腈=85：15；检测波长为280nm；流速为1ml/min；进样量为10μl。
1.2.1 检测波长的选择 精密称取头孢西酮钠原料药20mg两份到100ml容量瓶中，分别用水和10%的乙腈溶解并加至刻度，用刻度吸管分别吸取2.5ml到100ml容量瓶中，再用刻度吸管分别吸取2.5ml到100ml容量瓶中，在200nm～400nm波长进行扫描,结果表明，用水溶和10%乙腈溶解的药物均在280nm附近处有最大吸收峰，因此，检测波长选在280nm。
1.2.2 溶剂的选择 对水和10%乙腈分别在200～400nm处进行扫描，均无吸收，考虑到成本及试验的安全性，故选用水做为溶剂。
1.2.3 流动相的选择 精密称取本品适量，加水制成每ml约含头孢西酮钠0.2mg的溶液，作为被测样品。以0.2mol/L的磷酸二氢钾：乙腈=85：15为流动相，检测波长280nm，进样10ul，记录色谱图，主峰与杂质峰分离良好，分离度为4.84；理论塔板数为6 079。
综上所述，本品的测定方法可定为：以0.2mol/L的磷酸二氢钾：乙腈=85：15为流动相，检测波长280nm，进样体积为10μl。
1.2.4 专属性试验 取本品约250mg，精密称定，置25ml容量瓶中, 加水溶解并稀释至刻度，作为供试品原溶液。
1.2.4.1 酸破坏样品的制备 精密量取上述原液1ml置10ml量瓶中，加1mol/L盐酸溶液1ml反应，反应30min后，加1mol/L氢氧化钠溶液1ml进行中和，加水稀释至刻度，按照1.2色谱条件进行测定，结果主峰与杂质峰分离良好，分离度为：4.54；理论塔板数为：5 987。
1.2.4.2 碱破坏样品的制备 精密量取上述原液1ml置10ml量瓶中，加1mol/L氢氧化钠溶液1ml反应，反应30min后，加1mol/L盐酸溶液1ml进行中和，加水稀释至刻度，按照1.2色谱条件进行测定，结果主峰与杂质峰分离良好，分离度为：4.65；理论塔板数为：5 938。
1.2.4.3 热破坏样品的制备 精密量取上述原液1ml置10ml量瓶中，置水浴上加热反应30min后，取出放冷至室温，并加水稀释至刻度，按照1.2色谱条件进行测定，结果主峰与杂质峰分离良好，分离度为：4.43；理论塔板数为：5 567。
1.2.4.4 氧化破坏样品的制备 精密量取上述原液1ml置10ml量瓶中，加30%的双氧水0.5ml反应10min后，加水稀释至刻度，按照1.2色谱条件进行测定，结果主峰与杂质峰分离良好，分离度为：3.11；理论塔板数为：5 623。
由酸、碱、高温、氧化破坏试验的结果可知，头孢西酮主峰与杂质的分离度均大于3；理论塔板数均大于5 500。均符合规定中国药典2005年版二部附录（附录VD高效液相色谱法）的要求，结果表明,所确定的检测方法可用于本品的含量及有关物质的测定。
1.2.5 最低检出限的测定 精密称定头孢西酮钠原料药适量，加水溶解并定量稀释成浓度分别为2μg/ml、0.02μg/ml、0.002μg/ml，精密量取上述溶液10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。经试验,本品的最低检测浓度为2ng/ml,最低检测限为0.02ng（s/n=3）。
1.2.6 含量线性试验 取头孢西酮钠20mg到100ml容量瓶中，用水稀释至刻度。精密量取溶液4μl、6μl、8μl、10μl、12μl、24μl共6份注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以浓度（C）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标进行线性回归，得回归方程为A=259 912x+127 421,R=0.9999（n=6）.结果表明，头孢西酮钠在0.0804～0.294mg/ml内峰面积与浓度线性关系良好。
1.2.7 重现性试验 取头孢西酮钠原料药20mg，平行称取6份，分别用水溶液配制成0.2mg/ml供试品溶液，按上述色谱条件测定，以头孢西酮钠原料药计算，RSD为0.23%(n=6)。
1.2.8 回收率试验 取本品内容物约16.5mg、20.9mg、24.2mg各称取3份，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液，分别取供试品溶液及对照溶液各10μl，注入高效液相色谱仪中，并记录色谱图。经计算，平均回收率为100.62%， RSD%=0.3%(n=9)。
2 方法的确定
2.1 含量测定方法的确定 色谱条件同1.2项下的方法。头孢西酮钠原料药理论塔板数应大于2 000, 头孢西酮钠原料药与相邻杂质峰的分离度应大于2。
取本品适量（约相当于头孢西酮20mg），精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取头孢西酮对照品适量，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。
2.2 有关物质测定方法的确定 精密称取本品适量，用水溶解并制成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。方法同1.2项下的色谱条件，记录色谱图。
2.3 含量测定及有关物质的测定 按照上述方法对本品的含量及有关物质进行测定，分别为97.81%和0.1%。
3 讨论
3.1 流动相的选择 以乙腈：水=90：10为流动相［1］，主峰有点拖尾，分离为0.95，理论塔板数为967；且基线飘移不定；而以0.2mol/L的磷酸二氢钾：乙腈=85：15为流动相，主峰与杂质峰分离良好，分离度为4.84；理论塔板数为6079。故流动相确定为：0.2mol/L的磷酸二氢钾：乙腈=85：15为流动相，检测波长为280nm。
3.2 溶剂的选择 对水和10%乙腈［2］分别在200～400nm处进行扫描，均无吸收，考虑到成本及试验的安全性，故本试验选用水做为溶剂。
3.3 含量测定进样量的选择 取本品适量，加水溶解并稀释成每ml含头孢西酮钠0.2mg的溶液，分别以10μl、20μl、50μl、100μl进样，记录色谱图。结果理论塔板数和分离度均较好，峰面积均在8位数以上，考虑到仪器设备检测的超载情况，故选进样量为10μl。
3.4 有关物质测定浓度的选择 精密称定本品适量，分别用水稀释成0.2mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/ml的溶液，分别注入色谱仪中，并记录色谱图。结果可知，除了头孢西酮主峰外，0.2mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/ml浓度的样品出现的杂质峰个数分别为18个、19个、19个、19个。因此可知，有关物质的个数随着浓度的增大而增加，当浓度增大至一定程度时，杂质个数不随着样品浓度的增大而增加，故头孢西酮钠有关物质测定的浓度确定为1.0mg/ml。
【参考文献】
［1］ 药典委员会.中国药典（二部）［M］.北京：化工出版社，2005,附录：172.
［2］ 韩国药品标准局.药品标准解说［S］.2002,305.
作者单位：海南省药品检验所，海南 海口 570216.