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【摘要】 目的 探讨注射用氯唑西林钠细菌内毒素的检测方法。 方法 按照中国药典2005版二部附录细菌内毒素检查法要求，以干扰试验测定，并作供试品细菌内毒素检查与家兔法热原检查结果比较。 结果 本药细菌内毒素限值为0.1Eu/ml，在2.5～0.40mg/ml的浓度范围内，不干扰细菌内毒素试验。供试品细菌内毒素检查与家兔法热原检查结果相符。 结论 细菌内毒素凝胶法较家兔热原法具有灵敏度高、快速简便易行及重现性好等优点,可用细菌内毒素检查凝胶法代替家兔热原法。
【关键词】 注射用氯唑西林钠 细菌内毒素 鲎试剂 干扰实验 热原
注射用氯唑西林钠为半合成青霉素，具有耐酸、耐青霉素酶的特点。在临床上用于治疗败血症、心内膜炎、肺炎和皮肤、软组织感染等。本品质量标准在［中国药典2005年版二部］中控制热原的方法仍为家兔热原法，鉴于家兔热原法有影响因素复杂、操作繁琐、检验成本高等缺点，而细菌内毒素检查法来控制产品中的热原具有操作简便快捷、检验灵敏度高等优点［1］。我们对本品进行了细菌内毒素检查凝胶法的方法研究。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 鲎试剂（TAL） 湛江安度斯生物有限公司生产:批号0611072，λ= 0.25Eu/ml；批号0612053，λ= 0.125Eu/ml。福州新北生化工业有限公司生产：批号060512，λ= 0.25Eu/ml。三批鲎试剂规格均为0.1ml/支。
1.1.2 细菌内毒素工作标准品（CSE） 中国药品生物检定所提供，批号:0403110 效价：10Eu/支。
1.1.3 细菌内毒素检查用水（BET水） 湛江安度斯生物有限公司产品，批号:0611065 规格：5ml/支，内毒素含量＜0.015Eu/ml。
1.1.4 仪器 天平，感量为0.1mg；DK—8D型电热恒温水槽;XW—80A旋涡混合器。
1.1.5 玻璃器材 无热原玻璃刻度吸管、试管、空安瓿，在250℃干热1h以上除细菌内毒素处理。
1.1.6 供试品（S） 注射用氯唑西林钠，批号：070101、 070102、 070103 海南通用三洋药业有限公司生产。
1.2 方法
1.2.1 计算供试品细菌内毒素限值L 根据中国药典2005版二部附录XI E“细菌内毒素检查法”［1］及本品的使用说明书，成人临床一次的最大剂量为3g，按文献［1］计算本品细菌内毒素限值L为0.1Eu/mg ；本品热原检查的家兔给药剂量为25mg/kg，按家兔剂量计算得L为0.2Eu/mg 。按成人剂量计算所得限值较严，故确定本品细菌内毒素限值为0.1Eu/mg 。
1.2.2 供试品的稀释（S） 目前用于药品检验的鲎试剂的灵敏度一般在0.03～1.0Eu/ml之间，为了方便，我们选用λ为0.25Eu/ml的鲎试剂。本品按0.1Eu/mg 的限值进行细菌内毒素检查时的最大有效浓度（Cmax）和最小有效浓度（Cmin）为：Cmax=（1.0Eu/ml）/0.1Eu/mg=10.0mg/ml Cmin=（0.03Eu/ml）/0.1Eu/mg=0.3 mg/ml
由此可得，预试验供试品的浓度应从10.0mg/ml开始，进行倍数稀释，一直到浓度稍大于或等于0.3mg/ml为止，以筛选出对鲎试剂无干扰的供试品浓度范围，确定干扰试验应用的鲎试剂灵敏度。
1.2.3 TAL的λ复核试验、预试验、干扰试验按参考文献［2］进行。
2 结果
2.1 TAL的λ复核试验结果 结果判断：λc在2.0～0.5λ即（0.50～0.125Eu/ml）范围内，以上3批TAL的灵敏度标示值符合规定，可按标示值使用。见表1。
表1 鲎试剂灵敏度复核结果（略）
2.2 预试验结果 由表2可得，不干扰鲎试剂的供试品最大有效浓度范围为2.5mg/ml，对应的λ为：λ=L×C=0.1Eu/mg×2.5mg/ml=0.25 Eu/ml。所以干扰试验应选用0.25 Eu/ml或更高灵敏度的鲎试剂。
表2 预试验结果（略）
2.3 干扰试验结果 结果判断：Es在0.5～2.0λ且Et在0.5～2.0Es范围内，供试品在该浓度下无干扰。见表3。
表3 干扰试验结果（略）
2.4 供试品细菌内毒素检查与家兔法作热原检查结果比较
将3批供试品用BET水制成浓度为2.5mg/ml的溶液，用鲎试剂（λ=0.25 Eu/ml）按细菌内毒素检查法进行检查，结果见表4。
表4 细菌内毒素检查与家兔法作热原检查结果对比（略）
结果判断：供试品细菌内毒素检查与家兔法作热原检查结果相符合。
3 讨论
3.1 干扰试验的目的是评价供试品浓度对鲎试剂与内毒素凝集反应的干扰程度及干扰性质（增强或抑制），以便筛选出无干扰试验的起始浓度。这样既可避免干扰实验的盲目性，同时又节省了大量的时间和鲎试剂［3］。
3.2 在进行灵敏度复核、干扰实验和供试品内毒素检查时，各个试验的对照应同时进行，并在有效的条件下进行计算和判断。在试验中，阳性对照目的是证明在试验条件下所用鲎试剂的灵敏度符合规定；阴性对照的目的是证明所用的BET水中不存在可被检查到的内毒素；供试品阳性对照的目的是证明在试验条件下被检查的供试品溶液不存在抑制因素［1］。
3.3 由于凝集反应是不可逆的，所以在反应过程中及观察结果时应注意不要使试管受到振动，以免使凝胶破碎产生假阴性结果［2］。
3.4 试验结果表明：本品浓度为2.5mg/ml时，选用λb=0.25Eu/ml的TAL，能消除干扰，3批供试品的两法符合率100%，说明用细菌内毒素检查法控制注射用氯唑西林钠的热原是可行的。
【参考文献】
［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.北京:化学工业出版社, 2005，二部附录XI E P85～88.
［2］ 中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规范［S］.北京：中国医药科技出版社，2005，287～297.
作者单位：海南通用三洋药业有限公司质量部,海南 海口 570312.