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【摘要】 目的 检测类风湿关节炎(RA)患者血清中的类风湿因子(RF-IgG、RF-IgA、 RF-IgM)、抗角蛋白抗体(AKA)和 抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP)，探索其对RA的诊断价值。 方法 对70例RA患者、114例非RF的风湿免疫病患者血清同时进行测定了RF(ELISA法)、AKA(间接免疫荧光法)和抗CCP(ELISA法)，并对三者之间检测的一致性进行了分析。 结果 RF-IgG, RF-IgA, RF-IgM, AKA和抗CCP对RA的敏感性分别为14.3% (10/70)、45.7%(32/70) 、74.3%(52/70) 、42.8%(30/70)和65.7%(46/70)，特异性分别为96.5%、91.2% 、83.3%、98.2%和97.3%。联合检测2种抗体、3种抗体和5种抗体，敏感性及特异性分别是RF-IgA+ RF-IgM 为45.7%和92.9%，RF-IgG,+RF-IgA+RF-IgM为14.3%和96.5%， RF-IgA+RF-IgM+AKA为42.8%和99.1%， RF-IgA+RF-IgM+抗CCP抗体为45.7%和99.1%，RF-IgG,+ RF-IgA+RF-IgM+AKA+抗CCP抗体为12.9%和100%。 结论 抗CCP抗体和AKA单独检测对RA具有高度的特异性，敏感性抗CCP抗体比AKA略高; 单独检测RF-IgM敏感性最高，但特异性最低;RF与AKA、抗CCP联合检测可进一步提高对RA诊断的特异性。
【关键词】 类风湿性关节炎;抗CCP抗体 抗角蛋白抗体(AKA) 类风湿因子(RF-IgG、RF-IgA、 RF-IgM)
Value of dentection of anti-CGP and rheumatoid factors AKA in diagnosis of rheumatoid arthritis.
FU Ke-ying, CHEN Ru, ZHAN Feng, et al.
(Hainan Provincial People’s Hospital, Haikou 570311, Hainan, P. R. China)
Abstract：Objective To detect the rheumatoid factor antibodies(RF-IgG、RF-IgA、 RF-IgM), anti-AKA and anti-CCP in patients with rheumatoid arthritis(RA) and probe into their diagnostic value. Methods Rheumatoid factor were detected by ELISA, anti-AKA was detected by IIF and anti-CCP was detected by ELISA simultaneously in 70 RA patients and 114 patients with other rheumatic disease. Results The sensitivity of RF-IgG, RF-IgA, RF-IgM, anti-AKA and anti-CCP were 14.3%(10/70), 45.7%(32/70), 74.3%(52/70), 42.8%(30/70), 65.7%(46/70) and the specificity were 96.5%, 91.2%, 83.3%, 98.2%, 97.3%. The sensitivity and specificitiy of combined detection of IgA and IgM were 45.7% and 92.9%, that of combined detection of IgG, IgA and IgM were 14.3% and 96.5%, that combined detection of IgA, IgM and anti-AKA were 42.8% and 99.1%, that of combined detection of IgA, IgM and anti-CCP were 45.7% and 99.1% and that of combined detection of IgG, IgA, IgM, anti-AKA and anti-CCP were 12.9% and 100%. Conclusion The specificity of separate detection of anti-CCP and AKA in RA is higher. The sensitivity in detecting anti-CCP than that detecting AKA. The specificity of diagnosis of RA can be enhanced by joint detection of anti-AKA and anti-CCP.
Key words：Rheumatoid arthritis(RA); Anti-CCP; Anti-AKA; Rheumoid factor IgG, IgA, IgM
类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)是一种常见的致畸性系统性自身免疫性疾病，其病因和发病机制尚未阐明，患者在发病两年内即可出现不可逆的骨关节破坏，最后将导致关节强直、畸形和功能丧失。早期诊断并给予治疗能及时控制病情、减少骨关节破坏并改善预后。目前，RA的诊断主要依靠临床表现，而实验室指标主要是类风湿因子IgM(RF-IgM)，但类风湿因子IgM的特异性低［1］，不利于RA的早期诊断。近年发现的早期诊断RA的实验室指标有类风湿因子(Rheumatoid factor, RF)、抗核周因子(Antinuclear factor, APF)、抗角蛋白抗体(Anti keratin antibody, AKA)、抗环状瓜氨酸肽(CCP)抗体及抗Sa抗体等［2～4］。我们对RF-IgG、RF-IgA、 RF-IgM ,AKA及抗CCP抗体进行检测，评价该5项指标对RA的诊断价值。
1 材料与方法
1. 1 病例选择 收集2006年2～12月来院就诊的门诊及住院病人血清184例，包括RA 70例，其它风湿性疾病94例，RA患者均符合1987年美国风湿病协会(A RA)修订的RA分类标准，其它风湿性疾病患者均符合国际相应的诊断标准。另外收集20例来自海南省血液中心的健康人血清。以上血清放置-20℃冻存待用。
1.2 方法
1. 2. 1 抗CCP抗体检测 抗CCP抗体检测试剂盒由美国GENESIS公司提供，采用ELISA方法，严格按使用说明书操作。结果判断使用标准曲线，浓度分别为(0U/ml,6.25U/ml,12.5U/ml,25U/ml,50U/ml,100U/ml)，以样品OD值在标准曲线上查出抗体浓度，<4 U/ml为阴性，>4 U/ml为阳性。
1.2.2 AKA检测 AKA试剂盒购自德国欧蒙实验诊断试剂有限公司，采用间接免疫荧光法((IIF)检测，以角质层出现线状、板层状的典型荧光染色判为阳性。
1.2.3 RF-IgG、RF-IgA、RF-IgM检测 用ELISA方法检测，由美国GENESIS公司生产提供。RF-IgG值>85U/ml为阳性。RF-IgA值>24U/ml为阳性。RF-IgM值>30U/ml为阳性。
1.2.4 统计学方法 采用四格表计算3种抗体诊断RA的敏感性、特异性。采用行列表资料的卡方检验4种以上抗体联合检测比两种抗体、3种抗体检测的特异性好。（P<0.05或P<0.01）
2 结果
2.1 从表1可见，5种抗体对RA诊断的敏感性为RF-IgM >抗CCP>RF-IgA >AKA>IgG，特异性为抗AKA>CCP和IgG>RF-IgA>RF-IgM，其中RF-IgM敏感性最高（74.3%）但特异性明显低于其它指标（83.3%）(P<0.05);抗CCP具有较高的特异性和敏感性; 特异性则以AKA最高，与RF-IgM比较差异有统计学意义(P<0.05)。其它组两两间比较差异无统计学意义(P>0.05)。
表1 单种抗体对RA诊断的敏感性和特异性结果（略）
注：◇与其它抗体检测相比较，P<0.01；△与其它抗体检测相比较，P<0.05。
2.2 3种以上抗体联合检测IgA+IgM+AKA，IgA+IgM+抗CCP，可提高其对RA的特异性（99.1%），与3种抗体（RF-IgG+RF-IgA+RF-IgM）联合检测特异性差异有统计学意义(P<0.05);联合检测IgG+IgA+IgM+AKA+抗CCP，特异性高达100%，与两种抗体（RF-IgA+RF-IgM）联合检测特异性差异有统计学意义(P<0.01)，与3种抗体（RF-IgG+RF-IgA+RF-IgM）联合检测特异性差异有统计学意义(P<0.05)。但其敏感性有较明显的下降（12.9%）与其它组联合检测相比较有统计学意义 (P<0.01)，见表2。
表2 多种抗体联合检测对RA诊断的敏感性和特异性结果（略）
注：◇：与*组抗体联合检测相比较，P<0.01;△：与*组 抗体联合检测相比较，P<0.05;△△：与其它组联合检测相比较，P<0.01。
3 讨论
本研究对70例RA和114例非RA血清进行了抗CCP 、AKA及 RF-IgG, RF-IgA, RF-IgM的检测，结果发现:单独检测一种抗体时以RF-IgM和抗CCP抗体对RA的敏感性最高，且两者间差异无统计学意义，而AKA明显低于这两种(P<0.01);特异性则以AKA最高，与RF-IgM比较差异有统计学意义(P<0.05)。
RA是一种常见易导致小关节畸形的自身免疫疾病，早期诊断并早期给予药物能及时控制病情，减少关节的破坏，改善预后。国内外参照1987年美国风湿病协会(A RA)修订的RA分类标准，即7项分类标准中有4项符合可诊断为RA。该分类标准不能早期诊断RA，RF结合临床是一直普遍采用的诊断RA的重要方法。RF是抗人和动物IgG分子Fc片段上抗原决定簇的特异性抗体，包括IgM、IgG和IgA。主要是IgM。 RF与IgG形成免疫复合物激活补体系统，诱发炎症反应。应用ELISA法进行RF分型定量检测，既能检测IgM又能检测出IgG和IgA，能弥补其它方法检测RF-IgM的不足［5］。RF是美国风湿病协会分类诊断RA的唯一血清学指标（主要是IgM）。目前常用于辅助诊断RA。但其敏感性虽高，特异性却偏低，不仅可以在RA以外的其它结缔组织病患者中出现，在一些非结缔组织病如感染、肿瘤等患者，甚至部分正常老年人中也可呈阳性［6］。在早期RA患者中，滴度变化大，当临床表现不典型时，难为临床早期诊断提供可靠依据。本研究中RF-IgM对RA诊断的特异性均低于抗CCP抗体及AKA(P<0.05)。由于RF是经典诊断指标，因此我们将五种检测方式进行比较，发现敏感性为RF-IgM >抗CCP>RF-IgA >AKA>IgG，特异性AKA>CCP和IgG >RF-IgA > RF-IgM 。与以上报道一致。IgA+IgM联合检测与单独检测IgM相比较虽敏感性有所下降，但特异也有明显提高。该结果提示在检测RF-IgM的同时，应联合RF-IgA乃至RF-IgG，以提高对RA诊断的特异性。
近年来报道一组抗角蛋白抗体谱为RA的高特异性抗体，包括抗核周因子抗体（APF）、抗角蛋白抗体（AKA）、抗聚角蛋白微丝蛋白抗体（AFA）及抗环瓜氨酸抗体（抗CCP），这组抗体的靶抗原为细胞基质的聚角蛋白的微丝蛋白，环瓜氨酸肽是该抗原的主要成分。本次结果提示五项指标中AKA，抗CCP抗体对RA诊断的特异性最高，分别为98.2%和97.3%,敏感性抗CCP（65.7%）高于AKA(42.8%)。与Schellekens等［7］报道的敏感性和特异性结果接近(68.0%和98.0%)，而与国内其它学者报道的结果比较，特异性(94.7%～96.6%)接近，但敏感性差异较大，高的可达84.6%［8］,低的只有46. 6%［9］。出现该现象的原因可能有:不同厂家生产的试剂盒质量差异;研究对象尤其是RA患者的病情严重程度差异。
AKA检测对RA具有很高的特异性，本文为（98.2%），常可先于疾病的临床表现出现且往往提示预后不佳。AKA识别的靶抗原（Fjlaggrin）成分含有环瓜氨酸，因此可推测AKA与抗CCP应该有很好的重叠性。本文AKA与CCP的特异性比较接近，但敏感性AKA低于CCP，可能是不同方法学（ELISA和间接免疫荧光法）的灵敏度存在差异。同时，我们发现联合检测IgA+IgM+AKA或IgA+IgM+抗CCP，可提高其对RA的特异性（99.1%），联合检测IgG+IgA+IgM+AKA+抗CCP，特异性高达100%。综合分析以上结果提示：联合检测抗CCP 、AKA及 RF-IgG, RF-IgA, RF-IgM替代目前的单独检测RF可进一步提高RA诊断的特异性。虽然AKA和抗CCP抗体对RA有较高的特异性，但其敏感性偏低，致使部分患者漏诊，延误治疗。因此，在条件允许下应联合RF一起检测，综合分析，对于诊断不明的关节炎，RF阳性而AKA和抗CCP阴性，应定期检查RF和AKA及抗CCP，降低RA的漏诊率。联合检测一方面因其阳性预测值大大提高，有助于RA的早期诊断;另一方面抗CCP抗体和RF均可预测骨侵蚀的发生，联合检测可及早地干预、阻断疾病的进程，有效地减少关节的破坏。
【参考文献】
［1］ 张雪哲，卢延.CT介入放射学［M］.北京：中国科学技术出版社，1996:136～140.
［2］ Vincent C, Sin on M，Sebbag M，et al. Immunoblottingdetection of autoantibodies to hum an epiderm is filaggrin: a newdiagnostic test for rheumatoid arthritis［J］. J Rheum atol, 1998，(25):838～846.
［3］ 李鸿斌，李小峰，甘晓丹,等.抗核周因子等四种抗体联合检测在早期类风湿关节炎诊断中的意义［J］.中华医学杂志，2000，80(1):20～24.
［4］ Boini S, Guillemin F. Radiographic scoring methods as outcomemeasures in rheumatoid arthritis: properties and advantages［J］.Ann Rheum Dis, 2001，60(9): 817～827.
［5］ 刘润荣，张坤英，赵义,等.类风湿因子分型及定量在类风湿关节炎的意义［J］.潍坊医学院报，2002,24(3).
［6］ Schmerming RL, Delbanco TL. The rbeumatoid factor：an anlysis of clinical utility［J］.Am J Med,1991,91:528～534.
［7］ Schellekens GA, VisserH，de Jong BA W，et a1. The diagnosticproperties of rheumatoid arthritis recognizing a cycliccitrullinated peptide. Arthritis Rheum，2000， 43(1):155～163.
［8］ 胡学芳，魏华，朱爱萍,等.抗环瓜氨酸肤抗体检测在类风湿关节炎诊断中的临床意义［J］.中华检验医学杂志，2003， 26(8): 484～487.
［9］ 曾小峰，艾脉兴，甘晓丹,等.抗环瓜氨酸肤抗体检测在类风湿关节炎中的意义［J］.中华风湿病学杂志，2001，5(5):281～284.
作者单位：海南省人民医院, 海南 海口 570311.