AKA对类风湿关节炎的检测及其临床意义

　　类风湿关节炎（RA）是一种以慢性多发性关节炎为主要表现的一种全身性免疫性疾病。迄今为止，类风湿性关节炎（RA）的临床诊断尚未发现一个即可作为常规检查，又有特异性的诊断实验，特别是早期诊断就更为困难。抗角蛋白抗体（AKA）是由Young等于1979年用间接免疫荧光法（IF），以Wistar大鼠食管中1/3段上皮为底物，首先在RA的血清中检测到的，发现其对RA有高度特异性，AKA主要是IgG型，也有IgM型，但无临床价值。也有人报道，在其他风湿病如系统性红斑狼疮（systemic erythem alosus，SLE）、干燥综合征（sjogren’s syndrome，SS）、硬皮病（systemic sclero-sis，SSc），强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，As）中，甚至正常人血清中也可检出AKA。国内对AKA的检测还未广泛开展，对AKA的临床应用尚缺乏较系统的实验研究。IgG-AKA与RA的病情严重程度和疾病活动度相关，且IgG-AKA阳性率和滴度与IgM-RF密切相关，但二者之间似乎不存在交叉反应。笔者通过对80例RA病人用IF法检测AKA和用胶乳法检测RF（主要为IgM-RF）进行对照，以探讨其对临床诊断的具体意义。希望能找到有助于RA诊断的特异性实验指标，使患者能及时获得诊断及治疗，以提高生活质量，减少疾病致残率。

　　1 材料

     　1.1 标本来源 病人血清来自本院80例活动性RA病人，年龄35～68岁，其中男23人，女57人，诊断符合美国风湿协会（ARA）1987年修订标准，收集血清检测AKA同时用胶乳法测其RF水平。其它风湿性疾病60例来自本院住院或门诊病人，50名对照组为健康体检人群。

    　1.2 试剂 抗角蛋白抗体试剂盒，西班牙Biosystems公司提供。

    　1.3 仪器 日产OLYMPUS荧光显微镜。

　　2 方法与操作

    　2.1 胶乳法测定RF 血清56℃30min。将待测血清用0.1 mol/L pH8.2甘氨酸缓冲盐水做1∶20稀释。取此稀释血清1滴，加于黑色方格玻片的方格内，加乳胶RF试剂1滴，充分混匀后立即摇动反应板，于直射光下观察。3min内出现明显凝集者为阳性。必要时阳性标本可进一步做双倍连续稀释，测定RF滴度 ［1］  。

    　2.2 间接免疫荧光法（IFA）测定AKA 以大鼠食管中1/3部分组织为抗原，以用荧光素和伊凡斯蓝标记的抗人免疫球蛋白（FITC）作为二抗检测:（1）将试剂盒，血清放置室温，反应板用冷风吹干;（2）将血清用PBS做1∶10倍稀释，然后滴加（25～50μl）稀释血清到反应孔中，使之完全覆盖并放入湿盒，室温下（15～30℃）孵育30min;（3）轻轻倒掉样品液，用PBS洗涤3次，每次5min;（4）用特定吸水纸吸干反应板，但要注意反应孔始终保持潮湿状态;（5）每孔滴加1滴荧光标记抗体，放入湿盒下孵育30min;（6）洗板，同步骤（3）;（7）吸干水分，同步骤（4）;（8）加2滴装板介质（缓冲甘油）封板，避免产生气泡;（9）立即用荧光显微镜（250～400×）检测结果。

　　3 实验结果

    　3.1 AKA、RF在RA组阳性率分别为 42.5%（34/80），63.75%（51/80）;AKA、RF在其他风湿性疾病组阳性率分别为:3.3%（2/60），18.3%（11/60）;AKA、RF在健康成人组阳性率分别为:2.0%（1/50），2.0%（1/50）。

   　 3.2 AKA34例阳性中，RF阴性者占13例;RF51例阳性中，AKA阴性者占29例。

　　4 讨论

　　RA至今缺乏特异性的实验室诊断指标，特别是早期诊断，一直是国内外学者研究的热点。抗角蛋白抗体（AKA）是近来发现的对RA具有特异性的自身抗体。已知角质蛋白是哺乳动物的重要支架结构之一，其成分复杂，至少有30种不同的角蛋白组分，对RA特异的AKA对应抗原仅是角蛋白的一种或数种。Cribal等研究发现AKA相应的靶抗原是鼠食管上皮及人类表皮的丝集蛋白（filaggrin）。所以有学者建议将AKA改称为抗丝集蛋白抗体（anti-filaggrin anˉtibody）更为合适。
   
　　AKA在RA疾病中的致病作用还不清楚，Masscn-Bessiere等已发现分泌AKA的浆细胞存在于RA患者的滑膜组织内，提示AKA可能对滑膜炎的形成起重要作用。对不同病期的RA患者进行AKA检测，可能有助于揭示RA的致病机制。

    　在研究RF与AKA的关系时发现:在RA患者AKA阳性组RF阳性率及浓度明显高于AKA阴性组，AKA滴度与RF浓度呈正相关，提示AKA阳性及滴度与RA病情严重程度病情发展有关，AKA阳性可能成为RA预后不良的指标之一。AKA在RA的早期，甚至临床表现出现前即可出现。Kurki等对39例确诊的RA患者发病前的血清进行AKA检测，发现有10例为AKA阳性（26%），其中5例在发病前0～2年，4例在发病前2～4年，1例大于4年，说明AKA在RA发病前就可检出，因此对于RA患者的早期诊断及预报疾病具有重要意义。

   　 RA的疾病早期诊断比较困难。AKA和RF均可在疾病早期出现，这为RA早期诊断提供了有力依据，但RF是一项有用的但对RA并非诊断性的试验，高滴度的RF更多见于类风湿结节的患者。通过实验我们发现，在RA患者中AKA阳性率为42.5%，特异性为96.7%，而RF的敏感性较AKA高为63.75%，特异性仅为81.7%，与文献报道相似 ［2］。尽管RF单纯用于RA诊断或早期诊断不具有显著特异性，但高滴度的RF对诊断RA同样有重要的临床价值。当其与AKA联合检测时，对RA的早期诊断，早期治疗及预防具有重要实用价值。笔者建议对疑为RA的患者，应同时检测RF和AKA以协助诊断。若将RA与AKA结合起来，阳性率可提高到80%，特异性可提高到98%。将AKA和RF（有文献报道 ［3］  还可与核周因子APF）联合检测，作为RA诊断的实验室诊断指标，在一定程度上可弥补对RA诊断不足，特别是对RF阴性RA具有补充诊断意义。

　　参考文献
    
　　1 叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程，第2版.南京:东南大学出版社，1997，5.

    　2 Young BJ，Mallya RK，Leslie RD，et al.Anli-keralin，anlibodies in rheumateig arthritis.TJ.Br Med J，1979，2（6182）:97-99.

   　 3 KurKi P.Aho K.Palosuo T，et al.Immunopathology of rheumatiotid disˉease:Antikeratinantibody precede the clinical disease JJ.Arthritib Bbˉfotm，1992，35（8）:914-917.

　　作者单位:710061西安交通大学校医院