点击显示 收起
【摘要】 目的 研究咳嗽变异性哮喘（CVA）患者激发试验后外周血单核细胞中白介素-4、5及白介素-13水平，探讨患者体内炎症改变。 方法 变异性哮喘患者接受组织胺支气管激发试验后取血，应用ELISA测定外周血单核细胞（PBMC）中白介素水平。 结果 CVA组的PBMC中的interleukine(IL)-5水平增高, IL-4、IL-13水平降低，IL-2水平改变不明显。 结论 CVA患者激发试验后IL-4、IL-5、IL-13水平异常。
【关键词】 咳嗽变异性哮喘 气道高反应性 白介素-2 白介素-4 白介素-5 白介素-13
Observation on the variation of interleukines in cough variant asthma patients after bronchoprovocational test.
LIU Xiao-ran，ZHU Min-li, YE lin, et al.
(Department of Pathophysiology,Hainan Medical College, Haikou 571101,Hainan， P. R. China)
Abstract：Objective To clarify the cytokine profiles in cough variant asthma patients after histamine brochoprovocational test(BPT). Methods Venous bloodfrom CVA patients and healthy persons 10 minutes after challenge，The level of quantified interleukin in PBMC-free supernatant after having been cultured was determined Results The concentration of IL-5 were significantly increased in CVA group,while the levels of IL-4, IL-13 were lower than that of controls. Conclusion The levels of Il-4,IL-5,IL-13 in the PBMC-free supernatant obtained from CVA patients after BPT were abnormal.
Key words：Cough variant asthma；Airway hyperresponsibility；IL-2；IL-4；IL-5；IL-13
咳嗽变异性哮喘（Cough variant asthma，CVA）是一种隐匿性哮喘，患者具有气道高反应性和气道炎症的哮喘特征，但仅表现为咳嗽而不是喘息，部分患者可发展为典型哮喘。本文旨在通过检测CVA患者外周血单核细胞（Peripheral blood monoeuclear cell，PBMC）中的白介素(Interleukin, IL)水平，了解此类患者体内炎症介质的改变。
1 材料与方法
1.1 研究对象 CVA组为随机选择门诊慢性咳嗽就诊患者，排除其它疾患，FEV1>70%者进行组织胺支气管激发试验，阳性患者于激发后10min内抽取静脉血，经处理（见实验方法）后，样本冻存，待随访β2受体激动剂治疗有效者确诊CVA患者的样本进行检测分析。其中，男性12例，女性22例;对照组为健康志愿者20例，男7例，女13例。两组年龄无差异性。排除标准：任何急性疾病；8周内呼吸道感染史；免疫系统疾病；以及严重心肺疾患等不能耐受激发试验者。试验前72h内无激素等抗炎药及平喘药物应用史。
1.2 实验方法 激发试验：经定量雾化吸入器依次吸入生理盐水、低浓度低剂量（4mg/ml,0.0097mg）逐渐增加至高浓度高剂量(32mg/ml,1.268mg)的组织胺溶液，直至所测得的FEV1下降至参考值（吸入生理盐水所得FEV1）的80%以下或达到最高剂量。以引起FEV1下将超过20%时的吸入组胺累积剂量为激发阈值［PD20（FEV1）］，小于2.2mg/dl者为支气管激发阳性。
两组患者均于激发试验后10min内抽取静脉血，肝素抗凝后提取PBMC，细胞数调整为2×106/ml，根据需要加入植物血凝素后，将标本置于CO2细胞孵育箱中48h，收取上清液，冻存于-20℃冰箱内。IL-2、IL-4、IL-5、IL-13的检测，采用双夹心ELISA法测得。
1.3 统计学分析 所测数据以均数±标准差(x±s)表示,应用SPSS软件包进行分析。分析采用t检验。P<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 咳嗽变异性哮喘患者PBMC中IL-2、IL-4、IL-5、IL-13的水平 与健康对照组相比较，CVA组患者PBMC中IL-5显著增高（P<0.01），IL-4、IL-13水平降低(P<0.05)；两组患者中IL-2水平无显著差异（见表1）。
表1 两组患者PBMC中IL-2、IL-4、IL-5、IL-13的水平（略）
注:CVA组与对照组比较,P＜0.05; CVA组与对照组比较,P＜0.01。
2.2 细胞因子与肺功能改变的相关性 实验中所测细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IL-13与一秒用力呼气容积(FEV1)、平均最大呼气流量(MMEF)、组织胺激发阈值均无相关性。
3 讨论
咳嗽变异性哮喘是以咳嗽为主要临床征象的哮喘。患者出现咳嗽而不是哮喘，可能与过敏性炎症反应主要作用于中央气道而非周围小气道，或患者喘息阈值高有关。也与细胞的活化或某些特异性介质如白介素及嗜酸细胞活化趋化因子的释放程度相关。
Stirling R G等人发现CVA患者在非特异性激发物组织胺的激发后，PBMC中IL-13、IL-4水平降低，IL-5水平升高。IL-5主要作用于外周及骨髓，通过促进嗜酸粒细胞的骨髓分泌入血，在循环中游走以及向局部组织的聚集，和其分泌的炎性介质局部作用于气道［1］。而IL-4及IL-13的作用主要表现在对肺局部组织及细胞的影响。CVA患者受到组织胺激发后，外周循环血中的Th2细胞等特异的炎症细胞转移聚集到肺组织及气道中，释放细胞因子，IL-4与IL-13暂时聚集在气道内产生作用，而IL-5迅速入血，促进嗜酸粒细胞分泌并聚集到气道内，进一步促进其它Th2因子的产生，从而导致症状的发生。Abbal C等人发现哮喘患者PBMC中的IL-5、IL-13等Th2因子在激发24小时后，明显低于激发后立即抽血所得样本中的细胞因子，推测激发后循环中的过敏原特异性细胞的短暂减少［2］。而Gerblich AA等人发现在支气管过敏原激发后，外周血中的CD4+T淋巴细胞排空并选择性聚集于肺组织中［3］。
本实验发现CVA患者Th1型细胞因子IL-2水平的改变不显著，提示在此类患者中Th1因子的作用不明显。肺功能改变与IL-4、IL-5、IL-13不相关性，说明多种细胞因子共同作用于患者，不是由某一种细胞因子作用的结果。
综上所述，CVA患者在受到外界过敏因素刺激时，体内炎症介质发生变化，而确定这种改变是因是果，或是并发改变，仍需进一步研究。另一方面由于不同炎症介质主要作用于不同部位，因此选择针对性的局部及全身性系统治疗更有利于控制疾病的发生发展。
【参考文献】
［1］ Stirling R G, Rensen E L, Barnes P J, et al. Interleukin-5 Induces CD34+ Eosinophil Progenitor Mobilization and Eosinophil CCR3 Expression in Asthma［J］. Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2001,164(8):1403～1409.
［2］ Abbal C, Persi L, Bousquet J, et al. Effect of bronchial allergen challenge on in vitro cytokine release by peripheral blood mononuclear cells of atopic patients［J］. Allergy, 1998,53(10):945～950.
［3］ Gerblich AA, Campbell AE, Schuyler MR. Changes in T-lymphocyte subpopulations after antigenic bronchial provocation in asthmatics［J］. N Engl J Med, 1984,310(21):1349～1352.
作者单位：海南医学院病理生理教研室，海南 海口 571101； 解放军总医院南楼呼吸科，北京 100853； 海南现代女子医院，海南 海口 570206.