点击显示 收起
【摘要】 目的 研究基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和组织基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）在银屑病皮损组织中的表达情况及其与微血管密度（MVD）的关系。 方法 采用免疫组化ABC法检测银屑病和正常皮肤组织MMP-2、TIMP-1蛋白的表达情况，用血管内皮细胞特异性标志CD34抗体检测MVD。 结果 银屑病患者皮损MVD明显高于对照组(P<0.01)；患者皮损中既可表达MMP-2，又可表达TIMP-1，而在正常皮肤不表达；MMP-2表达强度随着MVD的增高而增强（P<0.01），TIMP-1表达程度随着MVD的增高而减弱（P<0.01）。 结论 银屑病患者皮损组织中MMP-2、TIMP-1的表达与MVD有关。
【关键词】 银屑病 微血管密度 基质金属蛋白酶-2 组织基质金属蛋白酶抑制剂-1
Expression of MMP-2 and TIMP-1 in psoriasis patients and their relationships with microvessel density.
CHEN Ji-guang, REN Xiao-li.
(Taizhou Municipal People’s Hospital, Taizhou 318000, Zhejiang, P. R. China)
Abstract：Objective To observe the expression of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and tissue inhibitors of metalloproteinase-1(TIMP-1)in patients with psoriasis, and their relationships with microvessel density（MVD）. Methods Immunohistochemical technique-Avidin Biotin comple(ABC) was employed to observe the expression of MMP-2、TIMP-1 in the lesions of patients; MVD was detected by immunohistochemical method with monoclonal antibody specific for the endothelial marker CD34 and healthy subject. Results MVD in the lesions of psoriasis patients was higher than that of normal control (P<0.01)；MMP-2、TIMP-1 were expressed in the lesions of patients，not in normal skin；The expression level of MMP-2 increased and TIMP-1 decreased with the increasing of MVD. Conclusion The expression of MMP-2 、TIMP-1 protein is closely correlated with the MVD of psoriasis patients.
Key words：Psoriasis；Microvessel density；Matrix; Metalloproteinase-2；Tissue inhibitors of metalloproteinase-1
皮肤由角质形成细胞、成纤维细胞等实质细胞及细胞外基质（ECM）构成。基质金属蛋白酶（MMPs）是一组锌离子依赖的蛋白水解酶, 是ECM降解主要酶类，可以水解ECM的多种成分。其中MMP-2属于明胶酶类,可以水解胶原成分,是RRW7中研究较广泛的一种,而基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMPs)家族成员中又以TIMP-1研究较为深入，它是MMP-2的选择性抑制剂。目前有关MMPs/ TIMPs的研究多集中在乳腺、膀胱等肿瘤方面，在银屑病中MMPs与MVD的关系尚未见报道。笔者应用免疫组化法对银屑病患者皮损区MMP-2、TIMP-1的表达进行检测，探讨二者与微血管密度（MVD）的关系。
1 资料和方法
1.1 病例 寻常型银屑病患者17例，男10例，女7例，年龄26～60岁，平均43岁；病程6月～17年，平均11年，均为本院门诊及住院病人。10例对照组系非皮肤病外科手术人群，男6例，女4例，年龄25～60岁，平均41岁。皮肤标本用4mm环钻常规取材，石蜡包埋，4um厚连续切片。
1.2 方法
1.2.1 试剂 兔抗人MMP-2、兔抗人TIMP-2和即用型SABC免疫组化染色试剂盒均购自武汉博士德生物工程公司，鼠抗人CD34单抗(DAKO公司)。
1.2.2 ABC法 石蜡切片按常规处理后，微波炉抗原修复，依次加入适当稀释的一抗（MMP-2/TIMP-2的工作浓度均为1：100，CD34工作浓度1:40）、生物素标记二抗、SABC，DAB显色、苏木素复染，用已知阳性片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。
1.2.3 MMP-2、TIMP-2结果判断标准 MMP-2和TIMP-2以胞质内出现黄色颗粒状物质为阳性，按着色强弱分级：无着色为0，浅黄色为1；深黄色为2，棕黄色为3；着色范围以×40倍镜下随机选取5个视野（每个视野计数100个细胞）计数阳性细胞所占的百分比均值：<25%为1，25%～50%为2，>50%为3。上述两项相加即为MMP-2或TIMP-2表达强度积分：<2为阴性，<3为弱阳性（+），3～4为阳性（++），>4为强阳性（+++）。
1.2.4 MVD结果判断 在低倍镜(100)下观察真皮浅层CD34阳性染色的微血管(毛细血管、小动脉、小静脉)，选择染色最多的区域，在高倍镜(400)下进行观察，任何被CD34抗体染成棕黄色的内皮细胞或内皮细胞簇，不论管腔内有无红细胞，均作为一个微血管计数。计算5个高倍镜(400)视野下的微血管数，取其平均值作为MVD。
2 结果
2.1 MMP-2、TIMP-1结果分析 阳性信号为胞浆内出现黄色颗粒，以PBS代替一抗的空白对照切片中，无任何阳性反应。
17例患者中, 有15例患者皮损表皮中MMP-2表达，主要位于基底层细胞胞浆(见图1)。14例患者的角质形成细胞及真皮浅层血管周围有TIMP-1的表达(见图2)。正常人皮肤中MMP-2、TIMP-1表达均为阴性。详见表1。
图1 皮损中MMP-2阳性染色(×40)（略）
图2 皮损中TIMP-2阳性染色(×40)（略）
正常人与患者皮损中MMP-2、TIMP-1表达强比较用Ridit分析。MMP-2：R正常组=0.533,R银屑病组=0.426,U=3.83>2.58,P<0.01; TIMP-1：R正常组=0.481,R银屑病组=0.383,U=3.57>2.58,P<0.01。
2.2 MVD结果分析 在正常对照组及银屑病患者的皮损真皮层血管内皮细胞均有CD34表达，银屑病患者MVD（18.93±9.46）显著高于正常对照组的MVD（4.34±1.67），差异有统计学意义(t=8.36,P<0.01) (见图3)。Spearman等级相关分析，银屑病患者皮损部位的MVD和MMP-2呈正相关(r=0.603,P<0.05)，与TIMP-1表达负相关（r=-0.524, P＜0.01)。
图3 皮损中CD34阳性染色（×20）（略）
3 讨论
MMP-2为MMPs成员之一，是ECM降解主要酶类之一，几乎可降解所有的细胞外基质成分,包括各种胶原、蛋白多糖和基质蛋白。TIMPs结合于活性MMPs的催化部位，抑制ECM的降解。二者具有精确的调控机制，保证了体内生理状态下ECM的重建与稳定，如果调节失控，MMPs/TIMPs平衡破坏，则可引发各种病理过程。ECM在维持正常组织结构与功能及细胞的生长和分化过程中起重要作用。ECM中的胶原、纤维连结蛋白、层黏素的结构在MMPs作用下降解,使血管内皮细胞增殖，原有血管形成新的分支，并在血管形成后期重塑基底膜和管腔过程中发挥重要的作用，研究发现［1］MMPs在促进肿瘤血管新生的过程中也具有重要的作用。银屑病皮损病理学显示真皮乳头层微血管扩张迂曲、通透性增高、血管数量增多。CD34为目前公认的血管内皮细胞标记物，通过染色血管内皮细胞，计数血管数量，反映血管增生的情况［2］。本研究显示，银屑病患者皮损的MVD明显高于正常对照组，与病理机制相符。有学者报道［3］，PUVA可能系通过抗血管新生作用达到治疗银屑病作用。
表1 MMP-2、TIMP-1在正常人与患者皮损中表达强度比较（略）
本研究发现银屑病患者皮损中MMP-2、TIMP-1呈强表达，而在正常皮肤不表达，与Fleisehmajer［4］等研究结果一致。而且患者皮损中MMP-2表达强度随着MVD的增高而增强，TIMP-1表达程度随着MVD的增高而减弱，提示MMP-2、TIMP-1介导银屑病新生血管形成中发挥重要的作用。笔者认为, TIMP-1作为MMP-2的天然抑制物在多个环节产生抑制血管形成的作用，通过诱导TIMP-1的表达，阻碍MMP-2介导的内皮细胞移动，抑制基质中ECM的降解和微血管生成，有望成为治疗银屑病的新途径，国外研究显示［5］，使用MMP-2抑制剂治疗银屑病具有较好的疗效。因此，对MVD的相关研究不仅为进一步探索银屑病发病机制提供新亮点，而且也为抗银屑病新药开发提供新的药物靶位。
（致谢：本文蒙第四军医大学西京医院皮肤科刘玉峰教授审阅。）
【参考文献】
［1］ 吕志强，李海刚，谢德荣，等.肺癌组织中MMP-2表达及与肿瘤血管形成关系［J］.中国肿瘤，2004，13（6）：378～380.
［2］ Fieger CB,Sassetti CM,Rosen SD.Endoglycan,a member of the CD34 family,functions as an L-selectin ligand through modification with tyrosine sulfation and sialyl Lewis［J］.J Biol Chem,2003,278:27390～27398.
［3］ Kuroda K, Sapadin A, Toru Shoji, et al. Altered expression of angiopoietins and tie2 endothelium receptor in psoriasis［J］.J Invest Dermatol, 2001, 116:713～720.
［4］ Fleisehmajer R. The study of MMP-2、TIMP-2 in psoriatic and non-psoriatic skin［J］. J Invest Dermatol,2000,115(5):771～777.
［5］ Sawa M, Tsukamoto T, kiyoi T, et al. New strategy for antedrug application: development of metalloproteinase inhibitors as antipsoriatic drugs［J］. J Med Chem, 2002, 14;45(4):930～936.
作者单位：台州市立医院皮肤科,浙江 台州 318000.