服之灵对大鼠的长期毒性试验

【摘要】  　　目的 观察服之灵对大鼠的长期毒性作用。方法 以健康SD大白鼠为受试对象，随机分为对照组和服之灵高、低剂量组，服之灵分别按3g／kg、1.5g／kg体重灌胃给药，连续给药4wk。观察给药期间及停药后大鼠的一般状况、体重变化、血液学指标、血液生化学指标及组织器官等方面的变化。结果 在连续给药4wk后，除极少数指标外，服之灵各剂量组大鼠的体重增长，外周血象、血液生化学指标、脏器系数及各组织器官的病理形态均未见有显著影响，与对照组基本一致。结论 服之灵连续给药4wk，对SD大鼠的无毒反应剂量为1．5g／kg.d-1。

【关键词】  毒理学;服之灵;长期毒性

　　Results of long-term toxicic test of Fuzhiling on rat.

　　WANG Hui, LUO Yi, WANG Guo-hua, et al.

　　First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical College, Guangzhou 510180, Guangdong, P. R. China

    Abstract：Objective  To observe the long-term toxicity of the Fuzhiling in rats.  Methods  The healthy SD rats were randomly divided into control group, large-doses group treated with 3g/kg of Fuzhiling and small-doses group treated with 1.5g/kg of Fuzhiling for a successive course of 4 weeks through oral administration. The general state and weight gain of the rats were observed. Routine blood biochemistry tests were performed and pathological changes of tissues were observed.  Results  There no marked effect in weight gain, periihperal blood and biochemical indexes, pathological changes in tissues and organs were observed in the rats treated with Fuzhiling as compared with that of control group.  Conclusion  There is no significant toxicity is observed in use of Fuzhiling for treatment of rats four weeks after administration and its maximal tolerance dosages for rats was 1.5g/kg·d-1.

    Key words：Toxicology； Fuzhiling； Long-term toxicity

    服之灵是依据传统中医药理论，采用现代制药工艺研制而成的纯中药制剂，具有抗肿瘤及提高免疫力之功效。为了解服之灵连续多次给药后，对机体产生毒性反应的情况，为临床安全用药提供科学依据，本实验对该药进行了大鼠长期毒性试验，现报告如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 药物 

　　服之灵，由广州天河顺康中医药研究所治易好（香港）药业有限公司提供，本品为淡褐色药粉，纯中药制剂。

　　1.2 实验动物 

　　选用健康SD大白鼠，体重130～150g雌雄各半。由广东省医用实验动物中心提供。试验前观察1wk，并记录各组动物食量和体重等。在通风光照良好，温度(25±2)℃，湿度为50%～70％动物房。采用分笼饲养(5只／笼)，定量、定时喂养，大鼠专用颗粒饲料由广东省医用实验动物中心提供。

　　1.3 试验剂量的设置

　　参考临床拟用量、药效学资料及急性毒性试验资料进行设置［1］。该药急性毒性试验未能测出小鼠经口给药的LD50，其最大耐受剂量为13.2g/kg以上；临床拟用量为0.067g/kg，本试验高、低二个剂量设置为临床日最高剂量的45及22.5倍，分别为1.5g/kg及3g/kg，另设空白对照组(蒸馏水)。
　　
　　1.4 动物分组 

　　将大鼠称重，随机分为3组，蒸馏水对照组、高、低剂量组，20只/组，雌雄各半。

　　1.5 给药方法 

　　服之灵分别配制成含生药量为1.5g/ml及3g/ml药液，每只大鼠按15ml/kg灌胃给药，每天1次，每周7d，对照组给等量蒸馏水。每周称体重1次，按体重调整给药量。按临床疗程为1wk，故给药周期定为1个月(即4wk)。停药后继续观察2wk。

　　1.6  观察指标

　　1.6.1  一般观察 

　　包括外观体征和行为活动，粪便性状，食量及体重变化等，每周称体重一次，并及时做好记录，发现死亡或濒死动物及时尸检。

　　1.6.2  血液学指标 

　　Sysmex F-800血细胞自动计数仪检测RBC、HGB、WBC及白细胞分类。

　　1.6.3  血液生化学指标 

　　用日立7170型生化分析仪检测谷丙转氨酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐（Crea）。

　　1.6.4  系统尸检及病理学检测［2］ 

　　在给药期和恢复期结束时分别进行。
       　
　　用颈总静脉放血法将各组大鼠处死，全面观察并记录各器官的变化，为组织学检查提供依据。取重要脏器，包括心、肝、脾、肺、肾，去除血液，称其重量，并计算脏器系数。将对照组和高剂量组动物的心、肝、脾、肺、肾做组织学检查，并把各项结果分别记录。
    　　
　　恢复期观察：最后一次给服之灵后第2d，将各组动物的2/3(每组14只，雌雄各半)活杀取血检测各项指标。余下动物停药继续观察2wk，再进行检查，以了解毒性反应的可逆程度和可能出现的延迟性毒性反应。在此期间除不给服之灵外，其他观察与给药期相同。

　　1.7 数据分析 

　　检测数据均输入计算机，用SPSS10.0软件进行统计学分析，求出P值(显著性检验)。

　　2 实验结果

　　2.1  服之灵对大鼠一般状况的影响 

　　给药期间，各给药组大鼠外观无异常，毛色有光泽，活动自如，摄食、粪便等均未见异常，体重随年龄增长而增加，与对照组比较差异无统计学意义。各组动物在停药后观察2wk，一般状况也未见异常，高、低剂量组动物体重的增长与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

　　2.2  服之灵对大鼠血液学指标的影响 

　　服之灵连续用药4wk，大鼠血清学各指标与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

　　2.3  服之灵对大鼠血液生化指标的影响 

　　结果显示，高剂量组的谷丙转氨酶从给药第2wk开始高于对照组(P<0．05)，并持续至给药4wk(P<0．05)。余各项指标检测结果与对照组比较差异无统计学意义(P>0。05)，见表1。表1  服之灵连续用药对大鼠血液生化指标的影响（略）注：Rec指停药后2wk；与对照组比较，P<0.05,P<0.01(下同)。
   
　　停药后观察2wk，高剂量组谷丙转氨酶(ALT)下降。各剂量组的肝、肾功能指标与对照组比较，无明显差异(P>0.05)。

　　2.4  服之灵对大鼠脏器系数的影响 

　　结果可见，除高剂量的肝脾脏器系数明显高于对照组(P<0.01)外，余各组脏器系数与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。结果可见，除高剂量的肝脾脏器系数明显高于对照组(P<0.01)外，余各组脏器系数与对照组比较，差异无统计学意义(P<0.05)。表2  服之灵连续用药4wk对大鼠脏器系数的影响(略）

　　停药后2wk，高剂量组的肝脾脏器系数恢复正常，各给药组动物的脏器系数与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。表3  服之灵停药后2周对大鼠脏器系数的影响(略）

　　2.5 病理学检查 

　　连续给药4wk后，各组处死2／3大鼠，解剖动物，肉眼检查各给药组及对照组的内脏器官，无发现异常。剖取心、肝、脾、肺、肾5种器官，检查外观未发现异常。对照组及高剂量组器官经病理组织学检查，未见心外膜及心内膜增厚及炎性浸润，未见心肌变性或坏死，没有间质的炎性浸润；肝细胞未发现变性或坏死，汇管区或肝包膜下没有炎性浸润；脾脏正常;肺部没有支气管肺炎或间质性肺炎以及支气管炎或其他特殊性肉芽组织形成；肾脏未发现曲管上皮变性或坏死，没有间质炎性浸润，也没有发现尿小管内管型的形成。病理结果提示，服之灵对大鼠连续用药4wk，无中毒性病变及其他影响。

    余1/3动物停药后观察2wk， 肝、肾功能及脏器系数与对照组比较差异无统计学意义，尸检也未见异常，故不做组织学检查。

　　3 讨论

    本实验观察服之灵3g/kg·d-1及1．5g/kg·d-1 2个剂量连续口服给药4wk对SD大鼠的毒性作用，结果各组动物未见死亡，一般状况及体重增长良好，对动物血液学及肾功能无明显影响。高剂量组(3g/kg·d-1)谷丙转氨酶从给药第2wk开始高于对照组(P<0.05)， 并持续至给药第4wk(P<0.05)。各组动物肉眼尸检未见异常，高剂量组肝脾脏器系数高于对照组(P<0．01)；组织学检查结果，心、肝、脾、肺、肾等重要脏器未见中毒性病理改变。
       
　　停药后观察2wk，各组动物一般状况及体重增长均良好，高剂量组谷丙转氨酶及肝脾脏器系数下降，与对照组比较无显著差异。未见延迟性毒性反应。

    实验结果表明，服之灵连续给药4wk，对SD大鼠的无毒反应剂量为1.5g/kg·d-1。约相当于临床拟用量(0.067g/kg)的22.5倍(按g/kg计)或3.5倍(g/m2计)，剂量增大，将会使转氨酶升高，但停药后可恢复正常。因此，在临床应用过程中需观察肝功能的变化，及时调整治疗方案。

【参考文献】
  　　［1］王北婴.中药新药研制与申报［M］.北京：中国中医药出版社，1995，260.

　　［2］徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学［M］.第3版.北京：人民卫生出版社，2002：67.