蛇床子素对体外阴道毛滴虫的杀灭研究

【摘要】  　　目的 观察蛇床子素对体外阴道毛滴虫的杀灭效果及安全性。方法 以蛇床子素的终浓度为0.56～4.48mg/ml作用于体外培养的阴道毛滴虫。结果 1.12mg/ml为蛇床子素体外杀阴道毛滴虫的最低有效浓度。 结论 蛇床子素对体外阴道毛滴虫有杀灭效果。

【关键词】  阴道毛滴虫；蛇床子素；杀虫效果

　　An in vitro test of killing effect of osthol against Trichomonas vaginalis.

　　XIA Min-ling, DUN Li-fen, XU Jian-tao, et al.

　　1.Guangdong Medical College,Guangzhou 510182;
 
　　2.The First Affiliated Hospital of Guangzhou Medical College, Guangzhou 510120, Guangdong, P. R. China
   
　　Abstract：Objective  To explore the effects of osthol against Trichomonas vaginalis in vitro.  Methods  The effect of osthol on trichomonas vaginalis in vitro under the concentrations of 0.56～4.48mg/ml was observed.  Results  Osthol could inactivate trichomonas vaginalis in vitro under the minimal lethal concentrations of 1.12mg/ml.  Conclusion  Osthol is capable of inactivating the newly isolated strain of Trichomonas vaginalis at distinct extent in vitro.

    Key words：Trichomonas vaginalis；Osthol；Anti-trichomonas effect

    滴虫性阴道炎病是一种呈世界性分布的的性传播疾病，可引起多种并发症，孕期妇女感染滴虫可诱发早产、死胎及低体重儿出生。滴虫病与不孕症及子宫癌的发生也密切相关，并可增加HIV感染机会［1～3］。据资料显示近年来在广州该病有上升的趋势。1957年以来甲硝唑一直作为抗滴虫的首选药，在滴虫的治疗方面发挥了重要作用。然而随着甲硝唑的广泛应用。临床发现甲硝唑具有致畸作用，特别是育龄期病人，妊娠前三个月服药有致畸的可能，使甲硝唑的使用受到限制［4］。因而寻找新的、高效、低毒的替代药物受到医学界的普遍关注。蛇床子是一种常见中草药，它具有温肾补阳，燥湿，祛风，杀虫作用；并可用于阳痿，宫冷，寒湿滞下，湿痹腰痛；外治外阴湿疹，妇女阴痒的功效。其主要活性成分为蛇床子素(Osthole, ost) ,又名甲氧基欧芹酚( osthol, O st) ,是从伞形科植物蛇床成熟果实蛇床子( Fructus Cnidii)中提取的香豆素,其化学名称为7-甲氧基-8-异戊烯基香豆素［6］。而中草药在我国资源丰富，成本低廉，毒性低，因而开展本项实验研究。现将蛇床子对体外阴道毛滴虫杀灭效果报告如下。

　　1  材料与方法

　　1.1  实验药物 

　　蛇床子素,购自南京药物研究所植物化学室(纯度99.8%),使用时用体积分数为0.002的吐温-80配制。

　　1.2 阴道毛滴虫虫种 

　　2006 年于广州医学院第一附属医院检验科确诊的滴虫性阴道炎患者的分泌物中分离培养而得。

　　1.3  实验方法

　　1.3.1  虫株的培养 

　　取阴道毛滴虫分别接种于灭菌肝浸汤培养液［6］。pH 5.5～6.0于(36±0.5)℃下培养,24h传代。试验用阴道毛滴虫经培养48h,阴道毛滴虫运动活泼,死亡率<2%,培养液含虫密度为100～200个/mm3［7］。

　　1.3.2 药物配制 

　　蛇床子素用培养液分别配制成含药量为2mg/ml的原液,按实验需要吸取一定量原液注入各实验管内,随即加入虫液至5ml。使蛇床子的终浓度为0.56～4.48mg/ml(分为3管) 。空白对照组加生理盐水。

　　1.4 观察与判断 

　　将药物实验组与对照组置培养箱中培养0.5、1.0、4.0、8.0和24.0h,分别吸取各管虫液,滴片镜检,虫体变圆,结构模糊,胞质内出现空泡,鞭毛与波动膜不运动甚至缺如判为死亡。在高倍镜下观察计数各管死亡率,并用血细胞计数,计数各管滴虫浓度，实验重复3次。

　　2 结果

　　2.1 蛇床子素对阴道毛滴虫作用的显微镜观察 

　　在高倍镜下观察与对照组比较,用药组的阴道毛滴虫发生明显变化,首先虫体变圆,胞质内出现空泡,鞭毛和波动膜运动明显减弱,逐渐停止运动,最终虫体破裂。

　　2.2 不同蛇床子素浓度的体外抗滴虫效果 

　　由表1所示，浓度不同的蛇床子杀灭滴虫的时间不同。同一作用时间，各用药组的滴虫死亡率均高于空白对照组（P<0.01），且虫体死亡率随药物浓度增加而增加（P<0.01），同一药物浓度，随着作用时间延长，滴虫死亡率逐渐增高（P<0.01）。由于1.12mg/ml 及以上浓度的蛇床子实验组在用药后24h,阴道毛滴虫死亡率达100%,转种培养后均无阴道毛滴虫生长,故1.12mg/ml为蛇床子体外杀阴道毛滴虫的最低有效浓度。表1  蛇床子素体外抗阴道毛滴虫效果蛇床子素浓度(mg/ml)加药后不同时间阴道毛滴虫死亡率（略）注：与相应的空白对照组比较,*P<0.01。

　　3 讨论

    体外试验表明, 蛇床子素对阴道毛滴虫有较好的灭杀作用, 1.12mg/ml 对阴道毛滴虫即有作用。0.56mg～4.48mg/ml 浓度的药物对阴道毛滴虫均有抑制、杀灭和裂解的作用。随着药物浓度的提高,阴道毛滴虫的死亡率升高,死亡时间逐渐缩短。证实了蛇床子素在试管内确有杀阴道毛滴虫的作用。1.12mg/ml 是试管内杀灭阴道毛滴虫的最低有效浓度。实验结果将为研制新的外用兼口服的高效低毒抗滴虫药物探索有效的途径。

【参考文献】
  　　［1］Petrin D,Belgaty K,Bhatt R,et al.Clinical and microbiological aspects of Trichomonas vaginalis［J］.Clin Microbiol Rev,1998,11(20):300.

　　［2］Narcisi EM,Secor WE.In vitro effect of tinidazole and furazolidone on metronidazole-resistant Trichomonas vaginalis［J］.Antimicrob Agents Chemother,1996,40(6):1121.

　　［3］Goldman P.Metronidazole:proven benefit and potential risks［J］.Jones Hopkins Med J,1980,147(1):1.

　　［4］吴观陵.人体寄生虫学［M］.北京：人民卫生出版社，2004,112～117.

　　［5］刘建新, 连其深.蛇床子素的药理学研究进展［J］. 时珍国医国药，2005， 16（12）：1235～1237.

　　［6］史明珠，许兵红，艾予川，等.不同PH值对阴道毛滴虫体外培养的影响［J］.河南预防医学杂质，2002，13：208～209.

　　［7］李泽民，房文亮，冯晓勇，等.氯氰菊酯对体外阴道毛滴虫的杀灭研究［J］.中国人兽共患病杂志，2005，21（6）:544.