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【摘要】 目的 为了探讨皮肤鳞状细胞癌（简称鳞癌）中核因子-κB(Nuclear factor kappaB, NF-κB)、基质金属蛋白酶2（MMP-2）的表达及其与肿瘤分化程度和淋巴结转移的关系。 方法 用ABC免疫组化技术观察50例皮肤鳞癌（高分化鳞癌34例，低分化鳞癌16例,其中14例淋巴结转移）。 结果 NF-κB 与MMP-2表达于瘤细胞和癌旁间质细胞、内皮细胞质中。NF-κB表达阳性率为80%，在低分化鳞癌中的表达明显高于高分化者（P=0.007），且表达越高淋巴结转移率越高（P=0.004）。MMP-2表达阳性率为76%，在低分化鳞癌中的表达明显高于高分化者（P=0.021），且表达越高淋巴结转移率越高（P=0.003）。 结论 皮肤鳞癌中NF-κB和MMP-2表达与其分化程度及淋巴结转移有关。
【关键词】 皮肤鳞状细胞癌 核因子-κB 基质金属蛋白酶2
NF-κB为抗凋亡因子，在其家族中绝大部分成分为p50/p65，肿瘤的浸润转移的生物学行为与NF-κB激活有关［1］。基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinase, MMP）是一组在结构与功能上极为相似的含锌内肽酶，依其结构与底物特异性分为5个亚型：胶原酶（MMP-1、-8、-13）、明胶酶（MMP-2、-9）、间质溶素（MMP-3、-7、-10、-11、-12）、膜型MMP（MT1-、MT2-、MT3-、MT4-MMP或称MMP-14、-15、-16、-17）和其它MMP；MMP几乎能降解细胞外基质和基底膜的所有成分，在肿瘤侵袭和转移中起重要作用，可抑制肿瘤侵袭和转移［2,3］。近年研究表明NF-κB和MMP-2在肿瘤侵袭和转移中起重要作用［1～3］。本研究采用ABC免疫组化技术观察皮肤鳞癌及其淋巴结转移灶中NF-κB和MMP-2表达，以探讨NF-κB和MMP-2在皮肤鳞癌侵袭和转移中的作用。
1 材料与方法
1.1 材料 选取本院和广东医学院附属医院1997～2002年间的皮肤鳞癌手术切除标本50例，其中伴淋巴结转移者14例，无转移者36例。男36例，女12例，年龄32～90岁（平均61.3岁），病程1个月～30年（平均1.8年）。所有患者均按WHO分类标准将鳞癌分为Ⅰ～Ⅳ级，Ⅰ、Ⅱ级为高分化鳞癌（34例），Ⅲ、Ⅳ级为低分化鳞癌（16例）。另取10例正常皮肤标本作对照及10例皮肤鳞癌患者淋巴结转移标本作对照。
1.2 方法
1.2.1 试剂 兔抗人NF-κBp65、兔抗人MMP-2和兔抗人LN抗体及即用型SABC免疫组化染色试剂盒均购自武汉博士德生物工程公司。
1.2.2 ABC法 石蜡切片常规处理后，依次加入适当稀释的一抗（NF-κB p65、MMP-2、LN的工作浓度均为1:100），生物素标记二抗、SABC，DAB显色、苏木素复染。用已知阳性片作阳性对照，PBS代替一抗为阴性对照。
1.3 结果判断标准 NF-κB p65与MMP-2以胞质着色为阳性。按着色强弱分为：无着色为0，浅黄色为1，深黄色为2，棕黄色为3。着色范围以在10×40高倍镜下随机选取5个视野（每个视野100个细胞），计数阳性细胞所占的百分比均值：<25%为1，25%～50%为2，≧50%为3。上述两项相加为NF-κB p65或MMP-2的表达强度积分：<2为阴性，<3为弱阳性（+），3～4为阳性（++），>4为强阳性（+++）。
1.4 统计学分析 采用SAS 8.01 for windows分析，组间比较采用卡方检验。
2 结果
2.1 NF-κB p65与MMP-2表达模式 NF-κB p65在正常表皮、毛囊及小汗腺导管，其中以基底细胞表达最强。鳞癌中NF-κB p65的阳性表达率为80%（40/50），表达较弱者均匀分布于癌巢中，表达较强者以癌巢中心为著，癌旁间质中成纤维样细胞及血管内皮细胞亦有阳性着色。淋巴结转移灶中阳性表达强度及分布方式与原发灶相似。
MMP-2在正常表皮、毛囊均有弱表达，以基底细胞为著。鳞癌中MMP-2的阳性表达率为76%（38/50），表达较弱者均匀分布于癌巢中，表达较强者以癌巢中心为著，癌旁间质中成纤维样细胞及血管内皮细胞亦有阳性着色。淋巴结转移灶中阳性表达强度及分布方式与原发灶相似。
2.2 NF-κB p65、MMP-2表达与鳞癌分化及转移的关系 NF-κB p65、 MMP-2表达在高分化与低分化鳞癌组中的差异均有显著性（表1），与鳞癌分化程度亦有显著相关。
表1 NF-κB p65、MMP-2表达与鳞癌分化程度及淋巴结转移的关系（略）
3 讨论
NF-κB是近年来发现的一种转录因子，其表达水平与某些肿瘤的浸润、粘附、转移行为密切相关。NF-κB引起肿瘤细胞浸润、粘附、转移的原因是由于NF-κB激活后导致许多粘附分子、血管生长因子、基质蛋白酶的瀑布样释放［1］。肿瘤细胞和ECM的相互作用在肿瘤的浸润与转移过程的各个阶段均存在，MMP-s能降解ECM和基底膜（BM），与肿瘤的浸润和转移密切相关，BM的降解意味着肿瘤的浸润与转移，而在良性病变过程中BM是完整的。ＩＶ型胶原在维护BM的完整性起重要作用，ＩＶ型胶原酶可分为MMP-2 和MMP-9。MMP-2分子量为72KD是一种依赖锌离子的蛋白水解酶，由多种细胞（如成纤维细胞、巨噬细胞和内皮细胞）分泌；通常以酶原的形式存在，须激活后才能酶解蛋白，能降解细胞外基质（ECM）和基底膜成分，破坏局部组织结构、增加肿瘤诱导的血管形成，故其在肿瘤发展和侵袭的各个阶段均起重要作用［2～5］，其作用的底物主要是ＩＶ型胶原和明胶。
研究证实NF-κB在许多肿瘤中被激活，其活性程度与许多肿瘤的转移能力密切相关；药物或基因转染抑制NF-κB的活化，则肿瘤细胞的转移能力明显降低； NF-κB与肿瘤转移的关系是间接的，MMPs，IL-8，VEGF等分子可能起桥梁作用［6～8］。本研究证实了NF-κBp65蛋白表达较强者以癌巢中心为著，在低分化皮肤鳞癌的表达明显高于高分化皮肤鳞癌的表达，表明NF-κB激活在皮肤鳞癌的发展中有重要作用；NF-κBp65蛋白表达在淋巴结转移组高于非转移组，表明NF-κB参与了皮肤鳞癌的浸润转移过程。本研究亦发现MMP-2在皮肤鳞癌的癌细胞与间质细胞中均有表达，其在淋巴结转移灶中的表达强度与分布方式类似于原发灶；MMP-2表达随鳞癌分化程度降低而增加，其与淋巴结转移有关。结果提示低分化鳞癌可产生较多的MMP-2来降解细胞外基质，从而有助于肿瘤的局部侵袭。因此，NF-κB 和MMP-2在鳞癌的浸润转移过程中共同发生作用。
【参考文献】
［1］ Choo MK, Sakurai H, Kim DH, et al. A ginseng saponin metabolite suppresses tumor necrosis factor-alpha-promoted metastasis by suppressing nuclear factor-kappaB signaling in murine colon cancer cells［J］. Oncol Rep, 2008, 19(3):595～600.
［2］ Airola K, Fusenig NE. Differential stromal regulation of MMP-1 expression in benign and malignant keratinocytes［J］. J Invest Dermatol, 2001, 116(1):85～92.
［3］ Kerkel E, Ala-aho R, Jeskanen L, et al. Differential patterns of stromelysin-2 (MMP-10) and MT1-MMP (MMP-14) expression in epithelial skin cancers［J］. Br J Cancer, 2001, 84(5):659～669.
［4］ Yoshizaki T, Maruyama Y, Sato H, et al. Expression of tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-2 correlates with activation of matrix metalloproteinase-2 and predicts poor prognosis in tongue squamous cell carcinoma［J］. Int J Cancer, 2001, 95(1): 44～50.
［5］ Kerkel E, Ala-aho R, Jeskanen L, et al. Expression of human macrophage metalloelastase (MMP-12) by tumor cells in skin cancer［J］. J Invest Dermatol, 2000, 114(6):1113～1119.
［6］ Lee SO, Jeong YJ, Kim M, et al. Suppression of PMA-induced tumor cell invasion by capillarisin via the inhibition of NF-kappaB-dependent MMP-9 expression［J］. Biochem Biophys Res Commun, 2008, 366(4):1019～1024.
［7］ Related Articles, LinksTamatani T, Azuma M, et al. Enhanced radiosensitization and chemosensitization in NF-kappaB-suppressed human oral cancer cells via the inhibition of gamma-irradiation- and 5-FU-induced production of IL-6 and IL-8［J］. Int J Cancer, 2004,108(6):912～921.
［8］ De Veas RG, Schweigerer L, Medina MA. Matrix metalloproteinase-2 and tissue inhibitor of metalloproteinase-2 expression in paediatric tumour cells. Effects of tumour cell proliferation modulators on gelatinolytic activity［J］. J Cancer Res Clin Oncol, 1995,121(5):275～278.
作者单位：东莞市慢性病防治院，广东 东莞 523008;广东医学院附属医院皮肤科,广东 湛江 524001