点击显示 收起
【摘要】 目的 研究乙型肝炎病毒（HBV）前S1（Pre-S1）抗原与乙型肝炎病毒肝炎病毒复制的相关性，评价Pre-S1 抗原在乙型肝炎诊断及治疗中的临床意义。 方法 应用酶联免疫吸附实验（ELISA）法及实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法对457例乙肝患者血清进行了HBV血清学标志（“两对半”）、Pre-S1抗原、HBV DNA检测，并对检测结果进行了相关性分析。 结果 在457例乙肝标本中，Pre-S1抗原阳性百分率为53.1%，与HBV DNA阳性率无显著差异（χ2=3.239，P＞0.05）；在具有不同HBV DNA载量的各组中，Pre-S1抗原与HbeAg阳性率都随着病毒拷贝数的增加而增加，而Pre-S1敏感性和准确性要优于HbeAg（χ2=56.770，P<0.01）。 结论 Pre-S1抗原与HBV DNA具有高度相关性，能敏感的反映乙肝病毒的感染与复制情况，在乙型肝炎诊断及治疗中具有重要意义。
【关键词】 乙肝病毒 前S1抗原 DNA 病毒复制
慢性乙型肝炎是世界上最常见的传染病之一,我国为高发区，约10％人口为乙肝病毒（HBV）携带者。慢性乙型肝炎易发生肝硬变及肝癌,预后极差，长期以来临床以HBeAg作为判断患者体内乙肝病毒复制的关键指标，但近来发现部分HBeAg阴性患者体内仍存在病毒复制现象。应用PCR方法定量检测HBV DNA被认为是HBV复制的金标准［1,2］，但此方法实验条件要求较高，成本昂贵，不适合大规模筛查及在基层单位开展。目前，乙肝病毒的新的血清学标志物乙肝病毒前S1（Pre-S1）抗原临床意义逐步被认识并逐步应用于临床。本研究将乙肝病毒的Pre-S1抗原与HBeAg、HBV DNA等其他指标进行分析、对比，以评价其在乙肝病毒检测的临床意义。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 标本来源 所有标本来源于我院2007年1～6月门诊及住院病人，共457例，所有标本表面抗原阳性，符合2000年9月中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学会联合修订的“病毒性肝炎防治方案”修订的诊断标准［3］，其中男性297例，女性160例，年龄15～62岁。正常对照组50例，为我院2007年6月健康体检者，男性29例，女性21例，年龄18～55岁，乙肝病毒标志物阴性，肝功能正常。
1.1.2 检测试剂 Pre-S1抗原酶联免疫检测试剂盒购于上海阿尔法生物技术有限公司； HBV“两对半”酶联免疫检测试剂盒购于上海科华生物技术有限公司；HBV DNA荧光定量PCR检测试剂盒购于广州达安生物技术有限公司。
1.1.3 仪器 酶联免疫检测实验所用酶标仪为郑州安图2010酶标仪,洗板机为郑州安图anthos fiuido自动洗板机; HBV DNA荧光定量PCR使用美国ABI7500定量PCR仪。
1.2 方法 HBV血清学标志（“两对半”）、Pre-S1抗原采用酶联免疫吸附实验（ELISA）方法；HBV-DNA采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法。所有操作及结果判断均按仪器及试剂说明书执行。
1.3 统计学处理 采用SAS统计软件进行数据统计处理，阳性率采用百分率（％）表示，数据比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 不同HBV血清学标志模式（“两对半”检测）乙型肝炎患者的HBV DNA与Pre-S1抗原检测结果如表1所示。在457例乙肝病例中，Pre-S1阳性243例，阳性百分率为53.1%；HBV DNA阳性270例，阳性百分率为59.8%。经χ2检验显示Pre-S1阳性率与HBV DNA阳性率无统计学差异（χ2=3.239，P=0.07＞0.05）。
表1 HBV血清学标志物与Pre-S1抗原、HBV DNA检测结果（略）
2.2 HBV DNA拷贝数与Pre-S1抗原、HbeAg的相关性分析数据见表2。Pre-S1抗原阳性率、HbeAg阳性率均随HBV DNA拷贝数增加而增加，但Pre-S1抗原阳性率明显高于HbeAg阳性率，两者有统计学差异（χ2=56.770，P<0.01）。
表2 HBV DNA拷贝数与Pre-S1抗原、HbeAg的相关性分析（略）
*注:*标记数据为HBV DNA拷贝数>103（体内病毒复制阳性标准）病例统计结果，在这部分病例中，Pre-S1阳性比例达到了87.4%，HBeAg阳性比例仅为47.4%，二者有有统计学差异（χ2=89.512，P<0.01）。
3 讨论
HBV基因组有4个开放阅读框，分别为S、C、P和X区，其中编码病毒外壳蛋白的S区分为Pre-S1、Pre-S2以及S区，分别编码包膜上的Pre-S1、Pre-S2和HbeAg。乙肝病毒前S1（Pre-S1）抗原位于病毒颗粒表面，由108或119个氨基酸组成，具有高度的免疫原性，介导宿主的免疫应答，在病毒的感染、复制、装配上也有重要作用，变异的病毒只要这一片段完好就存在传染性［4～6］,近年来逐步成为新的HBV检测标志物 。
本研究分别对457例乙肝患者进行了传统“两对半”检测、Pre-S1抗原检测、HBV DNA检测，其中Pre-S1阳性率和HBV DNA总阳性率分别为53.1%和59.8%，统计结果显示两种检测方法无显著差异（χ2=3.239，P＞0.05）。在124例HBeAg（+）病例中，Pre-S1阳性率和HBV DNA阳性率分别为90.3%和97.5%，说明HbeAg阳性与Pre-S1抗原、HBV DNA阳性具有高度一致性。但在307例“两对半”检测HBsAg（＋）、抗-HBe(＋）、抗－HBc（＋）病例中，Pre-S1阳性率和HBV DNA阳性率分别为37.1%，40.7%，表明HbeAg转阴后并不表示HBV的消除，仍存在病毒复制的可能，对于HbeAg阴性的患者仍需要进一步检查Pre-S1抗原和HBV DNA用以判断是否存在HBV复制［7,8］。
在HBV DNA拷贝数>103的体内乙肝病毒复制阳性病例中，Pre-S1抗原阳性率为87.4%，HBeAg阳性率仅为47.4%，表明Pre-S1抗原的诊断敏感度和准确性明显高于HbeAg（χ2=89.512，P<0.01）。在具有不同HBV DNA载量的各组中，Pre-S1抗原与HbeAg阳性率都随着病毒拷贝数的增加而明显增加，而Pre-S1阳性率均高于HbeAg，表明二者均能间接反映HBV DNA的体内复制，而Pre-S1敏感性要优于HbeAg（χ2=56.770，P<0.01）。在187例HBV DNA拷贝数＜103的病例中，Pre-S1抗原阳性与HbeAg阳性比例分别为3.7%与1.6%，说明两者诊断特异性基本相似。
在HBV DNA 阳性的270例标本中仍然有34例Pre-S1抗原阴性，推测与Pre-S1基因缺失突变有关，文献表明部分乙肝患者与病毒携带者HBV DNA存在Pre-S1区缺失现象，但此突变并不影响病毒的复制与装配［9］。本研究中有7例Pre-S1抗原阳性而HBV DNA检测阴性标本，推测原因为患者进行抗病毒治疗后体内HBV DNA拷贝数下降至103以下而体内Pre-S1抗原清除速度略为滞后［10］，仍能被检测出有关。
Pre-S1抗原检测与HBV DNA具有高度相关性，是优于HbeAg的血清学检测指标，可以可靠的反映HBV的感染与复制情况，对于乙肝的诊断与预后判断具有重要意义，是HBV“两对半”与HBV DNA检测的有效补充。
【参考文献】
［1］ 夏邦世,沈中海,马红松,等.慢性乙型肝炎患者HBV前S1抗原及HBV-M和HBV DNA与肝功能的关系［J］.中华检验医学杂志,2004,27:575～576.
［2］ 王忠平,张中伟,周永兴,等.PCR检测慢性乙型肝炎患者 HBV-DNA及其意义［J］. 世界华人消化杂志,2000,8:755～757.
［3］ 中华医学会传染病与寄生虫分会、肝病学会.病毒性肝炎防治方案［J］.中华传染病杂志,2001,19:56～62.
［4］ 何华,张大志.乙型肝炎病毒前S1抗原的研究进展［J］.中华肝脏病杂志,2004,12:765～766.
［5］ Hu WG, Wei J, Xia HC, et al. Identification of the immunogenic domains in HBsAg preS1 region using overlapping preS1 fragment fusion proteins［J］. World J Gastroenterol, 2005,11(14):2088～2094.
［6］ Hu WG, Wei J, Yang XX,et al. Expression of overlapping PreS1 fragment recombinant proteins for the determination of immunogenic domains in HBsAg PreS1 region［J］. Acta Biochim Biophys Sin, 2004,36(6):397～404.
［7］ 李琴，孙桂珍，魏玉香，等.前S1蛋白与病毒DNA和核心抗原对乙肝病毒复制诊断的对比［J］.中华肝脏病杂志,2004,12:134～136.
［8］ 崔红花,王晶莹,谢风.HBV Pre-S1抗原检测与HBV DNA监测及临床评价［J］.中国实验诊断学,2007,11:482～485.
［9］ Suganchi F,Ohno T,O rito E,et al.Influence of hepatitis B virus gene 2 types on the development of pre-S deletions and advanced liver disease［J］. J Med Virol, 2003,70(4):537～544.
［10］ Haruma Y,Hayashi N,Yuki N,et al.Serum pre-S1 and pre-S2 antigen as prognistic markers in interferon therapy for chronic hepatitis B［J］.Scand J Gastroenterol,1992,27:615～619.
作者单位：荆州市第一人民医院检验科，湖北 荆州 434000.