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【摘要】 目的 了解云南战区部队感染性腹泻患者的类志贺邻单胞菌(Ps)感染状况与其毒力及药敏谱。 方法 用SS琼脂平板分离培养，肠道细菌双糖鉴别管初筛，常规生化和VITEK32全自动微生物鉴定仪进行鉴定，电子显微镜观察形态，小白鼠腹腔注射测定毒力。药敏试验采用K-B法。 结果 从336例腹泻患者粪便中分离出8株Ps菌，检出率为2.38%。全部对小白鼠毒力测定阳性,14种常用抗生素中有9种敏感、2种中度敏感及3种耐药。 结论 云南战区部队存在Ps感染，该菌毒力较强;药敏谱的明确为部队和地方今后治疗此菌感染提供重要参考。
【关键词】 类志贺邻单胞菌 腹泻 毒力 药敏谱
类志贺邻单胞菌（Plesiomonas shigelloides,以下简称Ps）是近些年来颇受关注的能引起腹泻的重要肠道病原菌，该菌属于弧菌科的邻单胞菌属，广泛分布于自然界，国内已有从人、动物和外环境等多种来源的标本中分离到此菌的报道。为了解云南战区部队是否有Ps感染，近年来我们在对云南战区部队进行感染性腹泻病原监测中同时作Ps的分离鉴定，首次检出Ps，并对其做了生物学特性、毒力及药敏试验，现将结果报告如下。
1 材料和方法
1.1 标本来源 云南战区部队感染性腹泻患者新鲜粪便,共采集到336份。
1.2 培养基 SS琼脂、血琼脂平板、细菌生化鉴定管，购自杭州天和微生物试剂有限公司;肠道细菌双糖鉴别管（简称双糖管）购自上海市疾病预防控制中心。
1.3 细菌分离培养与鉴定 将腹泻患者新鲜粪便标本接种SS琼脂平板，37℃培养18～24h,挑取不发酵乳糖的菌落接种于双糖管和营养琼脂平板内，37℃培养18～24h,双糖管生化反应可疑菌株、氧化酶阳性者（以营养琼脂平板上菌落进行），再做主要常规生化试验和用法国梅里埃VITEK32微生物全自动鉴定仪进一步系统鉴定。
1.4 电子显微镜检查 将分离菌接种普通肉汤内37℃培养18h，2%磷钨酸(pH6.4)负染制样，用日立—600型电镜观察。
1.5 毒力试验 将分离的Ps接种普通肉汤，37℃培养18～24h,分别每株腹腔注射试验组小白鼠5只（小白鼠购自昆明医学院实验动物中心,每只体重18～20g），每只注射0.5ml,对照组同法注射无菌肉汤，连续观察7d。
1.6 药敏试验 采用WHO推荐的改良K-B纸片法。药敏纸片系北京天坛生物技术公司产品，在有效期内使用。
2 结果
2.1 生物学特性 该菌在SS琼脂平板上菌落为圆形、光滑、湿润、半透明，表面为隆起,不分解乳糖，直径约1～2mm。在血琼脂平板上不溶血。革兰染色阴性杆菌，两端钝圆。在电子显微镜下可见菌体一端有丛鞭毛（见图1 ）。
2.2 生化反应特性 ①双糖管上葡萄糖产酸不产气，靛基质、动力阳性。甘露醇、蔗糖、尿素、H2S阴性;②主要生化特征：氧化酶、赖氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶、鸟氨酸脱羧酶、肌醇、硝酸盐还原阳性。在无盐和3%盐胨水中生长，7%～10%盐胨水中不生长。乳糖、苯丙氨酸脱氨酶、枸橼酸盐、明胶液化、氰化钾阴性。VITEK32微生物全自动鉴定仪系统鉴定结果见表1。
2.3 毒力试验 注射Ps肉汤培养物的试验组小白鼠，均在24h之内发病，48h内相继死亡，解剖后分离到感染的Ps。对照组观察7d全部存活。
图1 类志贺邻单胞菌分离菌菌体形态（20000×）（略）
表1 检出Ps在VITEK32仪上的鉴定结果（略）
2.4 药敏试验 对分离的Ps做了14种抗生素药物敏感试验，结果见表2。
表2 Ps分离株的药敏试验结果（略）
注：S: 敏感；MS: 中度敏感；R :耐药
3 讨论
Ps是邻单胞菌属中惟一的一个种。该菌广泛分布于自然界，生存于淡水中，常通过水、鱼及贝类感染人类，可引起创伤感染、脑膜炎、腹泻和食物中毒等疾病［1］。近十几年发现，该菌是一种新的引起人类腹泻的重要肠道病原菌，国内外均有从腹泻患者中分离出此菌的报道。目前国内大多数基层卫生单位对此菌的分离技术以及生物学特性比较生疏，在一定程度上影响到感染性腹泻病原菌的监测及对该菌的检验工作。我们采用SS培养基进行分离，肠道细菌双糖鉴别管初筛，再做10余个常规生化试验项目即可作出确定诊断。氧化酶、赖氨酸脱羧酶、精氨酸双水解酶、鸟氨酸脱羧酶、耐盐试验和葡萄糖、肌醇发酵试验是该菌的重要生化鉴别项目。为验证所使用的常规生化试验项目鉴定Ps是否准确，又应用VITEK32全自动微生物鉴定仪进行了对比性鉴定，结果常规生化与全自动微生物鉴定仪所得出的结果一致。由于全自动微生物鉴定仪价格比较昂贵，很多基层卫生单位目前尚无这种仪器。使用分离检验鉴定Ps的常规生化方法，亦可进行鉴定，其检验程序可与其它肠道病原菌常规检验同时进行。此法简便实用，无需特殊仪器，且费用低廉，易于在基层卫生防疫和临床检验部门推广使用。在分离鉴定Ps的过程中，我们还使用了电镜观察该菌的菌体形态，使得我们更进一步加深了对本菌的了解和认识。据资料报道,该菌的致病因素尚不清楚［2］。对分离的Ps做毒力测定，能使小白鼠发病死亡，究竟是何种毒力因子在起作用，有待于进一步研究。药敏谱的明确，可指导合理使用抗生素，避免滥用，这样不仅能提高治愈率，而且能直接产生一定的军事和经济效益。
【参考文献】
［1］ 高群，王志胜，王品滋.腹泻病人粪便中26株类志贺邻单胞菌的报告［J］.职业与健康，2001,17（5）：43.
［2］ 王秀茹.预防医学微生物及检验技术［M］.第1版.北京：人民卫生出版社，2002,356.
作者单位：成都军区疾病预防控制中心军事医学研究所, 云南 昆明 650032； 昆明市疾病预防控制中心, 云南 昆明 650034