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【摘要】 目的 研究抑癌基因PTEN在宫颈癌组织中的表达，探讨PTEN与宫颈癌临床及病理特征的关系。 方法 应用免疫组织化学方法(SP法)检测PTEN基因在46例宫颈癌组织中的表达。 结果 46例宫颈癌组织中，PTEN阳性表达率为36.9%，其中在高、中、低分化宫颈癌中的阳性表达率分别为55.6%、41.7%和25.0%，PTEN阳性表达率与宫颈癌病理学类型和患者年龄无相关性(P>0.05)；临床分期Ⅰ期和Ⅱ期及以上者阳性表达率分别为58.8%和24.1%(P<0.05)；有、无淋巴结转移者的阳性表达率分别为23.1%和42.4%(P<0.01)；在直径＜4cm或≥4cm的宫颈癌组织中的阳性表达率分别为23.1% 和55.0%(P<0.05)； 结论 PTEN异常表达可能与宫颈癌发生、发展及预后有关。
【关键词】 PTEN 宫颈癌 基因表达
Expression and clinical significane of PTEN gene in tissues of cervial cancer patients.
CHEN Li-hua, CHEN Ying-yan.
(Hainan Provincial Land Reclamation General Bureau Hospital, Haikou 570311, Hainan, P. R. China)
Abstract：Objective To investigate the expression of PTEN gene in human cervical cancer and clarify the relationship between the expression of PTEN gene and the clinical and pathological features of cervical cancer. Methods The expression of PTEN in 46 samples of cervical cancer tissues were detected by immunohistochemistry streptavidin-perosidase (SP) method. Results The positive expression rate of PTEN in cervical cancer tissues was 36.96%．The positive rate in the high, middle and low pathohistologic grading was 55.56%, 41.7% and 25.0%. The expression of PTEN was not correlated with the cervical cancer pathologic types and patients’ ages(P>0.05，respectively).The positive rate in clinical cancer stages I and ≥Ⅱa was 58.8% and 24.1%(P<0.05), 42.4% of the cases without and 23.1% of the cases with lymph node metastas showed positive for PTEN(P<0.01)．In cancerous focus size<4cm and≥4cm，the positive rate of PTEN was 55.0% and 23.1%(P<0.05). Conclusion The abnormal expression of PTEN may be assoicated with the tumorigenesis, development, prognosis of cervical cancer.
Key words：PTEN; Cervical cancer; Expression of gene
宫颈癌是一种常见的妇科恶性肿瘤，其发病率近年来有所上升，尤其是年轻宫颈癌病人的发病率上升明显。通过对肿瘤的深入研究，人们发现肿瘤也是一种基因异常变化的疾病，有多种原癌基因及抑癌基因参与发病，PTEN是近年发现的肿瘤抑制基因，在人类多种肿瘤及细胞系中存在失活和突变，从而引起相应蛋白表达异常。本研究采用免疫组化技术，探讨PTEN基因编码的蛋白失表达与宫颈癌临床及病理特征关系。
1 资料与方法
1.1 研究对象 收集2003年1月～2007年12月期间海南医学院附属医院妇科住院手术治疗的子宫颈癌患者46例为实验组，其标本均经病理检查证实为宫颈浸润癌。其中鳞癌42例、腺癌4例，年龄平均为46（32～70）岁。鳞癌中高分化癌8例，中分化13例，低分化21例。腺癌4例为中分化黏液腺癌。根据国际妇产科协会(FIGO)1995年修订的临床分期标准：Ia 期5例、 Ib 期12例、Ⅱa 期16例、Ⅱb 期9例、Ⅲa 期及以上4例，其中13例有淋巴结转移。所有患者术前均未接受过放疗或化疗。另取20例癌旁宫颈组织及10例正常宫颈组织作为对照。
1.2 方法 采用SP法进行免疫组织化学染色，PTEN鼠单抗、免疫组化试剂盒和DAB显色剂均购自北京中杉生物技术公司。标本常规石蜡包埋，4 μm连续切片，采用Power．Vision法．用PBS液替代一抗作阴性对照，用已知阳性宫颈癌标本作阳性对照。实验步骤严格按试剂盒说明书进行。
1.3 结果判读 PTEN阳性表达显示于胞质，呈深棕黄色，粗大有色颗粒为强阳性；染色呈棕色，细小有色颗粒为中度阳性；染色呈浅黄色，未见明显有色颗粒为阳性；不着色为阴性。
1.4 统计学处理 应用χ2检验或直接概率法进行统计学分析。
2 结果
2.1 PTEN蛋白表达与宫颈浸润癌的关系 正常宫颈组织PTEN蛋白表达率为100%（10/10），癌旁宫颈组织为65%（13/20），宫颈癌组织为36.96%（17/46），差异均有统计学意义(P均<0.05)。
2.2 PTEN蛋白表达与宫颈癌临床病理特征关系 见表1。PTEN蛋白在宫颈癌中表达与临床分期、病灶大小有统计学意义（P<0.05）；淋巴结转移组中PTEN蛋白的阳性表达率明显低于无淋巴结转移组 (P <0.01，χ2=7.86)；PTEN蛋白失表达与患者年龄和病理分化程度无统计学意义（P>0.05）。
表1 PTEN蛋白表达与宫颈癌临床特征关系（略）
3 讨论
PTEN基因定位于人类染色体10q23．3位点，10q23．3全长约200kb，含9个外显子和8个内含子。其cDNA共有1 209个核苷酸，是第一个具有磷酯酶活性的肿瘤抑制基因［1］，编码403个氨基酸组成的蛋白质，其相对分子质量为56 000，分布于细胞质中。PTEN蛋白具有双特异磷酸酶活性，能使细胞内第二信使磷脂酰肌醇(3，4，5)三磷酸(PIP3)去磷酸化，抑制PI3K／AKT信号转导途径；抑制局部黏附激酶(FAK)去磷酸化；抑制丝裂酶原激活蛋白激酶(MAPK)细胞信号传导途径；在细胞的生长、增殖、浸润、迁移、抑制肿瘤血管生成等方面有重要作用。
PTEN蛋白异常表达与多种机制有关。PTEN基因的突变或丢失必然引起其编码蛋白异常表达，PTEN基因的外显子2、3、5和8是发生突变的主要位点，易发生移码突变、错义突变和无义突变，另外，10q23染色体的杂合性丢失，导致PTEN的一个等位基因缺失，无法得到足够的PTEN蛋白。在PTEN蛋白羧基端的369～386的氨基酸序列中存在数个保守的CK2磷酸化位点，如S370、S380、T382、T383及S385等, 一旦磷酸化位点发生突变, PTEN蛋白的稳定性下降，变得极易降解。PTEN属于蛋白酪氨酸磷酸酯酶家族成员，蛋白酪氨酸磷酸酯酶催化活性的反应位点的半胱氨酸又极易被氧化，导致PTEN氧化失活［2］。
PTEN基因的失表达与人类多种恶性肿瘤的发生、发展及转移密切相关，备受临床关注。Kurose等［3］对13例宫颈鳞癌、5例腺癌、2例腺鳞癌进行组织分析，结果出现PTEN基因改变的宫颈癌组织均为鳞状细胞癌，且35％(7／20) 原发性宫颈癌发生杂合性缺失，3例PTEN基因内突变，导致mRNA异常剪接，其中2例外显子错译突变。本研究表明宫颈癌组织中PTEN阳性表达率明显低于癌旁宫颈组织和正常宫颈组织, 提示PTEN等位基因缺失和突变可能参与宫颈癌的发生。然而不是所有宫颈癌均存在PTEN缺失，表明宫颈癌的发生发展是多因素的。
本研究还表明，PTEN蛋白的表达随恶性程度增加而减弱，但无统计学意义，与组织学类型无明显相关性，而与淋巴结转移、临床分期、病灶大小相关，提示PTEN蛋白随着宫颈癌的发展表达明显下降，其表达与宫颈癌进展有关。Tamura等［4］发现PTEN蛋白对细胞迁移，铺展，局灶黏附活动有抑制作用，认为PTEN可能是抑制肿瘤侵袭、转移的基因。王祥珍等［5］认为PTEN的表达与宫颈癌分化程度、生长、增殖、浸润、转移、患者预后有关。因此，PTEN基因与宫颈癌相关性的研究为宫颈癌的诊断治疗，防止复发，改善预后等多个方面提供了新的思路。
【参考文献】
［1］ Steek P A，Pershouse M A，Jasser S A，et al．Identification of a candidate tumor suppressor gene，MMAC1，at chromosome 10q23．3 that is mutated in multiple advanced cancers［J］．Nat Genet, 1997, 15(4):356～362.
［2］ 刘伦华，楼丽广. PTEN功能调节的研究进展. 中国药理学通报, 2005,21(7)：778～781.
［3］ Kurose K，Zhou XP，Araki T，et al．Biallelic inactivating mutations and an occult germ line utation of PTEN in primary cervical carcinomas［J］．Genes Chromosomes Cancer,2000,29(2):166～172.
［4］ Tamura M, Cu J, Matsumdo K, et al. Frihitition of cell migration,spreading, and focal adhesions by tumor suppressor PTEN［J］.Science,1998,280(5369): 1614～1617．
［5］ 王祥珍，李英勇，曹 军. 抑癌基因PTEN在宫颈癌组织中的表达及其意义［J］. 宁夏医学杂志, 2003, 25(10):579～581.
作者单位：海南省农垦总局医院妇产科，海南 海口 570311； 阳江市人民医院妇科,广东 阳江 529500.