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【摘要】 目的 探讨血清抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）及抗血管内皮细胞抗体（AECA）在结节性红斑发病中的作用和意义。 方法 收集结节性红斑患者和正常人血清，用间接免疫荧光技术检测血清中ANCA和AECA，并分型。 结果 32例结节性红斑患者ANCA阳性率为12.5%，均为核周型ANCA（P-ANCA），与正常对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。AECA阳性率为81.3%，其中IgG-ANCA阳性率为71.9%，IgM-AECA阳性率53.1%，与正常组对照组比较有显著性差异（均P＜0.01）。在发生结节性红斑及血沉增快方面AECA阳性组高于阴性组（P＜0.01）；而在伴有口腔溃疡和贫血等临床表现方面ANCA及AECA阳性组与阴性组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。 结论 结节性红斑患者血清AECA测定对该病血管损害及病情活动具有一定意义。
【关键词】 结节性红 抗中性粒细胞胞浆抗体 抗血管内皮细胞抗体
Value of serum anti-nuotrophil cytoplasmic autoantibodies and anti-vascular endothelial cell antibodies in diagnosis of erythema nodosum.
WANG Zhong, LIU Lian-qing, LING Hong-zhong, et al.
(Meizhou Municipal Hospital of Chronic Diseases, Meizhou 514201, Guangdong, P. R. China)
Abstract：Objective To discuss the value of detection of serum serum anti-nuotrophil cytoplasmic autoantibodies (ANCA) and anti-vascular endothelial cell antibodies (AECA) in the diagnosis of erythema nodosum. Methods Samples from erythema nodosum patients and normal people were collected, the ANCA and AECA were detected by indirect immunofluorescence. Results The positive rate of ANCA in 32 erythema nodosum patients was 12.5%, all Peri-ANCA. without showing significant differences as commpare to the normal controls(P>0.05). AECA positive rate was 81.3%, IgG-ANCA positive rate was 71.9%, IgM-AECA positive rate was 53.1%, showing significant differences as compared to that of the controls(P<0.01). In the event of erythema nodosum and ESR by fast AECA positive aspects than negative group(P<0.01); There were no significant differences were observed between the two groups in oral ulcers, anemia,etc(P>0.05). Conclusion Detection the serum AECA is of certain value in disclosing the vascular lesions and the changes of the disease.
Key words：Erythema nodosum;ANCA; AECA
结节性红斑是比较常见的一种疾病，其组织病理以皮肤血管炎和脂膜炎为表现，临床上以下肢疼痛性结节为特征的皮肤病。现已证明中性粒细胞及血管内皮细胞作为一种免疫细胞在炎症发病机制中起到很重要的作用［1］。抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）及抗血管内皮细胞抗体（AECA）与结节性红斑之间的相关性也开始受到关注。现通过对32例结节性红斑患者血清进行了检测，探讨抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）及抗血管内皮细胞抗体（AECA）与结节性红斑之间的关系，现将结果报告如下。
1 资料和方法
1.1 标本来源 ①结节性红斑患者32例均来自皮肤科门诊，符合中华医学会编著，人民卫生出版社出版的《临床诊疗指南皮肤病与性病分册》诊断标准［1］。男12例（37.5%），女20例（62.5%），发病年龄10～70岁，平均39.62岁。病程平均11个月。② 2个月内未接受任何药物治疗,排除红斑狼疮引起的自身免疫性疾病、肿瘤、妊娠、哺乳期和严重系统性疾患的患者。另选择33例正常体检健康人作为对照。
1.2 材料与方法 所有病例均在治疗前采血2ml（不抗凝）离心后备用。ANCA及AECA试剂盒均购自欧盟实验免疫制品公司北京代表处。采用间接免疫荧光方法进行检测并分型。将患者或正常人标本血清用0.01mol/L pH7.4的磷酸缓冲液（PBS）1:20稀释后，吸取25μl加在中性粒细胞抗原片和人脐静脉内皮细胞底物上，37℃孵育30min，PBS冲洗3次，浸泡不少于1min，分别加入20μl羊抗人IgG、IgM荧光标记抗体（1:5稀释）于抗原膜上，方法同前，孵育，冲洗，浸泡，加pH7.4的缓冲液甘油封片，荧光显微镜下观察结果。每次试验均以试剂盒提供的阳性和阴性血清作为对照。
1.3 结果判定 中性粒细胞胞浆出现特异荧光者为C-ANCA，细胞核周围出现特异荧光者为P-ANCA，胞浆及核周围无荧光者为阴性。肺泡血管内皮细胞出现胞浆荧光及人脐静脉内皮细胞胞浆出现点状荧光为阳性，反之，为阴性。
1.4 统计学处理 采用卡方检验。
2 结果
2.1 ANCA检测结果 32例结节性红斑患者中4例ANCA阳性，阳性率为12.5%，均为P-ANCA。与正常对照组比较差异无显著性（P＞0.05）。
2.2 AECA检测结果 32例结节性红斑患者中26例，AECA阳性，阳性率为81.3%，其中IgG-AECA阳性23例（71.9%），IgM-AECA阳性17例（53.1%）。与正常对照组比较有明显差异（P＜0.01﹚。其中14例患者同时出现IgG-AECA抗体及IgM-AECA抗体阳性。
2.3 ANCA与AECA相关研究 32例AECA阳性患者中ANCA均为阴性。26例ANCA阳性患者AECA也为阴性。经统计学处理差异无显著性（P＞0.05）。两种抗体间无相关性。32例结节性红斑患者AECA抗体阳性26例，阴性6例。ANCA阳性4例，阴性28例。AECA抗体阳性率显著高于ANCA的阳性率（P＜0.01)。
2.4 在ANCA及AECA抗体阳性组与ANCA及AECA抗体阴性组比较 两组间临床表现与实验室检查结果显示：AECA阳性组中，有结节性红斑为皮肤表现的和血沉增快的患者阳性率明显高于阴性组（P＜0.01）。而在口腔溃疡、关节病变、胃肠道病普、中枢神经系统病变在两组间差异无统计学意义(P>0.05)。ANCA阳性组与ANCA阴性组比较，在临床表现及实验室检查方面差异无统计学意义（P＞0.05）。
ANCA和AECA抗体阳性组与阴性生组比较，在实验室检查方面结果显示：AECA抗体阳性组血沉较阴性组明显增快，两组间比较差异有统计学意义（P＜0.05﹚。贫血方面各组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。
3 讨论
结节性红斑患者其基本病理变化为大小血管不同程度的血管炎，主要为多核细胞及纤维蛋白沉积，血管周围有多核细胞浸润，伴有核尘及红细胞渗出。最常见于药物及感染等引起，此外有内在性的疾病，如冷冻蛋白血症，高球蛋白血症、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等也可引起本病［1］。血管内皮细胞通过合成和释放一系列血管活性物质和细胞因子调节血管紧张度、抑制血小板和白细胞黏附等，如血管内皮细胞与效应细胞上的受体结合激活磷脂酶A2产生花生四烯酸，继而产生前列腺素发挥作用［2］。目前在诊断方面还缺乏特异的免疫学指标。80年代末，国外学者开始了ANCA与AECA的研究，发现多种抗体包含在中性粒细胞和血管内皮细胞中［3］。ANCA是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成分为靶抗原的自身抗体谱，靶抗原包括蛋白酶3（PR3）、髓过氧化物酶（MPO）、弹性蛋白酶（HEL）、乳铁蛋白（LF）、组织蛋白酶G（GG）、溶菌酶（LYS）、杀菌/膜通透性增高蛋白（BPI），其中以抗PR3和MPO抗体研究较多。C-ACA主要靶抗原为胃蛋白酶3，而P-ACA主要为髓过氧过物酶（MPO）。MPO-ANCA与微型多血管炎和变应性肉芽肿性血管炎密切相关。近年来应用IIF法，国内外已有部分皮肤血管炎患者的血清ANCA抗体的检测报道，ANCA阳性率25%～60%［4］。我们测定32例结节性红斑患者中，ANCA阳性率为12.5%，且均为P-ANCA。在结节性红斑患者临床症状及实验室检查方面，ANCA阳性与阴性组的病变严重程度、受累系统及范围无相关性。结果表明ANCA的检测与本病的发生发展不一致。
抗血管内皮细胞抗体AECA参与了多种血管炎性疾病的发生，但对结节性红斑是非特异性的。有人发现AECA与免疫排斥密切相关，与皮肌炎的疾病过程基本一致［5,6］。它是一组针对血管内皮细胞（VEC）膜表面结构抗原的异质型抗体，以IgG-AECA阳性率最高［6］。本文测定的结节性红斑中AECA阳性率81.3%，我们测出IgG-AECA阳性率71.9%，IgM-AECA为53.1%，证实了AECA异质型抗体并支持以IgG-AECA阳性率高的观点。研究发现结节性红斑患者血清内皮细胞E选择素表达并观察到AECA可能与黏附分子表达有关。说明内皮细胞功能不正常在本病血管损害中起重要作用。AECA伴中性粒细胞机能亢进可以解释为什么在血管损伤时内皮细胞功能活跃以及中性粒细胞在血管壁的聚集。本文发现AECA阳性的患者高于AECA阴性者，推测可能是在血管内皮细胞损伤时AECA促进了中性粒细胞在血管壁的聚集。AECA阳性患者血沉快于AECA阴性者，从血沉增快来看AECA与结节性红斑病情活动有关。
本文检测结节性红斑患者血清ANCA与AECA无相关性，可以说明二者免疫应答不同，各有其相应的作用机制。
本研究因样本量小，对于抗血管内皮细胞抗体及抗中性粒细胞浆体在结节性红斑病的鉴别意义可能有影响，还需对各种原因引起的结节性红斑病进行更深入广泛的研究。
【参考文献】
［1］ 中华医学会. 临床诊疗指南皮肤病与性病分册［M］.北京：人民卫生出版社，2006,141.
［2］ Minami k,Mnnky E,Shongea G,et al.Effect of endothelin［J］.Biochem Pharmacol,1995,49(4):1051～1056.
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［4］ Tan EM,Chan KEL,Sullivan KF,et al.Antineutrophil cytoplasnic autoantibodies: Dilagnostically specific immune markers［J］.Clin Exp Immunol, 1998,47:121.
［5］ 于惠元，贾保祥，汪秀明，等.肾移植患者抗血管内皮细胞抗体检测及其与免疫排斥的关系［J］.中华泌尿外科杂志, 1988；9（4）：193～195.
［6］ 周小勇.抗血管内皮细胞抗体与小血管［J］.国外医学皮肤性病学分册,1999,25：15.
作者单位：梅州市慢性病防治院,广东 梅州 514021; 中山大学第一附属医院,广东 广州 510000； 广州金域医学检验中心,广东 广州 510000.