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【摘要】 目的：探讨重性抑郁症共病焦虑障碍患者与重性抑郁症患者儿茶酚氧位甲基转移酶（COMT）基因多态性的差异。方法： 应用聚合酶链反应（PCR）和限制性片段长度多态性(RFLP)技术，检测15例重性抑郁症共病焦虑障碍患者（研究组）和15例单纯诊断为重性抑郁症患者（对照组）的COMT基因多态性。结果：研究组患者与对照组患者相比，无论是等位基因A、等位基因G频率还是基因型A/A、A/G及G/G频率均无显著差异；只是在等位基因A频率上，研究组的男性患者(22.22%)显著高于对照组的男性患者(5.56%)。结论：抑郁与焦虑共病的基因多态性研究值得进一步深入研究。
【关键词 】 重性抑郁症；焦虑障碍；儿茶酚氧位甲基转移酶；多态现象（遗传学）
The polymorphism of catechol-O-methyltransferase gene between the patients with major depression and the patients with major depression co morbidity anxiety disorder
YU Chang-hong，WU Huai-an，HU Ji-ze，et al
(Shenzhen Mental Health Institute,Shenzhen518020,China)
【Abstract】 Objective：To investigate the difference of the polymorphism of catechol- O-methyltransferase gene between the patients with major depression and the patients with major depression co morbidity anxiety disorder. Methods:15 patients with major depression co morbidity anxiety (study group) and 15 patients with major depression (control group) diagnosed by DSM-IV were involved in the study using polymerase chain reaction (PCR) and restriction fragment length polymorphism (RFLP) technique.Results: There was no significant difference between two groups in the frequency allele A and allele G. The statistical difference was not found between two groups in the genotype A/A, A/G and G/G too. But the frequency of allele A of the male patients in the study group (22.22%) was statistically higher than that of the control group (5.56%).Conclusions: The polymorphism of gene in the patients with major depression co morbidity anxiety deserved us to study further.
【Key words】Major depression;Anxiety disorder; Catechol-O-methyltransferase; Polymorphism(Genetics)
儿茶酚氧位甲基转移酶（catechol-O-methyltransferase, COMT）是广泛存在于人体的一种具特殊功能的蛋白质，它可使儿茶酚失去生物活性，其作用底物是儿茶酚激素和神经递质，如肾上腺素、去甲肾上腺素和多巴胺等。当上述神经递质系统功能失常时，可以出现神经或精神疾病，如帕金森病、精神分裂症或抑郁症等［1］。重性抑郁症常与焦虑障碍共患，而共患焦虑障碍的抑郁症病情更严重、社会功能损害较重，症状不易缓解［2］。为探讨重性抑郁症共病焦虑障碍在遗传机制上与重性抑郁症是否有差异，我们对15例重性抑郁症患者和15例重性抑郁症共病焦虑障碍患者COMT基因的多态性进行检测。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 研究组 即共病组，15例，均为重性抑郁症共病焦虑障碍组，均为2002年1月-2003年1月初次在深圳市康宁医院门诊及住院部就诊的患者。入组标准：①符合美国精神障碍诊断与统计手册第4版（DSM-IV）的重性抑郁症及至少一种焦虑障碍的诊断标准［4］；②住院患者经过三级查房确诊，门诊患者分别经过1名主治医师、副主任医师确诊；③民族为汉族。研究组中男性为9例，女性为6例，平均年龄为(21.34±7.57)岁
1.1.2 对照组 即重性抑郁症组，15例，以性别与研究组匹配为原则，在收集病例同时期内，选取15 例单一诊断为重性抑郁症的患者。入组标准：仅符合美国精神障碍诊断与统计手册第4版（DSM-IV）的重性抑郁症的诊断标准［4］，不符合DSM-IV的焦虑障碍的诊断标准；其它标准同研究组。对照组中男性为9例，女性为6例，平均年龄(22.28±6.88)岁。
1.2 方法
1.2.1 抽取静脉血5 ml（肝素抗凝），用酚-氯仿-异戊醇抽提白细胞基因组DNA，-40 ℃冰箱保存备用。按Daniels等设计的引物，PCR扩增COMT基因产物。引物： 5′-ACT GTG GCT ACT CAG CTG TG-3′ 和5′-CCT TTT TCC AGG TCT GAC AA-3′。PCR反应体积为25 μl，其中DNA 模板150 ng，10 PCR buffer 2.5 μl,引物各1 μl(6.25 pmol/μl),Taq酶2.5 U(5 U/μl)。热循环参数：95 ℃预变性3分钟,95 ℃ 30 sec,55 ℃ 30 sec,72 ℃ 30 sec,共30个循环。然后72 ℃延伸10 min,4 ℃保存。PCR扩增产物为164 bp。NlaⅢ内切酶酶切，取酶切产物10 μl，16%聚丙烯酰胺凝胶电泳150 分钟，溴化乙啶染色45分钟后观察结果。
1.2.2 基因多态性分析 应用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）和限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphism,RFLP）技术，检测受试者的COMT基因型。
1.2.3 用x2检验对重性抑郁症共病焦虑障碍患者组和重性抑郁症患者组COMT基因频率和基因型频率的差异进行比较。
2 结果
2.1 Hardy-Weinberg平衡定律吻合度检测 经x2检验，患者组和对照组的COMT基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律（P>005）。
2.2 COMT基因分型 在COMT基因第4外显子上有一恒定的NlaIII内切酶位点，酶切后成为136 bp和28 bp两个片段，故野生型（G/G）电泳显示28 bp和136 bp 两个条带。而突变型（A/A）产生第2个NlaIII内切酶位点，由此可以将136 bp片段切为40 bp和96 bp，电泳显示28 bp、40 bp和96 bp三个片段的条带。杂合子（A/G）电泳则显示28 bp、40 bp、96 bp、136 bp四个片段的条带。
2.2.3 研究组与对照组组COMT基因的等位基因及基因型频数、频率和22号染色体条数分布，见表1。
表1 重性抑郁症共病焦虑障碍患者组和重性抑郁症患者组COMT基因的等位基因及基因型频数、频率和22号染色体条数分布（略）
COMT为儿茶酚氧位甲基转移酶；a为患者与对照组比较；b为与对照组男性患者比较；c为与对照组女性患者比较
表1显示，研究组（共病组）COMT等位基因A频率（20.00%）与对照组（16.67%）比较，差异没有显著意义。等位基因G频率在两组间的差异也没有显著意义。按性别比较，等位基因A频率在两组男性间的差异有显著意义，而在两组女性间差异无显著意义。等位基因G频率在两组的男或女性间差异均无显著意义。COMT基因型A/A基因频率在两组间的差异无论是总体比较还是按性别比较均无显著意义（P＞0.05）。COMT基因型A/G及G/G基因频率的比较结果同A/A型的比较结果。
3 讨论
临床上抑郁与焦虑共病很常见，如 Mark等（2002）研究发现非双相的重行抑郁障碍病人中，64.1%至少有另1个诊断，而36.7%的病人有另外2个或更多的诊断。其中共病焦虑最多，有56.8%的患者［3］。Thea 等（2002）研究发现1/3的OCD患者共病重性抑郁症［5］。
目前国际上不但对临床共病进行现象研究，还开始进行分子遗传学的研究，以期从分子遗传的角度去探明共病。其中COMT基因是人们研究的一个热点。人类COMT基因已定与22号染色体长臂1区1带2亚带（22q11.2）。COMT存在高（携带val）和低（携带met）酶活性形式。COMT基因的158位上G-A转换可导致蛋白质序列108位的缬氨酸（val）被蛋氨酸（met）替换而导致酶活性降低了3~4倍，导致脑DA降解减少，并影响前额皮质DA功能。Rotondo等（2002）研究伴与不伴惊恐障碍的双相障碍的COMT基因多态性，并与127例健康志愿者比较，111例双相患者中49 例伴惊恐障碍而62例不伴惊恐障碍。不伴惊恐障碍的双相障碍病人显示非常高比率的COMT Met158，40%的不伴惊恐障碍的双相患者为MET158/MET158等位基因型（低活性）［6］。以上结果提示，共病现象有其生物学作为基础。
本研究结果显示抑郁焦虑共病组患者与单纯抑郁症患者相比，无论是等位基因A、等位基因G频率还是基因型A/A、A/G及G/G频率均无显著差异；只是在等位基因A频率上，共病组的男性患者(22.22%)显著高于对照组的男性患者(5.56%)。本研究结果尚不能说明COMT基因多态性与重性抑郁症共病焦虑障碍有关联。本研究只是对共病现象基因多态性现象进行的初步研究，在以后的研究中我们将扩大样本，并且对焦虑障碍进一步细分，以更深入地探讨。
参考文献
［1］ 金国章. 脑内多巴胺的生物学［M］.上海，上海科技出版社，1998：1-2.
［2］ 吴怀安，邓小敏，闫小华，等. 5个精神分裂症高发家系与COMT关联的分析［J］.遗传，2003，25(6):652-654.
［3］ Mark Zimmerman;Iwona Chelminski;Wilson McDermut.Major depressive disorder and axis I diagnostic comorbidity［J］.J Clin Psychiatry，2002，63:187-193.
［4］ American Psychiatric Association. Diagnostic and statistic manual of mental disorders(DSM-IV) 4th edition.Washington DC: American Psychiatric Association,1994，39-40.
［5］ Thea Overbeek,Koen Schruers,Eric Vermetten,et al. J Clin Psychiatry，2002，63:1106-1112.
［6］ Rotondo A,Mazzanti C,Dell'Osso L,et al. Catechol o-methyltransferase,serotonin transporter,and tryptophan hydroxylase gene polymorphisms in bipolar disorder patients with and without comorbid panic disorder.Am J Psychiatry，2002，159:23-29.
（广东省深圳市康宁医院，广东 深圳 518020）