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【摘要】 目的：探讨胃癌与幽门螺杆菌L型(Hp-L)感染的关系。方法：取186例胃癌患者胃窦和胃体黏膜组织常规切片后经革兰氏染色和免疫组化染色镜检Hp-L型细菌。结果：Hp-L型检出率为56.45％(105／186)，革兰染色和免疫组化染色法检出率分别为60.22％(112／186)和58.60％(109／186)，差异无显著性(x2=0.1，P>0.05)，男女患者阳性率依次为69.16％(74／107)和39.24％(31／79)，前者明显高于后者(x2=16.55，P<0.01)。30岁以下、30岁~、40岁~、50岁~患者Hp-L型阳性率分别为33.33％(4／12)、41.38％(12／29)、52.73％(29／55)、66.67％(60／90)，差异有显著性(x2=9.39，P<0.05)。Hp-L型阳性率在肠型胃癌患者中为75.42％(89／118)，明显高于弥漫型患者为23.53％(x2=47.26，P<0.01);胃窦部胃癌患者(64.71％)高于贲门部患者(41.79％)。结论：GC患者Hp-L型感染率较高，且男性高于女性。Hp-L型检出率随年龄增长而增高，且主要作用于胃窦部，是引起肠型胃癌的重要致病因子之一。
【关键词】 幽门螺杆菌；L型；胃癌
基金项目：安徽省教育厅自然科学研究项目（No．2006Kj120）
Clinical Investigation of L-form from Helicobacter pylori in gastric cancer patients
YE Bing, WANG Jun, WU Hong-liang, et al
(Department of medical examination, School of Medicine, Anhui University of Science and Technology, Anhui 232001, China)
【Abstract】 Objective：To study the relationship between helicobacter pylori L-form (Hp-L) infection and gastric cancer. Methods:Gastric mucosa was taken from 186 patients with gastric cancer to detect Hp-L by Gram staining and immunohistochemistry staining.Results: The detectable rates of Hp-k was 56.45 %( 105/186).And it was 58.60% (109/186) by immunohistochemistry staining and 60.22% by Gram staining respectively. There was no statistics significant difference between this two methods (P>0.05).To be more exact, the detectable rates of Hp-L in male and female patients were 69.16 % (74/107) and 39.24% (31/79) respectively, statistics found significant difference between them (x2= 16.55, P<0.01). Furthermore, the detectable rates of Hp-L was significant difference between patients aged 30 years- and 40 years- (P<0.05). In patients with intestinal and diffuse type gastric cancers, the infective rate of Hp-k was 75.42% (89/118) and 23.53% (16/68), respectively (P<0.01). In patients with gastric antral and cardiac cancers, the detectable rate of Hp-L was 64.71% (79/119) and 41.79 %( 28/67), respectively (P<0.05).Conclusions: L-forms variation often occurs in patients with gastric cancer and is commonly found in male patients and associates with ages. The L-forms variation may be an important factor caused the intestinal gastric cancer, and more act in gastric antrum.
【Key words】Helicobacter pylori; L-form; gastric cancer
胃癌的发生与许多因素有关，大多数学者认为胃癌可能是幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)长期感染与其它因素共同作用的结果。从正常胃黏膜→萎缩性胃炎→肠上皮化生→异型增生→胃癌的发病模式已得到多数学者认可。而幽门螺杆菌在体内外诸多因素作用下易发生细胞壁缺陷型变异，即L型变异(Hp-L)。Hp-L型菌与原菌存在许多生物学性状的不同，特别是其对渗透压敏感，在普通培养基上难以生长，临床上容易引起漏诊和误诊［1］。为探讨幽门螺杆菌L型(Hp-L型)感染与胃癌(GC)的关系，2004年10月至2005年6月，我们对186例GC患者进行了Hp-L型检测。现报告如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料
本文186例GC患者，均经胃镜检查确诊。其中男107例。女79例；年龄14~72岁。其中胃窦部肠型肿瘤76例，弥漫型肿瘤43例；贲门部肠型肿瘤42例，弥漫型肿瘤25例。
1.2 方法
本组均于胃镜检查时分别取胃窦、胃体黏膜各2块，10％甲醛固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片。分别做苏木素-伊红(HE)染色、革兰染色和免疫组织化学染色(ABC法)。油镜(10×100)下检测革兰氏染色切片，每例随机观察10~15个视野，取L型菌的平均数。其平均菌数≥20个为阳性，<20个为阴性。免疫组化染色所用Hp-L型抗原，Hp-L型抗体由本室自制。一抗工作浓度为1：80，按ABC试剂盒(Dako公司产品)说明书操作，用已知Hp-L型阳性切片作为阳性对照，用PBS替代一抗为阴性对照。黏膜上皮细胞及间质巨噬细胞胞浆或胞膜着棕黄色为Hp-L型抗体标记阳性。不着色为阴性，革兰染色L型检出和免疫组化Hp-L型抗原表达同时阳性者为Hp-L型感染阳性。
1.3 统计学处理
资料分析采用x2检验。
2 结果
2.1 革兰氏染色及免疫组化染色Hp-L型检出结果
186例GC患者中，112例革兰氏染色同时检出Hp及L型(60.22％)，仅25例(13.44％)单纯Hp阳性，Hp-L型和Hp的阳性检出率分别为60.22％和73.66%。L型呈多形性，有圆球体、巨形体、原生小体、棒状体，但多数为圆球体。
2.2 免疫组化染色与革兰氏染色结果比较
本组标本免疫组化染色Hp-L型抗原检出率为58.60％(109／186)，其中革兰氏染色和免疫组化染色同时检出Hp-L型的病例有105(56.45％)，两种染色方法检出结果无显著性差异(P>0.05)见表1。Hp-L型抗原表达阳性细胞的分布与革兰染色L型的分布基本相同。表1 革兰染色与免疫组化染色结果比较（略）
2.3 Hp-L型感染与胃癌患者性别、年龄的关系
186例胃癌患者Hp-L型阳性率为56.45％(105／186)，其中男性阳性率为69.16％(74／107)，女性阳性率为39.24％(31／79)，前者明显高于后者(x2=16.55，P<0.01)。从表2可知，胃癌患者Hp-L的检出率似有随年龄的增长呈上升趋势，且40岁以上组与30岁以下组相比，差异有显著性(P<0.05)。表2 Hp-L型感染与慢性胃炎患者性别、年龄的关系（略）
2.4 Hp-L型感染与胃癌患者感染部位及肿瘤类型的关系
118例肠型胃癌患者Hp-L型阳性率为75.42％(89／118)，弥漫型患者为23.53％(16／68)，前者明显高于后者(x2=47.26，P<0.01)。胃窦部胃癌患者Hp-L型阳性率为64.7l％(77／119)，明显高于贲门部胃癌患者(41.79％)。表3 Hp-L型感染与胃癌患者感染部位及肿瘤类型的关系（略）
3 讨论
Hp与GC的关系首先是从血清流行病学研究得到的。欧洲胃肠病研究组(EUROGAST)进行一项包括13个国家的17个地区的3 194例人群中，Hp与胃癌的多中心研究，发现Hp感染与胃癌发病率和死亡率具显著相关性［2］。但这些研究中绝大部分是以进展期胃癌为研究对象，其显示的胃癌Hp检出率可能低于实际感染率，因为此类患者胃黏膜往往伴有严重肠化，而且胃癌形成后引起胃内环境的变化，不适宜Hp的定居及生长［3］。Hp-L型是Hp为抗逆生存而形成的多形性改变。多数学者认为Hp-L型可能与Hp感染迁延不愈、反复发作及流行传播密切相关［4］。本研究对186例GC患者的胃黏膜进行Hp-L型检测，结果有112例革兰氏染色同时检出Hp及L型，仅25例单纯Hp检出阳性，说明Hp在GC患者体内易发生L型变异。造成Hp-L型和Hp混合感染。这可能存在以下原因：一、胃癌患者胃黏膜内环境的改变，易诱导Hp发生L型变异：二、胃癌患者免疫功能低下，其中性粒细胞趋化作用及吞噬功能减低，不能有效地清除Hp，亚致死效应的攻击易使Hp产生L型变异。Hp-L形变后，由于细胞壁缺失。不仅可逃避机体免疫攻击，形成免疫耐受在体内长期存活或继续生长繁殖，而且导致细菌表面电荷增加，使其对宿主细胞表面粘附力增加。更易粘附于宿主细胞：若条件成熟，L型可同复成原菌，使病变恶化或复发。故临床应注意胃癌患者Hp-L型的检出，及时有效地进行Hp的根除治疗。当然，对Hp根除干预是否有利于胃癌患者的恢复治疗尚需进一步研究。
20世纪80年代，谭巨莲和Barbo sa等发现细菌培养与免疫组化对Hp检测结果基本一致、免疫组化技术以其特异性强、定位准确、形态与功能相结合等特点，在Hp的研究中占有重要地位［5］。本研究用免疫组化染色与革兰氏染色检测Hp-L型，差异无显著性，说明这两种方法均是检测Hp-L型敏感、有效的方法，可适用于流行病学调查及临床根除治疗效果的观察。本研究中，胃癌患者Hp-L型检出率为56.45％，其中男性检出率为69.16％(74／107)，明显高于女性39.24％(31／79)，且随年龄的增长呈上升趋势，此可能与男性患者吸烟、酗酒、饮食生活不规律等使胃黏膜受损，胃内环境改变较大。更易造成Hp-L型和Hp混合感染有关［6］。Hp-L型感染虽在不同年龄组均有发生，但随着年龄增长，患者使用抗菌药物时间延长，以及饮食习惯长期积累，引起的胃环境改变过大，导致患者Hp-L型感染的机会增加。
本研究中，Hp-L型检出率，在肠型胃癌患者中为75.42％(89／118)，明显高于弥漫型胃癌患者(23.53％)，且胃窦部(64.71％)高于贲门部(41.79％)。提示Hp感染主要作用于胃窦部，是引起肠型胃癌的重要致病因子之一，与国内外文献报道一致［7-9］。Hp能够作用于胃黏膜主要取决于它与胃上皮特异性糖脂受体的结合，而这受体在胃窦部含量远高于胃体及胃角，故胃炎时Hp多分布于胃窦区，但在上皮发生萎缩、肠化或异型增生时，胃窦区腺体上移，使这种受体结合的环境上升，Hp定植环境上移［10］。但这种上移的环境可能不利于Hp生长，故易导致其发生L型变异。因此，常规的胃窦区Hp检查是不全面的，临床应结合胃体及贲门部，多部位，以及Hp-L型菌的检测，彻底根除Hp，对胃癌患者进行根除Hp的干预治疗及预防。
【参考文献】
［1］黄谷良，林特夫，郭紫兰．细菌L型与疾病［M］．北京：学苑出版社，1991：21-30.
［2］Eurogast Study Group．An international association between Helicobacter Pylori infection and gastric cancer［J］．Lancet，1993,341：1359-1362.
［3］胡品津．幽门螺杆菌与胃癌［M］//萧树东．消化病学新理论与新技术．上海：上海科技教育出版社,1999:157-164.
［4］张振华．螺杆菌属［M］//闻玉梅．现代医学微生物学．上海：上海医科大学出版社,1999.
［5］肖文平，张建中． 免疫组织化学技术在幽门螺杆菌研究中的应用［J］.中国人兽共患病杂志，2000,3(16)：73-75.
［6］Toro Rueda C，Garcia-Samaniego J，Casado Farinas I, et al．Clinical importance of the CagA and VacA proteins and of the host factoresin the development of peptic ulcer in patients infected by Helwobacter pylori［J］. Rev Clin Esp，2003,203(9)：430-433．
［7］Pineros DM，Riveros SC，Marin JD，et al．Helicobacter pylori in gastric cancer and peptic ulcer disease in a Colombian population．Strain heterogeneity and antibody profiles［J］．Helicobacmr，2001,6：199-206.
［8］Peterson WL．Review article：Helicobacter pylori and gastric adenocarcinoma［J］．Aliment Pharmacol Ther,2002,16：40-46.
［9］Kikuchi S，Nakajima T，Kobayashi O，et al. Inaba Y Wada O．Efiect of age on the relationship between gastric cancer and Helicobacter pylori［J］．Tokyo Research Group of Prevention for Gastric Cancer.Jpn J Cancer Res,2000,91：774-779.
［10］庄小强，林三仁．胃癌前病变中幽门螺杆菌分布的感染研究［J］．中华消化杂志，2000,20(4)：274-275.
作者单位：安徽省淮南第二矿工医院，安徽 淮南 232052