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【摘要】 目的：探讨夹层杯集菌离心涂片法(夹层杯法)检测痰抗酸杆菌对肺结核的诊断价值。方法：采用夹层杯法使痰液充分液化，利于抗酸杆菌充分集中沉淀于特制的夹层杯底部的菌膜上，从而提高检出率。结果：该方法检测抗酸杆菌的阳性率为31.6%，分别明显高于本研究所传统涂片法的15.9%，培养法的11.9%，分别具有非常显著的临床意义（P＜0.005）。结论 ：该方法简单、省时、阳性率高，并且便于进行质量控制，可能是一种具有推广价值的检测方法。
【关键词】 夹层杯；痰；抗酸杆菌；诊断；肺结核
The value of detection mycobacterium tuberculosis by centrifuging the liquored sputa and collecting bacteria in diagnosis of pulmonary tuberculosis
WANG Gai,CAO Qing-shan, WANG Jin-sheng,et al
（Department of TB Mediicine.The First Affiviated Hospitial of Xinxiang Medical College, Weihui 453100，China）
【Abstract】 Objective：Now positive outcome in sputa swear and cutural has strong diagnosis value in pulmonary tuberculosis, but the positive rate is low,the time of sputa cutural is long, finding out a new sputa checking way to improve the diagnosis of pulmonary tuberculosis.Methods：The testing box, Peng's bug and QT-12 automatic centrifuge were provided by TianQi-Tech new medical systems co,LTD.The sputa were liquored completely and high-speed centrifuged in order to make the Mycobacterium tuberculosis sink and collect on a special membrane, detecting the bacteria on the membrane, the positive results were obviously improved by the way.Results：The positive rate of this new way is 31.6%, it is significently higher than 15.9% of sputa swear and 11.9% of sputa cultural. There was a significently difference（P＜0.005）in positive rate among them.Conclusion：The new checking way is simple, sparing time, high positive rate and speciality, easily queality control, can be used as a valuable detecting way of mycobacterium tuberculosis in sputa in clinical.
【Key words】 Collecting bacteria；Pulmonary；Tuberculosis
痰抗酸杆菌检查阳性对肺结核的特异性诊断价值在目前结核病防治工作中发挥着巨大作用。但就目前技术而言，其阳性率仅30%左右［1，2］，同时,其培养的所需时间周期长，对肺结核病的早期诊断、早期治疗的指导意义仍然存在一定弊病。如何提高痰抗酸杆菌检查的阳性率，并缩短检验周期，是结核病防治工作中急待克服的关键问题之一。为探索改善这一现象的途径，就我单位住院病人采用夹层杯集菌离心涂片法(夹层杯法)检测痰抗酸杆菌对肺结核的诊断价值进行探讨。
1 资料
取2006年1月～10月我院部分科室住院并已经被诊断的肺结核的病人614例为观察对象，男392例（63.8%），女222例（36.2%），年龄16～83岁，平均年龄（41±6）岁。所有入选病例均符合“肺结核诊断和治疗指南”［3］的标准，并经临床观察8个月证实诊断为肺结核无误者［4］。
2 方法
2.1 试剂和仪器
由天骑医学新技术有限公司提供试剂盒、夹层杯、TQ-12自动离心涂片机、KP-1快速干片机。
2.2 夹层杯法留痰方法
留取晨痰、即时痰或24小时痰均可，但总量不大于30ml，尽量取分别代表24小时内各个时段的痰最好，置于闭密的无菌标本杯中待检。
2.3 夹层杯法操作方法
①取相当于标本2倍的痰消化液加入痰标本杯内，使之充分混匀，倒入夹层杯内震荡10分钟，如痰液过于黏稠可适当延长时间，使其充分液化。②置于TQ-12自动离心涂片机上，4 000转/分，离心15～20分钟。③弃其上清液，再放置5～10分钟，然后加入A试剂，置酒精灯热染5～10分钟，用缓慢水流冲洗，以防将菌膜冲脱。④加入B试剂脱色1～2分钟，水冲洗。⑤加入C试剂复染1～2分钟，水冲洗，将夹层杯放入烤片机2分钟烤干。⑥用取片针在标本杯底部凹陷处将内层底片顶起，镊子取出位于其底部的“菌膜”，置于吸水纸上。⑦使菌膜涂菌面朝上置于1～2滴阿拉伯树胶的载玻片上。⑧在菌膜中央滴少许松香油，100倍油镜镜检。
2.4 传统涂片法
按结核病诊断细菌学检验规程要求留痰及进行检查。
2.5 统计学方法
采用SPSS统计软件处理，计数资料比较采用χ2检验，P<0.O5为差异有统计学意义。
3 结果
夹层杯法法检测抗酸杆菌阳性194例，阳性率31.60％；传统涂片法阳性98例，阳性率15.95％。两组阳性率比较差别有统计学意义(χ2＝41.41，P<0.005）。
4 讨论
痰菌阳性一直被医学界认同为诊断肺结核的金标准，但因其阳性率较低，致使大多数需要紧急治疗的活动性肺结核被称之为菌阴性肺结核，不得不依靠其它诊断标准进行诊治［5］。由于实际工作水平的参差不齐，甚至是认识的差异性，不可避免地增加了临床工作中的误诊、误治［6］。通过临床研究发现，传统的痰涂片与夹层杯法检测结果有显著性差异。
夹层杯法检测痰抗酸杆菌的原理是使用特制的痰液消化液，并结合高速震荡，使痰标本充分液化而有利于其中的抗酸杆菌沉淀于特制的彭氏夹层杯底部的菌膜上，再进行染色、读片。比原来的涂片法收集抗酸杆菌的范围更广泛，更完全，其检查结果更具有代表性。克服了原来采集的标本范围比较局限、不一定具有广泛代表性的弊端。原方法取材量相对较少，况且只留一口痰液，而实际上涂片采用的痰液也不一定是分泌自结核病灶的局部。即便是来源自病灶局部分泌的痰液，涂片所涂抹的那一部分标本也不一定会具有代表性，从而可能影响了其阳性率。夹层杯法正是弥补了上述痰检方法的不足。可以使所留取标本更具广泛性、代表性。和传统涂片法相比，更容易发现结核菌。所需设备简单，价格相当于原涂片法。便于基层开展。
同时，该检测方法收集标本的条件、标本量、染色温度、夹层杯菌膜面积、油镜每个视野的实际面积均容易被“标准化”，而便于大规模开展时的质量监控。同时，还可以通过抗酸杆菌自动阅片机、计算机报告系统［7］准确计算出每毫升所含细菌浓度。所以，是一种可能具有推广价值的检测方法
【参考文献】
［1］王 改，曹青山，郭悦鹏，等.ELISA法检测痰中PPD-IgG对肺结核的诊断价值［J］中国防痨杂志，1994，16（3）：119-120.
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［3］中华医学会结核病学分会肺结核诊断和治疗指南［S］中华结核和呼吸杂志，2001，24（2）：70-72.
［4］中国防痨协会.结核病诊断细菌学检验规程［J］.中国防痨杂志.1996，18（1）：28.
［5］Amicosante M,de Donno G,Houde M. et al. Evaluation of a new serological test using recombinant proteins and synthetic peptides for the diagnosis of tuberculosis ［J］. Tuberc Lung Dis. 1996，77(Suppl):120.
［6］窦迎利，甄新安，祈敏现，等联合病理和血中抗体检测对痰结核菌阴性肺结核诊断的价值［J］临床荟萃，2003，18 （18）：1063-1064.
［7］李 锐，罗宽泽，罗 慧，等夹层杯集菌离心涂片法检测抗酸菌的应用及评价［J］中华检验医学杂志，2005，25（10）：10.
作者单位：新乡医学院第一附属医院暨河南省结核病医院，河南 卫辉 453100