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【关键词】 益脑通络胶囊
益脑通络胶囊是以益气活血、解毒通络为治法的复方制剂，主要由黄芪、丹参等中药组成，用于治疗缺血性中风，为了进一步探讨益脑通络胶囊的治疗作用，我们从大鼠的静脉内注射血卟啉光敏剂后，用落射荧光显微镜的自带汞灯为光源，经紫外滤光片照射，以诱导肠系膜微血管内血栓形成，并对益脑通络胶囊抗血栓形成进行药效研究。
1 材料与方法
1.1 动物分组 雄性3月龄SD大鼠40只,体重200～300g,由解放军总医院实验动物中心提供,随机分为模型组、益脑通络胶囊小、中、大剂量预防组和脑心通胶囊对照组，每组8只。
1.2 实验器材 0lympus BH-2显微镜，落射荧光光源及适配器，CCD彩色显微镜摄像和录像系统，恒温装置及录像编辑系统。
1.3 实验用药 50%血卟啉光敏剂，100mg/20ml，北京制药工业研究所实验药厂生产，批号（90）卫药试研字X-02-2。益脑通络胶囊，0.5g/粒，山西光明制药厂提供中试样品，批号050401。脑心通胶囊，0.4g/粒，批号050607。
大鼠的用药量按成年人剂量与体重折算系数比公式dB=dA×KB/KA［1］(注:dA是己知的人的公斤体重剂量,dB是欲求算的大鼠的公斤剂量,KA是人的折算系数,KB是大鼠的折算系数)计算出益脑通络胶囊中剂量组的用药量为3.2g/kg,大剂量组为6.4g/kg,小剂量组为1.6g/kg。脑心通对照组的用药量为3.2g/kg，分别按3ml/20g体重的灌胃剂量配制成不同浓度的药液,各组每天灌胃1次,模型组给予等容量的饮用水,自然饮食，连续5d,于第6d行肠系膜微循环观察。
1.4 血栓模型的制备和肠系膜微循环观察方法 大鼠用20%乌拉坦1ml/10g体重肌肉注射麻醉，由股静脉注射光敏剂血卟啉0.1ml/100g体重，剃光腹部毛发，下腹部正中剪开皮肤，平剪伸入皮下钝性分离组织，暴露小肠，将大鼠放在观察板上呈仰卧位，用小镊子轻轻拉出小肠，并将小肠展开放在观察台上，选好有微血管的的肠系膜，放在镜下观察，选择直径为30～50μm、血流正常、无细胞黏附的细静脉作为血栓形成靶血管，最好在同一个视野里有动、静脉伴行，用落射荧光显微镜100W汞灯作光源，经UV紫外滤光片，照射在靶血管上，光斑直径200μm，选择两个点，分别光照1min，用olympus BH-2落射荧光显微镜连续观察10min，通过连接在显微镜上的CCD彩色摄像机、录像机记录微循环的变化［2，3］。
1.5 观察指标 从重放的录像上可观测光照后微血管内血栓形成的时间、不同时间点血栓形成的大小及血栓占管腔的面积，通过图像分析的方法计算出血栓的大小及血栓占管腔的面积。
1.6 统计方法 运用SPSS10.0统计软件进行数据分析，以均数±标准差表示，进行组间方差分析。
2 结果
2.1 模型组 大鼠股静脉注射血卟啉，用紫外线光照射平均31s后血管内开始有血小板和白细胞黏附，血小板黏附逐渐增多，并形成壁栓，使管腔变窄。停止光照后，血小板黏附继续增加，血栓逐渐增大，堵塞管腔，血流停滞。
2.2 益脑通络胶囊预防组 益脑通络胶囊预防组大鼠股静脉注射血卟啉后，小剂量组平均于紫外线照射后49s，中剂量组平均51s，大剂量组平均58s后血管内开始有血小板和白细胞黏附，比模型组血栓出现时间晚，停止光照后血小板黏附也逐渐增多，部分大鼠血栓形成，但未堵塞管腔，血流仍能通过，有部分血栓被血流冲散。益脑通络胶囊小、中、大剂量预防组血栓形成时间在光照后均较模型组长（P<0.01）。说明益脑通络胶囊各剂量预防组能有效延长血栓形成时间，但与脑心通组没有差别。而血栓占管腔面积在光照后益脑通络胶囊各剂量预防组和模型组差异均有统计学意义（P<0.01），其中中剂量组与脑心通组比较有统计学意义（P<0.05）。说明益脑通络胶囊各剂量预防组能有效缩小血管堵塞面积，中剂量组缩小血管堵塞面积的效果要优于脑心通组。
表1 各治疗组与对照组开始形成血栓时间比较 （略）
注:与模型组比较P<0.01。
表2 各治疗组与对照组血管堵塞面积比较（略）
注:与模型组比较P<0.01。与脑心通组比较P<0.05。
2.3 脑心通组 脑心通组大鼠股静脉注射血卟啉后，于紫外线照射后平均59s血管内开始有血小板和白细胞黏附，也比模型组血栓出现时间晚，停止光照后血小板黏附也逐渐增多，部分大鼠血栓形成，但未堵塞管腔，血流仍能通过，有部分血栓被血流冲散。脑心通组血栓形成时间在光照后也较模型组长（P＜0.01），见表1。但与益脑通络胶囊各剂量预防组无差异。血栓占管腔面积虽然和模型组的差异有统计学意义（P＜0.01），但与益脑通络胶囊大、小剂量预防组无差异，在血栓占管腔面积上略差于益脑通络胶囊中剂量组（P＜0.05），见表2。
3 讨论
用光敏剂经不同波长的光照射制成血栓模型已有较多报道，本实验原理是注入血管内的光敏剂血卟啉，经紫外线照射后产生光化学反应，损害血管内皮细胞，引起白细胞附壁，血小板黏附、聚集，形成血栓［4］。这种方法光敏剂来源方便，对血管损伤轻，光照时间及强度易掌握，血栓形成直观、可靠，重复性好，适合研究及检测抗血栓药物的效果［5］。为进一步说明益脑通络胶囊的抗血栓效果，本实验用体内的方法直接从肠系膜观察药物对血栓形成的预防作用。益脑通络胶囊是依据王清任“补阳还五汤”的思路，大胆创新，注重益气活血的同时突出了“痰瘀生毒，毒损脑髓”的理论，重用解毒之品而来。补阳还五汤可抑制凝血酶刺激血管壁释放W因子作用，有利于防止血栓形成及其增长，并能直接抑制凝血酶纤维蛋白原活性；还有增加血小板内cAMP含量，抑制血小板聚集和释放反应，抑制和溶解血栓、改善微循环和促进侧支循环等作用［6］。实验结果表明，益脑通络胶囊预防组的大鼠肠系膜微静脉，在光照后血栓形成的时间晚于模型组；在光照后血栓的大小及血栓占管腔的面积比模型组明显减小，说明益脑通络胶囊各剂量预防组有一定的抗凝血作用，可减轻血小板和白细胞黏附,因而也减轻了白细胞黏附对血管内皮的损伤作用，有保护血管内皮细胞的功能，因此具有预防血栓形成的作用，其作用机制与文献报道的补阳还五汤改善微循环的作用一致。光照后肠系膜微静脉血栓的大小及血栓占管腔的面积比脑心通对照组也明显减小，尤其中剂量组，说明益脑通络胶囊具有改善肠系膜微循环的作用，肠系膜微循环的改变在一定程度上可以反映全身循环状态。益脑通络胶囊能较好预防血小板黏附，在某种程序上对全身的微循环损伤也有预防作用。
【参考文献】
［1］ 陈 奇.中药药理研究方法学［M］.北京.人民卫生出版社,1993:33-34.
［2］ 田 牛.微循环观察方法学［M］.北京.原子能出版社,1993:220-233.
［3］ 刘玉英,赵秀梅,刘凤英,等.怡开对白细胞粘附和血液流变性影响的研究［J］．微循环杂志,2002,12(1):25-27.
［4］ 张杰文,甘红珍,李红戈，等.大鼠缺血性卒中光化学模型研究［J］．激光杂志，1997，18（6）：52-54.
［5］ 马 怡，徐秋萍.血栓形成的实验动物模型研究概况［J］.中药药理与临床,1998,14(2):46-49.
［6］ 李 泓,郑有顺.补阳还五治疗中风临床和药理研究进展［J］.中成药,1996,18(3):42-44.
作者单位：解放军第252医院干部病房,河北 保定 071000