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【摘要】 目的：探讨白细胞介素18(IL-18)在乙型肝炎病毒(HBV)感染中的作用。方法：用ELISA法检测66例HBV感染者(无症状携带者16例，慢性肝炎患者38例，重型肝炎患者12例)和16例正常对照血清IL-18的水平。结果：重症乙肝患者IL-18血清水平明显高于其它组(P<0.001)。慢性乙肝明显高于正常对照(P<0.05)，但与无症状携带者比较差异无显著性(P>0.05)。无症状携带者与正常对照组之间差异无显著性(P>0.05)。IL-18水平与血清胆红素水平呈正相关(r=0.672，P<0.05)。结论：IL-18参与乙型肝炎免疫致病过程，与病情严重程度相关。
【关键词】 乙型肝炎病毒 白细胞介素18
病毒性肝炎病理机制十分复杂，细胞因子在其中的作用越来越受到重视，我院应用ELISA法测定各型乙型病毒性肝炎(乙肝)患者血清IL-18水平，以探讨IL-18在乙肝发病机制中的作用。
1 资料与方法
1.1 病例来源 HBV感染者66例，其中，慢性乙肝38例，重症乙肝12例及无症状携带者16例，均为我院2005年8月至2007年3月住院及门诊患者。其中，男性49例，女性9例，年龄16～68(34±9)岁。诊断符合2000年第六次全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准，并排除合并感染其他病毒性肝炎。以16例健康献血员为正常对照，其中，女5例，男11例，年龄18～39(28±6)岁。所有病例采血前均无免疫制剂应用史，2周内无细菌和(或)其它病毒感染史。
1.2 血清样本采集 受试者均于清晨空腹时肘静脉采血，2h内分离血清并于-70℃以下冰箱保存，待检。血清样本IL-18水平检测：均采用双抗体夹心ELISA法，试剂盒由上海华美公司提供，美国进口分装。由专人严格按说明书操作，结果均以pg/L表示。血清ALT、TB水平检测血清样本均采用全自动生化分析仪(日本SHIMADZU)检测。统计学分析：慢性乙肝、重症乙肝、无症状携带者、正常对照4组间比较采用单因素多水平设计资料的方差分析及q检验，重症乙肝组内比较用t检验，IL-18血清水平与肝功能生化指标ALT、TB水平相关性采用直线相关分析。采用SAS8.1统计软件。
2 结果
各组IL-18血清水平检测结果：重症乙肝(731.5±266.6)pg/L,慢性乙肝(132.6±98.1)pg/L,无症状携带者(51.1±30.4)pg/L,正常对照(30.1±6.9)pg/L(注：F=98.35，P<0.01，重症乙肝与慢性乙肝、无症状携带者、正常对照组比较，P<0.01。慢性乙肝与正常对照组比较，P<0.05)。
2.1 各型乙肝患者血清IL-18水平 重症乙肝IL-18水平最高，慢性乙肝明显高于正常对照(P<0.05)，但与无症状携带者比较差异无显著性(P>0.05)。无症状携带者与正常对照组之间差异无显著性(P>0.05)。在12例重肝患者中有7例因肝衰竭而死亡，死亡者IL-18血清水平为(931.1±133.1)pg/L，另5例生存者IL-18血清水平为(452.2±42.1)pg/L，两者比较差异有显著性(t=7.681，P=0.0215)。
2.2 乙肝患者IL-18血清水平与TB血清水平呈正相关(r=0.672，P<0.05)，而与ALT水平无明显相关(r=0.106，P>0.05)。
3 讨论
IL-18是一种新发现的Thl型细胞因子，主要由单核吞噬细胞、T细胞、NK细胞等产生，具有多种生物学功能，是γ-干扰素(IFN-γ)的主要诱导因子。IL-18通过激发γ干扰素(IFN-γ)的分泌，促进Thl细胞增殖，进一步诱导TNF-α、IL-1β、IL-8、巨噬细胞炎症蛋白-1α单核细胞趋化蛋白-1、NO、细胞间粘连分子等;是Thl型免疫反应的中枢性介质，参与机体的免疫调节、抗感染、炎症的过程，很多疾病的免疫性病理损害与IL-18有关，在肝脏的炎症反应中亦起重要作用。HBV转基因小鼠模型显示IL-18可抑制HBV在肝脏复制，与IL-12有协同作用。故研究乙型肝炎患者IL-18血清水平，有助于了解机体的免疫状态，对揭开乙肝的发病机制有一定意义。
本文结果显示，各型患者血清IL-18水平均高于正常对照组，其水平随着肝细胞受损程度加重而增高，重症乙肝明显高于其余3组，重肝死亡者明显高于生存者，提示IL-18参与了各型乙肝尤其是重症乙肝的发病及转归过程。小鼠暴发性肝炎模型已证实IL-18诱导的FasL与IL-18、IFN-γ、肿瘤坏死因子α等细胞因子共同参与了肝脏的损害。本研究结果也支持上述观点。
乙肝患者IL-18分泌增多，而且IL-18主要通过肝脏代谢，并与胆汁同时排入肠道。肝衰竭患者，因有效肝细胞锐减而导致肝脏处理、排泄IL-18的能力急骤下降，继而引起在体内蓄积。在各型肝炎中，IL-18与TBil呈正相关，提示肝脏功能受损影响了IL-18的正常代谢使其分解减少，且肝细胞的炎性坏死物、胆汁淤积阻塞胆道导致IL-18排泄不畅，亦加剧了其在体内蓄积。
慢性乙肝明显高于正常对照，无症状携带者IL-18水平虽高于正常对照组，差异无显著性，说明慢性乙肝、无症状携带者体内IL-18水平并不低，但病情趋于慢性化，HBV感染持续，推测慢性乙型肝炎患者、HBV无症状携带者体内可能Th2细胞因子占优势。Thl/Th2细胞失调可能是HBV感染慢性化机制之一。Thl细胞分泌IL-2、IFN-γ、IL-12、TNF-α/β等Thl型细胞因子。Th2细胞分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等Th2型细胞因子。Thl型免疫反应能增强宿主对微生物的免疫和防御功能，在引起病理损伤的同时有利于消除病原微生物，而Th2型细胞则可抑制Thl细胞功能，与持续性感染或疾病的慢性化有关。据报道，急性乙肝急性期70%的T细胞克隆分泌Thl型细胞因子，而慢性乙肝患者肝内Th1细胞仅占25%。国外研究结果显示，慢性乙型肝炎患者产生IFN-γ的Th细胞数并不低于正常人，但产生IL-4的Th细胞数比正常人高，HBeAg特异的T细胞产生IL-10，能抑制Thl应答。赵彩彦报道，IL—2/IL-10比值与慢性肝病病情严重性密切相关，病情越重，比值越低。以上研究结果提示，Thl/Th2细胞平衡失调在HBV感染慢性化机制的重要性。虽然慢性乙型肝炎患者、无症状携带者能正常分泌甚至分泌高水平的IL-18，可是由于Th2细胞因子占优势，使得IL-18不能有效促进Thl应答以清除病毒。对干扰素治疗有应答的慢性乙型肝炎患者治疗期间血清中IL-18、IL-12水平上升，明显高于无应答者，这从某种程度上说明，干扰素能通过调节Th1/Th2细胞的平衡而发挥其治疗作用。
此外，慢性乙肝患者体内可能存在其他因素影响IL-18的作用。白细胞介素18结合蛋白(IL-18BP)是新近发现的一种糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族成员，它以高度的特异性亲和力与IL-18结合并中和其生物活性，被认为是IL-18的天然抑制剂。IL-18生成过多与成人Still’s病(ASD)发病机制密切相关，尽管IL-18抑制剂如IL-18BP可抑制IL-18的致炎活性，ASD活动似乎由IL-18及其特异性抑制剂的相对水平决定，慢性乙肝患者体内是否分泌高水平的IL-18BP尚有待进一步研究。
本文12例SH患者中，有7例因肝衰竭死亡。死亡组IL-18水平明显高于生存组，提示IL-18在判断病毒性肝炎患者肝脏损伤程度上有一定价值，重型肝炎患者检测IL-18可以预测其预后。动物模型显示，IL-18BP可通过阻断IFN-γ生成预防LPS介导的致死，预防Fas/FasL介导的肝脏损害。若利用IL-18BP进行基因治疗，也许能为重肝、肝炎后肝硬化的治疗提供一条新思路。
作者单位：淄博市临淄区人民医院,山东 淄博 255400