首乌藤中大黄素的含量测定

　　【摘要】 目的  建立用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定首乌藤中大黄素含量的方法。 方法  采用十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相为甲醇—0.1%磷酸（90∶10）;检测波长为254nm。 结果  在0.152～1.824μg范围内呈良好的线性关系;平均回收率为97.27%，RSD=1.42%。 结论  该方法不仅操作简便、准确，且重现性好，可用于首乌藤的质量控制。
      
　　关键词  反相高效液相色谱 首乌藤 大黄素
      
　　Content determination of Emdion in Caulis polygoni multiflori
     
　　Zhou Xiaojiang，Liu Tasi
    
　　Hunan College of TCM，Changsha410004.
   
　　【Abstract】 Objective To study a RP-HPLC method that determined the Emodin content in the Caulis poly-goni multiflori.Methods Emodin was separated completely on an C 18 column，using a mixture of methanol and0.1%phosphoric acid（90:10）as mobile phase，with UV detection at254nm.Results Emodin has better linear correlation between0.152μg and1.824μg.The results also have shown the recovery rate was97.27%，RSD1.42%.Conclusion The method is very stable and accurate，and has good reappearance.It can be used for quality control of Cauli polygoni multiflori.
     
　　Key words RP-HPLC Caulis polygoni multiflori Emodin
      
　　首乌藤为蓼科植物何首乌（Polygonum multiflorum Thunb.）的干燥藤茎。功能为养血安神，祛风通络。主治失眠多梦，血虚身痛，风湿痹痛;外治皮肤瘙痒 ［1］ 。《中国药典》未收载含量测定，文献报道仅有薄层扫描法测定首乌藤中大黄素的含量 ［2］ ，因此，我们建立反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定首乌藤中大黄素的含量，控制首乌藤的质量，以确保临床疗效。

　　1 仪器与试药
    
　　1.1 仪器 日本岛津LC-10A高效液相色谱仪，SPD—10AV紫外检测器;CT-100恒温箱。LC2002数据处理系统。上海必能信CQ-250型超声波清洗器。BP211D AG电子天平（德国Sartorius）。
   
　　1.2 样品 首乌藤（购自湖南省长沙市，鉴定为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥藤茎）;大黄素（供含量测定用，中国生物制品药品检定所，110756-200110）
   
　　1.3 试药 甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试药均为分析纯。
    
　　2 方法与结果
    
　　2.1 色谱条件 （1）色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶柱Di-amonsil（TM）C 18 （250mm×4.6mm，5μm）。（2）流动相:甲醇—0.1%磷酸（90∶10）;（3）检测波长:254nm;（4）流速:1.0ml/min;（5）柱温:40℃。
   
　　2.2 对照品溶液的制备 精密称取大黄素对照品7.6mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀即得（浓度为0.152mg/ml）。
   
　　2.3 线性关系的考察 分别精密吸取上述对照品溶液1μl、2μl、4μl、8μl、10μl、12μl，注入液相色谱仪，以大黄素进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，见图1、图2。回归方程为Y=3E+06X+22500（r=0.9999）。结果表明大黄素在0.152～1.824μg范围内具有良好的线性关系。
 
　　图1 大黄素HPLC图谱（略）
   
　　图2 首乌藤药材中大黄素含量测定HPLC图谱（略）
    
　　2.4 精密度试验 精密吸取大黄素对照品溶液（0.152mg/ml）10μl，重复进样5次，峰面积积分值分别为4816523、4850388、4811154、4805186、4799676，RSD=0.41%。表明该方法精密度较好。
   
　　2.5 重复性试验 取同一批首乌藤药材细粉（购于长沙市高桥药材市场）5份，每份1.0g，精密称定，按2.8项下的含量测定方法进行测定。结果分别为0.241%、0.245%、0.252%、0.258%、0.243%，平均为0.248%，RSD=2.84%。表明该方法具有较好的重复性。
   
　　2.6 稳定性试验 取重复性试验项下的同一样品，每2h进样1次，每次10μl，连续进样6次，峰面积积分值分别为1401617、1398366、1417375、1421304、1412348、1405487，RSD=0.64%，表明样品溶液中大黄素在10h内测定有良好稳定性。
   
　　2.7 回收率试验 取已知含量的首乌藤药材细粉（购于长沙市高桥药材市场）6份，每份0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入大黄素对照品溶液（浓度为1.26mg/ml，氯仿制）0.8ml、1.0ml、1.2ml，按2.8项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算回收率，平均回收率为97.27%，RSD=1.42%，见表1。
    
　　表1 回收率试验结果（略）
    
　　2.8 样品测定 取首乌藤药材细粉1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入1.0mol/L盐酸30ml与氯仿20ml，回流30min，放冷，分取氯仿层、酸水层再分别加氯仿萃取3次，每次20ml，合并氯仿层，回收氯仿，残渣加甲醇45ml溶解，转移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
   
　　精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表2。
    
　　表2 首乌藤药材中大黄素的含量（略）
    
　　3 结论

　　选用RP-HPLC测定首乌藤中大黄素含量，不仅操作简便、准确，且重现性好，可用于首乌藤的质量控制。根据测定结果，并考虑首乌藤的采收季节、加工、贮存等因素，可暂定首乌藤中大黄素的含量不得少于0.10%。
    
　　参考文献
    
　　1 国家药典委员会.中华人民共和国药典.北京:化学工业出版社，2000，235.
   
　　2 陈燕军.薄层扫描法测定黄参颗粒剂及首乌藤中大黄素的含量.中国中药杂志，1994，19（5）:284.
    
　　（编辑新 竹）

　　作者单位:410004长沙湖南中医学院药学院