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【摘要】 目的 探讨十全大补汤对小鼠肝癌H 22 的抑瘤作用及其机制。 方法 复制小鼠肝癌H 22 模型，实验分为模型组、5-氟尿嘧啶（5-FU）组、十全大补汤高、中、低剂量组，分别计算抑瘤率;用免疫组化法检测凋亡指数。 结果 十全大补汤高、中、低剂量均有一定的抑瘤作用，以中剂量组为最佳，抑瘤率为54.8%;增加凋亡指数与5-FU组比较，差异均有显著性。 结论 十全大补汤高、中、低剂量，对小鼠肝癌H 22 有明显抑瘤作用，以中剂量组为最佳，增加凋亡指数可能是其抑制肿瘤的主要机制之一。
关键词 十全大补汤 肿瘤 凋亡
细胞凋亡是近年来肿瘤研究的热点，肿瘤的发生与细胞凋亡有着密切的关系。十全大补汤是补益气血的著名方剂，主治气血两虚，临床上在治疗肿瘤方面疗效肯定。为进一步探讨十全大补汤的抑瘤作用及其分子机制，我们进行了本实验研究，现总结如下。
1 材料与方法
1.1 实验动物及瘤株 动物:昆明种小鼠50只，体重18～22g，雄雄各半，浙江中医学院实验动物中心提供。肝癌H 22 瘤株:购于浙江省医学科学院实验动物中心。
1.2 药品 十全大补汤（黄芪、肉桂、红参、茯苓、白术、甘草、熟地、白芍、川芎、当归），原料药均购自浙江中医学院门诊部中药房，经鉴定均为正品，符合国家药典标准（2000年版）;按常规方法煎成汤剂，分高、中、低剂量组，分别为成人剂量的24倍、12倍、6倍。实验用药生药含量分别为1.68g/ml、0.8g/ml、0.4g/ml。5-FU，上海旭东海普药业有限公司生产，批号为980330，按25mg/kg体重给药，配制成2.5mg/ml稀释液。
1.3 实验方法 无菌剥取传代8天的肝癌H 22 瘤块，碾成匀浆，用生理盐水调整细胞浓度至1×10 7 /L，台盼蓝染色，光镜下瘤细胞计数，活瘤细胞>90%。每只0.2ml，接种于小鼠右腋部皮下，24h后随机分为5组。（1）模型组;（2）5-FU组;（3）十全大补汤高剂量组;（4）十全大补汤中剂量组;（5）十全大补汤低剂量组。其中（1）组灌服生理盐水0.1ml/10g;（2）组腹腔注射5-Fu0.1ml/10g，同时灌服生理盐水0.1ml/10g;（3）、（4）、（5）组分别灌胃十全大补汤高、中、低剂量0.2ml/10g，每日1次，连续10天。第11天称体重，脱颈椎处死，取肿瘤组织，分别称重。
1.4 指标检测
1.4.1 抑瘤率 按下列公式计算。肿瘤抑制率=［1-（给药组平均瘤重/模型组平均瘤重）］×100%。
1.4.2 凋亡指数 取各组小鼠的肿瘤组织，10%甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，切片，HE染色，于光学显微镜下观察，每张切片取5个坏死的视野，计数500个肿瘤细胞中阳性细胞所占百分比，计算凋亡指数（apoptotic index，AI） ［1］ 。AI=凋亡细胞数/总细胞数。
1.5 统计学方法 采用SPSS10.0统计软件对上述检查结果进行分析处理，数值用均数±标准差（ˉx±s）表示，两组间比较用t检验，以P<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 各组小鼠抑瘤率的比较 见表1。十全大补汤高、中、低剂量均有一定的抑瘤作用，与模型组比较差异有显著性，以中剂量组最为明显。5-FU组与高、中剂量组比较差异无显著性。
表1 不同组别对肿瘤小鼠抑瘤率的影响 （略）
注:与模型组比较， ★ P<0.05， ★★ P<0.01;与5-FU组比较， △ P>0.05
2.2 各组小鼠凋亡指数比较 见表2。与模型组比较，5-FU组、十全大补汤高、中、低剂量组凋亡指数明显升高，差异有显著性。
表2 不同组别对肿瘤小鼠凋亡指数的影响 （略）
注:与模型组比较， ★★ P<0.01;与5-FU组比较， △ P>0.05
3 讨论
十全大补汤是气血双补的著名方剂，由黄芪、肉桂、人参、茯苓、白术、甘草、熟地、白芍和川芎等10种中药组成。临床上常用于治疗气血两虚、病后体弱等证，有很好的疗效。近年来对该方用于癌症治疗的研究越来越受到关注，能明显改善癌症患者的恶病质状态，减轻肿瘤患者的化疗反应 ［1］ ，明显对抗氢化泼尼松所致的SRBC-DTH降低以及环磷酰胺所致免疫抑制小鼠血清溶血素水平的降低 ［2］ 。肿瘤的形成与细胞生长增殖过快有关，另一方面又与凋亡细胞数目减少有关。细胞凋亡是一种主动地受基因调控的程序性细胞死亡过程，是维持器官组织细胞数量恒定和内环境稳定的重要机制，在肿瘤的发生、发展、灭亡过程中细胞凋亡起着重要的作用 ［3］ 。
本研究显示十全大补汤具有明显的抑瘤作用，尤以中剂量组为最佳。有效诱导肿瘤细胞凋亡，提高死亡与增生比值，达到抗肿瘤的目的，可能是十全大补汤抗肿瘤作用的机制之一。
参考文献
1 齐聪.十全大补汤对减轻化疗副作用的临床与实验观察.浙江中医学院学报，2000，24（4）:16-17.
2 曹志然.十全大补汤对小鼠免疫功能影响的实验研究.中国中医基础医学杂志，2000，6（10）:34-35.
3 彭黎明，王礼明.细胞凋亡的基础与临床.北京:人民卫生出版社，2000，412.
（编辑商志伟）
作者单位:310053杭州浙江中医学院
310009杭州浙江省中医院