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【摘要】 目的 观察“胰泰复方”对慢性胰腺炎(CP)胰腺纤维化大鼠血清中羟脯氨酸(Hyp)含量的影响。 方法 30只大鼠随机分成3组,中药治疗组、模型组分别予13.3%L-精氨酸腹腔注射,均造成慢性胰腺炎模型,正常组给予同样剂量的生理盐水注射,10天后中药治疗组以胰泰复方灌胃,正常组和模型组予生理盐水灌胃。2个月后取材。 结果 “胰泰复方”对CP胰腺纤维化具有恢复作用;模型组血清中Hyp含量显著升高。 结论 Hyp含量与胰腺纤维化程度密切相关。
慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)是临床较为常见的消化系统疾病,是由于不同原因引起的胰腺腺泡和胰管进行性炎症、破坏、纤维化的病理过程,常伴有钙化、假性囊肿及胰岛细胞减少或萎缩。其中持续性胰腺腺泡被结缔组织替代最终导致纤维化是CP的主要病理变化[1] 。本文报道胰泰复方对CP胰腺纤维化大鼠血清羟脯氨酸(Hyp)含量的影响,以研究胰泰复方对CP腺泡纤维化的恢复作用,从而证明Hyp含量与胰腺纤维化程度密切相关。
1 材料与方法
1.1 动物分组与处理 雄性纯系Wistar健康大鼠30只,体重(250±20)g,由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。将大鼠随机分为3组:正常组、模型组、中药治疗组,每组10只。造模药物用0.9%生理盐水配成13.3%L-精氨酸溶液,临用前配置 [2] 。正常组行左下腹腔注射相同体积的0.9%生理盐水溶液。各组均普通饲料喂养。中药治疗组按正常成人与大鼠给药剂量系数计算:11.25g/kg;正常组、模型组用生理盐水给大鼠灌胃。自第11天始,各组进行灌胃。
1.2 实验药物 胰泰复方:柴胡15g,花粉15g,当归15g,茯苓15g,白术15g,红花10g,桃仁10g,佛手10g,郁金10g,甘草10g等,购于黑龙江中医药大学附属第一医院药房。
1.3 标本的采集 各组灌胃2个月后取其血清用于检测Hyp,取胰腺组织制作病理切片进行HE染色。
1.4 HE染色方法 切片脱蜡至水,苏木素浸染10min,盐酸酒精分化数秒,伊红浸染1min,梯度酒精脱水,二甲苯透明,树脂封片,光学显微镜下观察,细胞核呈蓝色,胞浆呈粉红色。
1.5 大鼠血清Hyp含量测定 用南京建成生物工程研究所提供的Hyp测试盒,按说明书进行操作。
1.6 统计学方法 实验数据用均数±标准差(ˉx±s)表示,组间比较用t检验。
2 结果
2.1 各组大鼠血清Hyp含量 见表1。
表1 各组大鼠血清Hyp含量比较 (略)
注:模型组与正常组比较, * P<0.01;模型组与治疗组比较, △ P<0.05
2.2 各组大鼠HE染色结果(镜下改变)
2.2.1 正常组 胰腺腺泡呈嗜碱性,腺细胞为锥体形,胞浆丰满,细胞核呈圆形位于基底部,细胞大小一致,排列整齐,胰腺小叶轮廓清晰,小叶间结缔组织中可见胰导管及血管等,见图1。
2.2.2 模型组 胰腺腺泡萎缩变形,水肿,小叶间纤维组织增生,大量炎细胞浸润,部分小叶结构消失,见图2。
2.2.3 中药治疗组 可见正常胰腺小叶,小叶间可见少量炎细胞浸润,见图3。
3 讨论
血清中Hyp含量增高是否反映胰腺纤维化,目前尚无报道。本实验模型组血清中Hyp含量显著增高,其原因为:胰腺纤维化时,胰内主要增加的成分为胶原蛋白。而Hyp是胶原肽链合成后在脯氨酸羟化酶的作用下将肽链上的脯氨酸羟化而形成的 [3] ,同时胶原形成后又在胶原酶的作用下分解Hyp被释放,导致血清中Hyp含量增加。因此血清中Hyp含量的检测是衡量机体胶原组织代谢的重要指标,它能间接反映胶原代谢状况[4] ,所以说测定血清中Hyp含量对CP胰腺纤维化的诊断有客观价值。
根据传统中医的理论及实践,我们所造CP模型从中医角度来看是脾虚型,其病机是本虚标实,本虚主要为脾虚,标实主要表现为气滞血瘀。依据健脾理气活血法所制定的“胰泰复方”对CP有确切疗效,光镜结果显示可以证实。
总之,胰腺实质纤维化是CP典型的病理表现之一,“胰泰复方”对本病起治疗作用的关键正是从抗纤维化角度来进行的 [1] ,而反映胰腺纤维化程度的客观指标是血清中Hyp的含量。因此测定血清中Hyp的含量为CP的诊断提供了客观指标。“胰泰复方”为治疗CP提供了新的治疗途径,对于其药理作用有待于进一步研究。
(本文图片见封三)(略)
参考文献
1 李显辉,尹晶,刘华生.健脾活血理气法治疗慢性胰腺炎的实验研究.中华医学研究杂志,2004,4(2):120.
2 尚宏清.分次大剂量L-精氨酸腹腔内注射致大鼠急性坏死性胰腺炎模型的研究.首都医科大学学报,2000,21(4):322.
3 王明运.实用临床生物化学.上海:上海科学技术文献出版社,1990,12-145.
4 周少春,车建途,李定国.大鼠肝组织羟脯氨酸的测定.上海:上海第二医科大学出版社,1997,176.
(编辑新 竹)
* 基金项目:黑龙江省教育厅科学技术研究项目(编号:9551051)
作者单位:150040黑龙江中医药大学中医基础中医诊断教研室(△ 2002级硕士, △△ 2003级博士)