外阴硬化苔藓T细胞亚群和脂质过氧化反应变化及腐殖酸治疗对IL-2受体的影响

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    ［摘要］  目的  探讨外阴硬化苔藓与免疫功能及脂质过氧化反应的关系，以及应用腐殖酸治疗后对患者免疫功能的影响。方法  外阴硬化苔藓患者30例，平均年龄（32.77±8.15）岁，以流式细胞术（FCM）检测患者静脉血CD3+、CD4+、CD8+、CD16+细胞，放免法测定患者血清白细胞介素-2（IL-2）水平，用双抗体夹心法测定患者白细胞介素-2受体（IL-2R）；用亚硝酸盐法检测过氧化物歧化酶（SOD）活性，用硫代巴比妥酸法（TBA法）检测丙二醛（MDA）变化；对照组采用正常健康妇女静脉血，平均年龄（32.17±5.63）岁。结果  外阴硬化苔藓患者CD3+细胞、CD4+细胞较正常对照组降低，差异有显著性（P<0.05）；患者CD8+细胞与正常对照组相比差异无显著性（P>0.05）；CD4+/CD8+细胞比值（1.07±0.38）低于正常对照组（1.44±0.33），差异无显著性（P>0.05）；CD16+细胞水平均略高于对照组，但差异无显著性（P>0.05）。IL-2水平患者组（4.03±1.81）明显低于正常对照组（7.47±1.97），差异有非常显著性（P<0.01）；患者组IL-2R水平（907.86±159.19）高于正常对照组（230.60±20.67），差异有非常显著性（P<0.01）。患者组SOD（18.24±3.36）明显低于正常对照组（23.81±4.53），而患者MDA（4.01±0.64）较对照组（3.25±0.58）明显增高。治疗后患者的T细胞亚群中的CD3+、CD4+T细胞，在淋巴细胞亚群的比例明显升高，患者IL-2升高（6.51±1.80），IL-2R降低（665.95±31.46），差异有非常显著性（P<0.01）。结论  外阴硬化苔藓患者体内存在免疫应答过度和过剩脂质过氧化反应，二者共同的作用导致了机体自身组织的损伤。腐殖酸治疗外阴白斑患者的机制可能为其关键能够促进CD4+T细胞所分泌的IL-2通过与IL-2R结合并将活化信号传导到细胞内，从而引起细胞的活化与增殖，使得T细胞活化，减轻过度的免疫应答。

　　［关键词］  外阴硬化苔藓；T细胞亚群；白细胞介素-2；白细胞介素-2受体；腐殖酸；脂质过氧化反应
  
　　外阴硬化苔藓是一种以皮肤萎缩变薄为主的外阴疾病，表现为病损区皮肤发痒。病变常位于大阴唇、小阴唇、阴蒂包皮、阴唇后联合及肛周，初起发红肿胀，进一步发展时皮肤和黏膜变白、变薄、失去弹性，干燥易皲裂，晚期皮肤菲薄，阴道口痉挛，本病难治疗、易复发给广大患病妇女带来巨大痛苦，严重影响着妇女的生活质量。腐殖酸是从矿物中提取的化学物质，而黄腐酸钠是其中分子量最小的，20世纪时国外将HA类物质较广泛地用于医药中，与其他药物制成各种制剂，并进行病理研究，发现其药理作用大致如下：可抑制前列腺素E合成，并能抑制外源性透明质酸酶引起的炎症渗出，提高白细胞吞噬力，促进免疫力提高的作用，为此，我们特意观察了经过应用腐殖酸治疗后的患者的T淋巴细胞亚群及体内白介素-2及受体水平的变化，现总结报告如下。

　　1  资料与方法

　　1.1  一般资料  外阴白色病变患者为2003～2005年在我院外阴疾病专科门诊就诊的患者，共1000余例，平均年龄（32.77±8.15）岁，所有病例均于外阴病变处取活体组织送病检，病理诊断标准依据《中华妇产科学》，所有病例均经外阴病变处取活体组织送检经病理确诊，均为硬化苔藓型。由于大多数患者均不符合试验要求，故取其中60例患者（试验组），所有入选的患者经病史询问及查体除外与免疫相关的疾病和影响患者脂质过氧化反应的急慢性疾病，无不良嗜好影响免疫功能。排除在3个月内用过明显影响免疫功能的药物，患者平均年龄（32.77±8.15）岁。

　　对照组采用健康已婚妇女，既往无免疫性疾病及与免疫相关性疾病，年龄在20～40岁之间，平均为（32.17±5.63）岁，与试验组相比较差异无显著性（P>0.05）。

　　1.2  方法  外周血T淋巴细胞、Nκ细胞亚群测定：抽取受试者外周血5ml，以流式细胞术（FCM）检测患者静脉血CD3+、CD4+、CD8+、CD16+细胞亚群比例，放免法测定患者血清白细胞介素-2（IL-2）水平，用双抗体夹心法测定患者白细胞介素-2受体（IL-2R）；用亚硝酸盐法检测过氧化物歧化酶（SOD）活性，用硫代巴比妥酸法（TBA法）检测丙二醛（MDA）变化。

　　经过1年应用腐殖酸治疗后，患者再次于清晨抽取静脉血，以流式细胞术（FCM）检测患者静脉血CD3+、CD4+、CD8+、CD16+细胞，以放免法测定患者血清白细胞介素-2（IL-2）水平。用双抗体夹心法测定患者白细胞介素-2受体（IL-2R）；用亚硝酸盐法检测过氧化物歧化酶（SOD）活性，用硫代巴比妥酸法（TBA法）检测丙二醛（MDA）变化。

　　1.3  统计学方法  分别采用t检验及直线相关分析。

　　2  结果

　　2.1  试验组与正常对照组的CD3+、CD4+、CD8+、CD16+及CD4/CD8+比值  试验组的CD3+、CD4+低于正常对照组，差异有显著性。CD8+明显高于对照组，差异有显著性。CD4+/CD8+明显低于正常对照组，差异有显著性。两组的CD16+细胞比例相比，患者明显低于正常但差异无显著性，见表1。

　　表1  试验组与对照组T细胞亚群百分率  （略）

　　2.2  试验组血清SOD和MDA变化  表明外阴硬化苔藓患者血清中的SOD值明显低于正常组，而MDA明显高于正常组，两者相比差异有显著性，见表2。

　　表2  两组血清SOD和MDA变化 （略）

　　2.3  试验组治疗前后白介素2及其受体的血清变化  见表3。可以明显地发现，在经过治疗前的患者的血清IL-2的水平明显低于正常，但是其受体水平又高于正常组。治疗后IL-2水平高于治疗前但是仍未达到正常，而其受体水平低于治疗前。与正常组差异仍有显著性。

　　2.4  两组治疗前后比较  见表4。可以发现CD3+细胞CD4+细胞在淋巴细胞中所占比例明显上升，而CD8+细胞差异有显著性。CD16+细胞所占比例明显降低，但差异不明显。CD4+/CD8+的比例也增高，与治疗前比较差异有显著性。

　　表3  试验组腐殖酸治疗前后白细胞介素2及其受体的血清变化（略）

　　表4  两组治疗前后比较 （略）

　　3  讨论

　　外阴色素减退疾病系指外阴皮肤和黏膜组织发生变性及色素改变的一组慢性疾病。外阴皮肤和黏膜硬化性苔藓和鳞状增生过去称外阴色素减退性疾病。因病变部位皮肤和黏膜多呈白色，故又称其为外阴白色病变。这组疾病因其病理组织学表现的多样化和易变性，1975年国际外阴病研究协会将此病命名为慢性营养不良（chronic vulvar dystrophy），但迄今未发现病变部位有明确的血管神经营养失调，因而1987年国际外阴病研究协会与国际妇科病理学家又共同讨论，建议废止慢性外阴营养不良的分类法，将病因不明的外阴色素减退疾病分为外阴鳞状上皮增生和硬化性苔藓两种疾病，归类于外阴皮肤病范畴。外阴硬化苔藓是一种以外阴及肛周皮肤萎缩变薄为主的外阴疾病，表现为病损区皮肤发痒。病变常位于大阴唇、小阴唇、阴蒂包皮、阴唇后联合及肛周，进一步发展时皮肤和黏膜变白、变薄、失去弹性，干燥易皲裂，晚期皮肤菲薄，阴道口痉挛，本病难治疗、易复发，给广大患病妇女带来巨大痛苦，严重影响着妇女的生活质量。本病从幼年到老年均可发病，高峰年龄在40岁前后［1～4］。本病为慢性病变过程，病程长短不一，长者可达数十年。到目前为止针对此病的病因说法不一，有报道此病患者有可能与免疫有关。而从我们多年的观察却发现，患者的年龄逐渐减小，其发病率却越来越高。

　　免疫系统（immune system）是人和高等动物中识别自我和危险信号，引发免疫应答，发挥免疫效应和最终维持自身稳定的组织系统。免疫系统是在生物种系发育，进化过程中逐步完善。具有生成抗原特异性淋巴细胞和其他免疫细胞；向产生免疫应答的外周免疫器官集聚外来抗原；抗原特异性淋巴细胞在外周免疫器官间循环，以及识别外来抗原并产生应答，生成免疫应答产物（特异性抗体和效应细胞），并释放入血。

　　机体良好的免疫功能需要保持适中的反应水平和维持动态平衡。反应水平明显低于正常水平称为免疫缺陷，明显高于正常水平会呈亢进以至造成病理损害。这是免疫功能的双刃剑。在正常情况下，机体有多种调节平衡途径；CD4+T细胞和CD8+T细胞相互调节。

　　CD4+T细胞参与大多数自身免疫疾病的发生，CD4+细胞CTL主要参与清除活化的APC（如巨噬细胞、B细胞等）和活化的T细胞，从而对免疫应答发挥作用，防止应答过度，并适时终止之。CD8+分子具有介导细胞间的黏附作用，充当信号传导分子的功能。CD8+CTL主要识别和杀伤病毒感染细胞和肿瘤；随着现代免疫学的发展，对T细胞表面标志及其生物学作用的分子机制有了更深入的认识。无论CD4+T细胞或CD8+T细胞，均包括可发挥正、负调节作用的功能亚群。机体维持正常的免疫功能状态，有赖于各种免疫细胞（特别是各类T细胞亚群）之间的相互协作或相互制约，以产生适度的免疫应答，使之既能清除异物抗原，又不致损伤机体自身组织。正常情况下，T细胞及其亚群的数目在周围组织中相对稳定。若T细胞总数或CD4+T/CD8+T细胞比值改变，即可视为免疫调节功能异常［1～4］。根据我们对硬化苔藓患者的血清中T细胞亚群比例的观察发现CD4+T明显低于正常人群，CD8+T高于健康人群，其比值倒置，而且差异有显著性。同时我们的观察发现，患者的白细胞介素-2水平低于正常，而IL-2R水平高于正常，且差异有显著性，故考虑外阴硬化苔藓患者的T细胞免疫出现了调节功能异常［5～7］。

　　经过治疗后，其比值明显上升，接近健康人群，但仍未达正常。说明腐殖酸治疗有效的原因是其能够调节各细胞亚群之间的关系而使局部组织能够改善免疫应答过度，及时清除抗原。

　　在体内，IL-2是参与免疫应答的重要细胞因子，并参与炎症反应、抗肿瘤效应和移植反应。在免疫应答增殖阶段IL-2、IL-4等促进T、B活化、增殖和分化IL-2主要由CD4+和CD8+T细胞产生。主要以自分泌或旁分泌方式发挥效应。在体外IL-2促使所有亚型T细胞增殖及产生CK；促进Nκ细胞毒活性及产生CK；诱导LAK细胞扩增。

　　我们的观察发现患者组的CD3+、CD4+表现出一种下降趋势，推测硬化苔藓的患者免疫能力可能低于正常对照组。而CD8+、CD16+细胞水平高于对照组，说明患者组织内有较高的免疫应答，推测体内可能存在清除活化的APC和活化的T细胞的能力不足，造成免疫复合物的堆积，患者组CD4+T/CD8+T细胞比值低于正常对照组，从而说明硬化苔藓的患者体内存在免疫应答过度且造成机体自身组织的损伤。而经过腐殖酸的治疗后，患者的白细胞介素-2水平升高，且白细胞介素-2受体水平下降，说明腐殖酸具有调节T淋巴细胞免疫功能，其关键与其能够促进CD4+T细胞所分泌的IL-2通过与IL-2R结合并将活化信号传导到细胞内，从而引起细胞的活化与增殖，使得T细胞活化，减轻过度的免疫应答，从而能够缓解病情，而即使患者经治疗后白细胞介素-2及其受体水平都有变化，但仍未能达到正常对照组检测值。

　　腐殖酸是从矿物中提取的化学物质，而黄腐酸钠是其中分子量最小的。20世纪国外将HA类物质较广泛地用于医药中，与其他药物制成各种制剂，并进行病理研究。发现其药理作用大致如下：可抑制前列腺素E合成，并能抑制外源性透明质酸酶引起的炎症渗出，提高白细胞吞噬力，促进免疫力提高的作用。另有报道发现HA可以改善多脏器的微循环状态［8］。

　　综上所述，我们的实验结果提示外阴白色病变患者体内同时存在免疫应答过度和过剩脂质过氧化反应，而且二者之间存在明显的相关性，提示二者共同的作用导致了机体自身组织的损伤。当这些内在的机体损伤遭遇外阴局部环境改变如某些不良因素长期刺激等，便导致外阴白色病变发生。而腐殖酸治疗后，CD4+T/CD8+T细胞比值改变，接近正常。患者的白细胞介素-2水平升高，白细胞介素-2受体水平下降，说明腐殖酸具有调节T淋巴细胞免疫功能，减轻过度的免疫应答。对于这个过程发生中的原因、机制以及需要采取的相应干预措施将是我们进一步深入探讨的内容。

　　［参考文献］

　　1  Tagaya Y，Maeda Y，Mitsui A，et al.ATL-derived factor （ADF），an IL-2 receptor/Tac inducer homologous to thioredoxin;possible involvement of dithiol-reduction in the IL-2 receptor induction.EMBO J，1989，8（3）：757-764.

　　2  Erar F，Corthesy P，Nabholz M，et al.Interleukin-2 is botnecessary and dsufficientforthe growth and differentiation of lectinstimulate dcytolytic T lymphocyte precursors.J Immunol，1985，134（3）：1644-1652.

　　3  王建.白细胞介素-2受体及其功能研究进展.中国现代医学，2006，16（1）：241.

　　4  龚非力.医学免疫学.北京：科学出版社，2000，92-95.

　　5  Farrell AM，Marren PM，Wojnarowska F.Genital lichen sclerosus associated with morphoea or systemic sclerosis：clinical and HLA characteristics.Br J Dermatol，2000，143（3）：598-603.

　　6  Carlson JA，Grabowski R，Chichester P.Comparative immunophenotypic study of lichen sclerosus：epidermotropic CD57+ lymphocytes are numerous-implications for pathogenesis.Am J Dermatopathol，2000，22（1）：7-16.

　　7  Yang J，Chatterjee-Kishore M，Staugaitis SM，et al.Novel role of unphosphony level STAT3 in oncogenesis and transcription regulation Cancer Res，2005，65（8）：939-947.

　　8  宏宇明.黄腐酸钠对微循环的影响.中国微循环，2000，4（2）：127-129.

　　（编辑：宋  青）

　　作者单位： 100176 北京，北京同仁医院经济技术开发区院区