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［摘要］ 目的 探讨国外丙型肝炎病毒游离核心抗原检测试剂盒的质量及可能的用途。方法 用该试剂对自然供血员及丙型肝炎可疑感染者血样共9215份血清进行检测，并对检测数据进行统计分析。结果 该试剂在9215份血清中筛出两份HCV游离核心抗原阳性血清，其中一份为抗原和抗体同时阳性血清，产生的抗体为核心区抗体。另外一份为单独游离核心抗原阳性血清。临床考核发现该试剂出现了较多的假阳性结果。结论 该检测系统可用于高通量检测；临床考核发现，该试剂可能检出了游离核心抗原单独阳性的窗口期样品；该试剂界值确定太低，出现了部分非特异结果，在这方面，该试剂还有待改进。
［关键词］ 肝炎病毒；试剂；临床考核
Analysis of HCVcAg kit clinic trial
YANG Zhen，QI Zi-bai，YU Yang，et al.
National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biology Products，Beijing 100050，China
［Abstract］ Objective To investigate the quality of one imported HCVcAg EIA kit and analyse this kit’s different uses.Methods 9215 sera were detected by HCVcAg EIA kit.The suspeuous samples were confirmed with confirmed neutralization test and RIBA，and we statistise these results in sucession.Results This kit founded two positive HCVcAg sera.One of two sera was positive antibody to core meantime，another one was only positive HCVcAg during the preseroconversion window.Conclusion We think this kit can efficacy detect hepatitis C core antigen during the preseroconversion window.We suggest the manufacture must establish the system of correct cutoff.
［Key words］ hepatitis virus;reagent;clinical test
国家实行血源丙型肝炎病毒抗体筛查以来，临床用血质量得到很大提高，我单位从1995年开始对丙型肝炎病毒抗体诊断试剂进行分批检定，经多方面多年努力，我国使用的国内外丙型肝炎病毒抗体诊断试剂质量有了很大提高［1］，这进一步促进了筛查血源质量的提高。但在理论上，丙型肝炎病毒感染的早期存在一个“窗口期”［2］，在这一阶段，检测不到丙型肝炎病毒抗体，因此在实际工作中，可能存在极少数漏检的问题。近期，美国研制出丙型肝炎病毒游离核心抗原检测试剂盒，本试剂盒采用双抗体夹心酶联法原理（ELISA）检测人血清或血浆样品中丙型肝炎病毒游离核心特异性抗原，对丙型肝炎进行早期诊断，以减少“窗口期”漏检。我们对该试剂进行了临床考核，并对检测结果进行初步分析。
1 材料与方法
1.1 试剂
强生傲拓公司生产的丙肝病毒（HCV）游离核心抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）［antibody to hepatitis C core antigen murine monoclonal ELISA test system ORTHO antibody to HCV core antigen ELISA test system］（批号：AGK124；效期：2004年2月）。强生傲拓公司生产的丙肝病毒（HCV）总抗原诊断试剂盒（酶联免疫法）（Ortho Trak-CTMAssa，批号：AGK124；效期：2005年2月）。强生傲拓临床诊断公司生产的丙肝病毒（HCV）抗原中和确证诊断试剂盒（批号：EXE205；效期：2003年10月）。CHIRON公司生产的HCV抗体确证试剂RIBA3.0 CHIRON RIBA HCV3.0SIA HEPATITIS C VIRUS ENCODED ANTIGEN（Recombinant c33c and NS5 antigens;Synthetic 5-1-1，c100 and c22 peptides）（批号：AE2029；效期：2003年11月）。强生傲拓公司生产的丙肝病毒（HCV）抗体诊断试剂盒（批号：EXE343；效期：2004年5月）。ProclexTMHIV-1 and HCV Discriminatory Probe Reagents。
1.2 样品
6190份样品来自北京某血站、766份来自四川成都某血站、1693份来自广东深圳某血站献血员、566份来自河北廊坊等地区的HCV感染或可疑感染的献血员，每份样品分管保存于-70 ℃。
1.3 仪器
酶标仪，Ortho HCV Antigen Evaluation系统。
1.4 操作
所有检测严格按使用说明书操作。初筛检测分为两部分，可疑感染者血样由我室进行单孔检测初筛，初筛游离核心抗原阳性血清进行复检和中和确证。献血员血清由北京、深圳、成都地区相关血站进行单孔检测初筛，初筛游离核心抗原阳性血清进行复检和中和确证。所有初筛游离核心抗原阳性血清由我室进行双孔复检，复检游离核心抗原阳性血清进行三孔中和确证试验。三孔中和确证试验为阳性结果才判定为游离核心抗原阳性血清。同时对所有初筛游离核心抗原阳性血清利用强生傲拓临床诊断公司生产的丙肝病毒（HCV）抗体诊断试剂盒进行三孔抗体检测判断其抗体产生情况，以便分析这些血清是否为窗口期样品。利用抗体确证试剂RIBA3.0对确证抗原阳性血清和部分复筛抗原阳性血清进行RIBA检测，结合抗体诊断试剂盒检测结果，判定抗体阳性血清产生的是什么区域抗体。
1.5 结果判定
所有抗原判断结果由Ortho-Clinical Diagnostics HCV Antigen Evaluation系统软件完成。当待测样品信号/临界阈值（S/CO）＜1，样品为阴性。当待测样品信号/临界阈值（S/CO）≥1，报告显示样品为阳性。
2 结果
2.1 各个血站考核HCVcAg试剂初筛结果
见表1，在北京某血站6190份血样中，初筛出55份阳性样本。在深圳某血站1693份血样中，初筛出12份阳性样本。在成都某血站766份血样中，初筛出6份阳性样本。在廊坊地区566份血样中，初筛出77份阳性样本。随后我们对这些样品进行复筛和确证。表1 各个血站HCVcAg检测试剂初筛结果 （略）
2.2 北京某血站HCVcAg检测试剂复检结果
我们考核HCVcAg试剂，对北京某血站初筛出55份阳性样本，双孔复检结果，见表2。根据表2计算出，对北京某血站血样该试剂初筛阳性率为0.889%，复检阳性率为0.081%，确证阳性率为0.016%。复检出初筛阳性比率为9.111%，确证与初筛阳性比率为1.799%，确证与复筛阳性比率为19.750%。并对北京某血站HCVcAg初筛S/C值分布规律进行分析，见图1和表3。分析表明，S/C值在0.35~0.70的血清分布最多。表2 北京某血站HCVcAg检测试剂复检结果（略）注：确证 HCV抗原结果为中和试剂确证检测结果，HCV抗原检测结果为ELISA检测结果，下同表3 对北京某血站血样HCVcAg检测试剂初筛（略）
2.3 深圳某血站复检结果
我们考核HCVcAg试剂，对深圳某血站初筛出12份阳性样本，双孔复检结果，见表4。可以看出，对深圳某血站血样该试剂初筛阳性率为0.709%，复检阳性率为0.118%，确证阳性数为0。复检与初筛阳性比率为16.640%。对深圳某血站HCVcAg检测S/C值分布规律进行分析，见图2和表5。它的分布规律与北京差异无显著性（P＞0.05）。表4 深圳某血站HCVcAg复检结果（略）表5 对深圳某血站血样HCVcAg检测试剂初筛（略）
2.4 成都某血站复检结果
我们考核HCVcAg试剂，对成都某血站初筛出6份阳性样本双孔复检结果，见表6。可以看出，对成都某血站血样试剂初筛阳性率为0.780%，复检阳性数为0，确证阳性数为0。对成都某血站HCVcAg检测S/C值分布规律进行分析，见图3和表7。它的分布规律与北京差异无显著性（P＞0.05）。表6 成都某血站HCVcAg复检结果（略）表7 对成都某血站血样HCVcAg检测试剂初筛S/C值分布表（略）
2.5 廊坊地区样品复检结果
我们考核HCVcAg试剂，对廊坊地区初筛出6份阳性样本双孔复检结果，见表8。可以看出，对廊坊地区血样该试剂初筛阳性率为13.600%，复检阳性率为5.830%，确证阳性率为0.177%。复检与初筛阳性比率为3.036%，确证与初筛阳性比率为1.301%，确证与复筛阳性比率为3.036%。对廊坊地区HCVcAg检测S/C值分布规律进行分析，见图4和表9。它的分布规律与其他血站差异有显著性（P＜0.01）。表8 廊坊地区样品HCVcAg复检结果（略）表9 对河北廊坊血样HCVcAg检测试剂初筛（略）
2.6 对确证抗原阳性血清和部分复筛抗原阳性血清进行RIBA检测 结果见图5。RIBA抗体确证试剂的判定方法是IgGcontro Ⅰ和IgGcontro Ⅱ均显色，实验成立。抗体产生条带的判定依次为NS4、NS3、Core和NS5。若两条抗体条带显色，判为抗体阳性血清，若一条抗体条带显色，判为疑似抗体阳性血清，若所有抗体条带不显色，判为抗体阴性血清。结合强生傲拓的丙肝病毒抗体诊断试剂盒三孔抗体检测结果，17号样品是CORE区抗体阳性血清。而16号为游离核心抗原单独阳性样品。
3 讨论
本试剂盒采用双抗体夹心酶联法原理（ELISA）检测人血清或血浆样品中丙型肝炎病毒核心特异性抗原［3］，该试剂方法简单，易于操作，该检测系统可同时处理大量样品，可用于高通量检测。确证的两份抗原阳性血清和部分复筛抗原阳性血清进行RIBA检测结果显示，有一份抗原和抗体同时阳性的血清，产生的抗体是核心区抗体，这与相关的研究一致［4］。与国外的临床考核研究相比，均检出了单独游离核心抗原阳性血清［5］。根据四家血站复检与初筛阳性比率、确证与初筛阳性比率，确证与复筛阳性比率比较发现。该试剂出现了较多的非特异性反应，我们认为可能与该试剂阈值确定太低有关，已建议其改进。根据廊坊地区样品复检与初筛阳性比率、确证与初筛阳性比率、确证与复筛阳性比率与其他血站相关比值比较发现，其非特异性反应更高，这可能与廊坊地区血样比较陈旧有关。对各个血站HCVcAg初筛S/C值分布规律进行分析，我们发现，廊坊地区样品与北京、成都、深圳相关血站S/C值分布规律存在显著差异（P＜0.01），廊坊地区血样中，部分为HCV抗体阳性血清，而HCV抗体阳性血清对游离核心抗原检测是否有影响，这有待进一步的研究。
［参考文献］
1 杨振，祁自柏，张庶民，等.国产丙型肝炎病毒NS3抗原的质量检定.中华实验和临床病毒学杂志，1998，12（3）：253-257.
2 Legrer TJ，Riggert J，Simson G，et al.Testing of individual blood donations for HCV RNA reduces the residual risk of Transfusion-transmitted HCV infection.transfusion，2000，40：192-197.
3 Courouce AM，Le Marrec N，Bouchardeau F，et al.Efficacy of hepatitis C core antigen detection during the preseroconversion window.Tranfusion，2000，40：1198-1202.
4 Lee SR，Peterson J，Niven P，et al.Efficacy of an HCV core antigen ELISA for the identification of “window phase”blood donations.Vox Sang，2001，80（1）：19-23.
5 Syria Laperche，Nadine Le Marrec，Nicole Simon，et al.A new HCV core antigen assay based on disassociation of immune complexes：an alternative to molecular biology in the diagnosis of early HCV infection.Transfusion，2003，43：958-962.
作者单位： 100050 北京，中国药品生物制品检定所