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【摘要】 目的 探讨淋巴管生长因子（VEGF-C）和基质金属蛋白酶-2（MMP-2）在甲状腺乳头状腺癌中的表达及其与淋巴结转移的相互关系。方法 应用免疫组织化学Ｓ-Ｐ法对65例临床淋巴结阴性甲状腺乳头状腺癌分析VEGF-C和MMP-2的表达，并进行随访，随访时间5～15年。分别与癌旁甲状腺组织相比。结果 65例甲状腺乳头状腺癌中VEGF-C和MMP-2阳性表达分别为78.5%（51/65）和81.5%（53/65），30例癌旁甲状腺组织中阳性表达率分别为20.0%和36.7%。差异有统计学意义（P<0.01）。随访获得25例患者出现淋巴结转移，分别检测VEGF-C和MMP-2阳性表达为91.4%（32/35）和94.3%（33/35），与无淋巴结转移组相比差异有显著统计学意义（P<0.01）。VEGF-C和MMP-2 表达在甲状腺乳头状腺癌中有相关关系，并且两者关系较密切［Pearson列联系数（P）=0.5174］。结论 VEGF-C和MMP-2的表达与甲状腺乳头状腺癌淋巴结转移密切相关，可作为早期预测甲状腺乳头状腺癌颈部淋巴结转移的参考指标。
【关键词】 免疫组织化学；甲状腺乳头状腺癌；VEGF-C；基质金属蛋白酶Ⅱ
Correlation between expression of VEGF-C and MMP-2 in thyriod papillary cancer
CHEN Shi-tong，LIU Qiang，ZHAO Hui，et al.Department of General Surgery，The First People’s Hospital of Dongping，Dongping 271506，China
［Abstract］ Objective To evaluate the correlation between expression of vascular endothelial growth factor C（VEGF-C） and matrix matalloproteinases 2（MMP-2） and lymph node metastasis in thyroid papillary cancer.Methods S-P immunohistochemical technique was used to detact the expression of VEGF-C and MMP-2 in 65 thyroid papillary cancer which had no lymph node metastasis and adjacent follicular epithelia.They were followed up for 5 to 15 years.Results Positive expression rates of VEGF-C and MMP-2 in 65 thyroid papillary cancer were 78.5% and 81.5%，and in adjacent follicular epithelia to cancerous tissue were 20.0% and 36.7%.There was significant difference between them（P<0.01）.There were 35 patients with lymph node metastasis.Positive expression rates of VEGF-C and MMP-2 in 35 thyroid papillary cancer with lymph node metastasis were 91.4%（32/35） and 94.3% （33/35）.There was significant difference between thyroid papillary cancer with lymph node metastasis and thyroid papillary cancer with no lymph node metastasis（P<0.01）.And a nearly correlation between these two expression existed in thyroid papillary cancer［Pearson（P）=0.5174］.Conclusion The expression of VEGF-C and MMP-2 were significantly correlated with lymph node metastasis in thyroid papillary cancer，VEGF-C and MMP-2 may be the early referencing markers of thyroid papillary cancer with cervical lymph node metastasis.
［Key words］ immunohistochemistry；thyroid papillary cancer；endothelial growth factor C；matrix matalloproteinases 2
甲状腺癌是一种恶性肿瘤，其在生物学行为、组织学表现及对治疗的反应等方面均有明显不同。国内普查报道，其发生率为11.44/10万。乳头状腺癌是甲状腺癌最多见的一种病理类型，约占60%，2 266042 山东青岛，青岛市中心医院乳腺外科
甲状腺乳头状腺癌患者常有局部淋巴结转移，据报道，甲状腺乳头状腺癌行预防性颈淋巴结清扫术的80%患者有潜在的淋巴结转移［1］。说明甲状腺乳头状腺癌存在较高的隐性颈淋巴结转移率，本组病例隐性颈淋巴结转移率为53.8%，可能与病例选择有关。颈淋巴结转移影响甲状腺乳头状腺癌的预后，目前对于甲状腺乳头状腺癌颈部微小或隐匿性淋巴结转移的诊断存在不足。因此，寻找新的指标以早期预测甲状腺乳头状腺癌颈部淋巴结转移是值得研究和探讨的内容。
1 资料与方法
1.1 一般资料 所有标本来自我院1989年6月～1999年12月存档蜡块甲状腺乳头状腺癌65例，均施行甲状腺患侧叶、峡部全切，对侧大部切除。经病理学确诊，无淋巴结转移。男21例，女44例。年龄18～56岁（中位年龄41岁）。60例患者获得随访，失访5例。随访时间5～15年，随访5年以上42例（70.0％），10年以上18例（30.0％）。其中5年内死亡3例（4.62％），10年内死亡6例（9.23％），15年内死亡9例（13.8％）。其中6例死于其他疾病，2例死于广泛复发并肺转移，1例死于广泛复发并肝转移。随访中发现有淋巴结转移25例，均行二次手术。无淋巴结转移40例，选取癌旁甲状腺组织30例进行对照。
1.2 检测方法 采用免疫组化Ｓ-Ｐ法。兔抗人VEGF-C多克隆抗体，工作液浓度为1∶100；鼠抗人基质金属蛋白酶2单克隆抗体，工作液浓度为1∶40，均为北京中山公司产品。将蜡块行5 μm连续切片，微波炉修复抗原，按免疫组化S-P法操作常规进行，DAB显色。用已知阳性切片作阳性对照。病理科高级职称医师阅片。
1.3 结果评定标准 VEGF-C及MMP-2免疫组化阳性定位于细胞质，呈棕黄色颗粒。阳性结果判断:免疫组化结果采用Frank半定量计分法［2］判定:按阳性着色程度评分，0分为无着色；1分为浅黄色；2分为棕黄色；3分为棕褐色。按阳性细胞占比例评分，0分为<10%；1分为11%～25%；2分为26%～50%；3分为51%～75%；4分为>75%。两者乘积判定阳性结果:0分为阴性（-）；1～4分为弱阳性（+）；5～8分为中度阳性（++）；9～12分为强阳性［（+++）～（++++）］。
1.4 统计学方法 两组阳性表达率差异比较，采用χ2检验。
2 结果
2.1 VEGF-C阳性表达位于细胞质 见图1，65例甲状腺乳头状腺癌中，51例有不同程度的阳性表达。阳性表达率为78.5%。30例癌旁甲状腺滤泡组织阳性表达率为20.0%。两组间阳性表达差异有统计学意义（P<0.01）。随访中伴淋巴结转移组VEGF-C的阳性表达率显著高于无淋巴结转移组（P<0.01），见表1。表1 VEGF-C在甲状腺乳头状腺癌中的表达
2.2 MMP-2阳性表达位于细胞质和细胞膜 见图2。细胞间质亦有均质性弱阳性反应，MMP-2的癌细胞呈灶状或片状分布，多位于癌巢边缘。但在癌旁正常滤泡组织中，MMP-2的表达由远及近表现为阴性逐渐转变为弱阳性的趋势。65例甲状腺乳头状腺癌中，53例有不同程度的阳性表达。阳性表达率为81.5%。30例癌旁正常滤泡组织中有11例阳性，阳性表达率为36.7%。两组间阳性表达差异有统计学意义（P<0.01）。随访出现淋巴转移组MMP-2的阳性表达率显著高于无转移组（P<0.01），见表2。表2 MMP-2在甲状腺乳头状腺癌中的表达
2.3 VEGF-C及MMP-2在甲状腺乳头状腺癌中的关系 65例甲状腺乳头状腺癌中，VEGF-C阳性表达有56例，MMP-2阳性表达有53例。VEGF-C及MMP-2同时阳性表达的有43例（66.2%）。列联表资料的χ2检验计算：χ2=4.875，P<0.05，结合Pearson列联系数（P）=0.5174。故可认为VEGF-C及MMP-2在甲状腺乳头状腺癌中有关系，并且两者关系较密切，见表3。 表3 VEGF-C及MMP-2在甲状腺乳头状腺癌中 关联性分析 注：χ2=4.875，P<0.05；Pearson列联系数（P）=0.5174
3 讨论
VEGF-C是一种淋巴管生成因子，VEGF-C本身能诱导特异淋巴上皮增殖和淋巴管增生，能刺激肿瘤淋巴管生成和局部淋巴结转移，在肿瘤淋巴道扩散转移中起重要作用。最近有研究显示，VEGF-C在淋巴瘤、恶性黑色素瘤、纤维肉瘤、头颈部鳞癌和乳腺癌等肿瘤中有表达［3～5］。研究发现，VEGF-C与甲状腺癌淋巴结侵袭相关［6］，伴有淋巴结侵袭较无淋巴结侵袭的甲状腺乳头状癌患者VEGF-C mRNA显著增高，VEGF-C在易于淋巴道转移的甲状腺乳头状癌中基因表达高于以血道转移为主的甲状腺滤泡状癌［7］。本试验通过65例甲状腺乳头状腺癌标本研究发现：53例表现为VEGF-C阳性表达，阳性率为81.5%。伴有淋巴结转移的25例标本中，23例为VEGF-C阳性表达，阳性率为92.0%。无淋巴结转移组40例标本有25例VEGF-C阳性表达，阳性率为62.5%，经χ2检验证实两组间差异有统计学意义（P＜0.05）。说明甲状腺乳头状腺癌VEGF-C阳性表达与其极易发生淋巴结转移的生物学特性相符和。其促进肿瘤淋巴道转移的机制为：VEGF-C过度表达通过旁分泌刺激其受体VEGFR-3，VEGFR-3本身激活淋巴上皮，刺激淋巴管内皮细胞分泌次级淋巴趋化因子（SLC/CCL21），从而有利于肿瘤细胞与淋巴管内皮细胞的黏附，并且使淋巴管内皮细胞之间连接变的松散［8］，促进肿瘤细胞侵入淋巴管，再经淋巴管形成区域淋巴结转移。应用淋巴特异性标记物LYVE-1进行免疫染色发现VEGF-C与VEGFR-3结合后，可调节肿瘤外周淋巴管生成，不仅使肿瘤外周形成新的淋巴管，而且使现存的淋巴管增生。淋巴管直径增加，增大了肿瘤细胞与淋巴管的接触面积。基质金属蛋白酶MMP-2在癌细胞浸润、转移过程中起重要作用。MMP-2对基膜主要成分Ⅳ型胶原和层粘连蛋白的降解作用是其丧失完整性的主要原因。MMP-2一方面通过降解甲状腺乳头状腺癌基膜和包绕肿瘤的基质，突破基质屏障，是肿瘤细胞向周围浸润的生化基础［9，10］。另一方面通过毛细血管内皮细胞增生、新生血管生成等促进肿瘤生长和扩散。研究表明，MMP-2在甲状腺乳头状腺癌基因表达明显高于其他类型甲状腺疾病［8］。癌旁正常滤泡组织中，MMP-2的表达由远及近表现为阴性逐渐转变为弱阳性的趋势，说明肿瘤细胞通过可溶性介质与周围滤泡上皮和间质细胞进行信息交换，协同产生和调节MMP-2［11］。本试验中MMP-2在甲状腺乳头状腺癌及癌旁正常组织中阳性表达率分别为81.5%和36.7%，经χ2检验证实两组间差异在统计学意义（P＜0.05）。伴颈淋巴结转移的甲状腺乳头状腺癌原发灶中的MMP-2的表达高于该病无转移的原发灶。这结果表明MMP-2在甲状腺乳头状腺癌原发灶和转移灶中高表达与本病的高颈淋巴结转移相关，它具有促进甲状腺乳头状腺癌淋巴道转移作用。VEGF-C及MMP-2在甲状腺乳头状腺癌的表达有显著相关性，这是由于VEGF-C与其受体VEGFR-2结合后不仅促进肿瘤血管增生及肿瘤细胞生长，而且激活了基质金属蛋白酶（MMP-2）。有关VEGF-C及MMP-2在甲状腺乳头状腺癌中的发生及侵袭转移中的调控和作用机制仍需进一步研究。随访中出现颈淋巴结转移组VEGF-C及MMP-2的阳性表达显著高于无淋巴结转移组（P＜0.01），说明VEGF-C及MMP-2的强阳性表达，可作为初治时无淋巴结转移甲状腺乳头状腺癌以后出现颈淋巴结转移的预测指标之一，对于这部分患者应加强手术后随访，对于甲状腺乳头状腺癌淋巴结阴性病例是否行选择性颈淋巴结清扫术具有一定的参考价值。VEGF-C和MMP-2的阳性表达与甲状腺乳头状癌淋巴结转移密切相关，并且两者之间关系密切，可同时作为早期预测甲状腺乳头状腺癌颈部淋巴结转移的参考指标。对于甲状腺乳头状癌手术方式选择上具有一定的指导意义。（本文图片见封三）
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作者单位：1 271506 山东东平，东平县第一人民医院普外科