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【关键词】 艾迪注射液
艾迪注射液是一种目前临床常用的中药复方精制剂，其主要成分是：黄芪、人参、刺五加、斑蝥等，有益气活血、消瘀散结、清热解毒、扶正化瘀的功效。临床已经证实艾迪注射液对食管癌、原发性肝癌、胃癌、大肠癌等多种肿瘤有明显的疗效［1，2］。近年来，有研究表明艾迪有诱导癌细胞凋亡的作用［3］，Bcl-2、Bax及NF-κB p50是与凋亡调控有关的基因，笔者应用组织芯片技术，采用免疫组化法检测Bcl-2、Bax及NF-κB p50在艾迪组与对照组食管癌组织中的表达，以进一步探索艾迪注射液诱导食管癌细胞凋亡的途径。
1 材料与方法
1.1 研究对象 本试验研究设计为回顾性研究，共观察江苏省中医院胸外科2003年8月～2005年12月收治的食管鳞状细胞癌手术病人46例，其中艾迪组23例，对照组23例。所有病例术前均经电子内镜及组织病理学检查证实为食管鳞状细胞癌，无远处转移，术前未经放化疗或免疫治疗。
1.2 临床试验用药及处理方法 艾迪注射液：生产厂家为贵州益佰制药有限责任公司，批准文号为国药准字Z52020236。艾迪组术前给予5%葡萄糖注射液500 ml+艾迪注射液80 ml静滴，每月1次，治疗7天;对照组不用艾迪注射液，其他处理方法相同，均行食管癌根治、胸腹淋巴结清扫术。
1.3 主要试剂 Bcl-2、Bax、NF-κB p50由北京中杉金桥生物技术有限公司提供；即用型快速免疫组化MaxVisionTM试剂盒由福州迈新生物公司提供。
1.4 试验方法
1.4.1 标本收集 收集2003年8月～2005年12月南京中医药大学附属医院病理科归档食管鳞状细胞癌蜡块，回顾性分析其病历资料，符合艾迪组要求的23例，对照组23例。
1.4.2 常规病理学检查 观察肿瘤的部位、大小、浸润深度、大体类型、淋巴结转移情况，常规HE染色。
1.4.3 方法 每一例均行光镜观察。制作组织芯片，直径均为2 mm，46例食管鳞状上皮细胞癌，每例一个组织芯，加上阴性对照（正常食管鳞状上皮），共计47个组织芯。免疫组化染色，检测Bcl-2、Bax、NF-κB p50。
1.5 分析方法 Bcl-2、Bax、NF-κB p50评分标准是根据食管癌组织中免疫组织化学染色的深浅和阳性细胞百分数进行评分:阳性细胞百分数<25%，浅棕色为阴性；阳性细胞百分数>25%，棕色为阳性。
1.6 统计学分析 两组样本均值的比较采用t检验；采用SPSS 12.0统计分析软件进行有关检验，给出检验统计量及其相对的P值，用Fisher精确概率法时直接给出P值。以P≤0.05作为有显著性统计学意义，以P≤0.01作为有高度显著统计学意义。
2 结果
2.1 两组病例基本情况比较
2.1.1 性别、年龄 艾迪组男13例，女10例；对照组男17例，女6例；两组差异无统计学意义（P>0.05）。艾迪组平均年龄（59.09±9.075）岁，对照组为（57.48±8.805）岁，两组差异无统计学意义（P>0.05）。
2.1.2 肿瘤部位及长度 艾迪组肿瘤位于食管中段14例，下段9例；对照组中段16例，下段7例，两组差异无统计学意义（P>0.05）。艾迪组肿瘤长度0～3 cm为13例，3～6 cm为10例；对照组0～3 cm为11例，3～6 cm为12例，两组差异无统计学意义（P>0.05）。
2.1.3 肿瘤分化、浸润深度、淋巴结转移 艾迪组低分化2例、中低分化5例、中分化8例、中高分化8例、高分化0例；对照组低分化3例、中低分化0例、中分化10例、中高分化8例、高分化2例，两组差异无统计学意义（P>0.05）。艾迪组肿瘤浸润深度位于黏膜层1例、黏膜下层3例、肌层10例、纤维膜9例；对照组黏膜层0例、黏膜下层1例、肌层9例、纤维膜13例，两组差异无统计学意义（P>0.05）。艾迪组有淋巴结转移9例，对照组有淋巴结转移10例，两组差异无统计学意义（P>0.05）。
2.2 艾迪对食管癌Bcl-2 和Bax表达的影响 艾迪组Bcl-2阳性率为39.1%（9/23），对照组的阳性率为78.3%（18/23），两组比差异较有统计学意义（P＜0.05）; 艾迪组Bax阳性率为56.5%（13/23），对照组的阳性率为17.4%（4/23），两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。
2.3 艾迪对食管癌NF-κB p50表达的影响 艾迪组NF-κB p50阳性率为47.8%（11/23），对照组的阳性率为87.0%（20/23），两组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）
2.4 NF-κB p50、Bcl-2在食管癌中表达的相关性 结果见表1，NF-κB p50、Bcl-2有明显的相关性，呈正相关。表1 NF-κB p50、Bcl-2在食管癌中表达的相关性 注：rs＝0.358，χ2=5.906，P＝0.015，P＜0.05，差异有统计学意义
3 讨论
肿瘤的发生发展与细胞凋亡密切相关。许多抗肿瘤中药，如喜树碱、长春新碱、紫杉醇等，能诱导肿瘤细胞凋亡。艾迪注射液是临床常用的中药复方抗肿瘤制剂，该药由黄芪、人参、刺五加、斑蝥中提取有效成分精制而成，是一种新型多靶点药物，其抗肿瘤作用与诱导肿瘤细胞的凋亡有关。阎志钧等［4］用艾迪成功诱导脑胶质瘤细胞U251凋亡。已有研究证实爱迪的有效成分：刺五加皂苷、去甲斑蝥素等能诱导肿瘤细胞的凋亡。刺五加皂苷体外对胃癌细胞凋亡的诱导实验显示，其促进体外培养胃癌细胞凋亡的作用明显强于维甲酸［5］。刘晓兰等［6］通过探讨去甲斑蝥素对人早幼粒细胞株（HL-60）细胞增殖的抑制作用，发现去甲斑蝥素对HL-60的抑制作用是通过诱导细胞凋亡来实现的，形态学染色也证实了以上的实验结果。细胞凋亡是受基因调控的一种细胞主动的自杀形式，机体细胞数量的恒定取决于细胞增殖和凋亡之间的动态平衡，肿瘤的发生发展与这种平衡发生破坏密切相关。凋亡受凋亡相关基因（如Bax、Bcl-2等）的表达调控。Bcl-2位于线粒体外膜，能抑制多种因素引起的细胞凋亡。Bax 是Bcl-2 基因家族中的成员，和Bcl-2基因具有40%的同源性，但生理作用却相反，能促进细胞的凋亡。研究表明Bcl-2 和Bax 的表达程度及其比例决定细胞接受凋亡信号后的命运，Bcl-2占优势时细胞生存，Bax 蛋白大量表达时加速细胞的凋亡［7］。Wyllie等［8］研究表明Bcl-2基因和Bax基因的相关蛋白可形成异源二聚体，Bax之间可形成同源二聚体，且异源二聚体抑制凋亡，Bax同源二聚体则促进凋亡，因此认为Bcl-2与Bax比率的升降可调节细胞的凋亡，调高Bax/Bcl-2则促进凋亡，降低Bax/Bcl-2则抑制凋亡。本试验中Bcl-2、Bax 在艾迪组的阳性率分别为39.1%、56.5% ；在对照组的阳性率分别为78.3%、17.4%。Bcl-2 在艾迪组的表达阳性率比对照组显著降低，而Bax则显著增高，两者均具有统计学差异（P＜0.05）。由此可以看出，艾迪注射液可以通过下调Bcl-2蛋白的阳性表达，增大Bax/Bcl-2的比值，促进癌细胞凋亡。核因子κB （nuclear factor of kappa B，NF-κB）是近年来发现的一个真核细胞核转录因子家族，能在转录水平上调控多种基因的表达，参与机体多种生理病理进程，已经证实NF-κB在免疫应答、炎症反应、细胞黏附、细胞分化、生长与凋亡等方面扮演了重要角色［9］。研究表明NF-κB是细胞凋亡和增生的重要调节因子，在肿瘤凋亡的调控中起关键性作用，抑制肿瘤细胞NF-κB的活性可引起肿瘤细胞凋亡，从而抑制肿瘤细胞的生长［10］。NF-κB活化后可以调节抗凋亡和促凋亡蛋白的表达。研究表明，NF-κB 除可通过调控凋亡抑制蛋白（IAP） 及IL-6、IL-8 等细胞因子的表达外，还可通过诱导和上调Bcl-2 家族蛋白发挥抑制凋亡作用［11］。Bcl-2 启动子上存在NF-κB 的特异性结合位点［12，13］，NF-κB 可通过转录途径直接上调Bcl-2 表达［13］，同时还可通过TNF-α、p21WAF1［14］等其他途径促进Bcl-2 表达。在肿瘤细胞中由于NF-κB的活化可以激活含有κB 的Bcl-2 及Bcl-XL编码基因的转录表达，而对无κB 位点的Bax 和Bad 基因则无此作用，这就可能使得两类不同功能的蛋白表达量失衡，从而增强肿瘤细胞的抗凋亡性。抑制NF-κB活性可抑制Bcl-2 的表达，进而诱导肿瘤细胞凋亡［15］。笔者的研究结果中可以看出NF-κB p50在艾迪组的表达阳性率（47.8%）比对照组（87.0%）降低（P＜0.05）。艾迪注射液有抑制NF-κB活性的作用。笔者的结果还发现：NF-κB p50与Bcl-2表达有正相关性（rs＝0.358，P＜0.05），可以进一步证实 NF-κB p50对Bcl-2有正相调节作用，通过下调Bcl-2蛋白的阳性表达，促进癌细胞凋亡。由此可以看出，艾迪注射液可以通过抑制NF-κB的活化，下调Bcl-2蛋白的阳性表达，诱导癌细胞凋亡，这可能是其诱导食管癌细胞凋亡的途径之一。
【参考文献】
1 吴敏慧，姚俊涛，王玉珍.艾迪注射液治疗晚期消化系统肿瘤的临床观察.现代肿瘤医学，2005，13（3）:416-417.
2 吴继萍.爱迪注射液的药效与应用.中医研究，2003，16（2）:59-61.
3 严英，钟秀驰，周伟生，等.中药制剂介入治疗恶性肿瘤的药理与临床研究概述.中药新药与临床药理，2000，11（3）:185-188.
4 阎志钧，林志国，武俏丽.爱迪诱导U251细胞凋亡及相关基因表达的实验研究.哈尔滨医科大学学报，2001，35（5）:342-344.
5 叶红军，房家智，朱孝民，等.刺五加叶诱导胃癌细胞凋亡的探讨.中国老年病学杂志，1999，19（6）:338-339.
6 刘晓兰，陈家旭，刘燕，等.去甲斑蝥素诱导HL-60细胞凋亡的研究.北京医科大学学报，2000，23（4）:35-37.
7 Krajewshi S，Millian C，Shabaik A，et al.Immunohistochemical determination of in vivo distribution of bax，a dominant inhibitor bc1-2.Am J Pathol，1994，145（6）: 1323-1328.
8 Wyllie AH.Death gets a brake.Nature，1994，369:272-273.
9 SHishodia S，Aggarwal BB.Nuclear factor-kappa B activtion:a question of life and death.J Biochem Mol Biol，2002，35:28-40.
10 李琦，于颖彦，纪玉宝，等.胃癌细胞株核因子κB 组成性激活对细胞增殖的影响.中华胃肠外科杂志，2004，7（6） :488-491.
11 Starenki DV，Namba H，Saenko VA，et al.Induction of thyroid cancer cell apoptosis by a novel NF-κB inhibitor，dehydroxymethylepoxyquinomicin.Clin Cancer Res，2004，10（20） : 6821-6829.
12 Catz SD，Johnson JL.Transcriptional regulation of bcl-2 by nuclear factor kappa B and its significance in prostate cancer.Oncogene，2001，20（50） :7342-7351.13 Viatour P，Bentires-Alj M，Chariot A，et al.NF-kappa B2/p100 induces Bcl-2 expression.Leukemia，2003，17 （7） :1349-1356.
14 Akita K，Kawata S，Shimotohno K.p21WAF1 modulates NF-kappaB signaling and induces anti-apoptotic protein Bcl-2 in Tax-expressing rat fibroblast.Virology，2005，332 （1） :249-257.
15 Fahy BN，Schlieman MG，Mortenson MM，et al.Targeting BCL-2 overexpression in various human malignancies through NF-kappa B inhibition by the proteasome inhibitor bortezomib.Cancer Chemother Pharmacol，2005，56（1） :46-54.
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