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【摘要】 目的 制定和评价本院法国ABX PENTRA60血液分析仪复检规则，保证血细胞分析结果准确性。方法 根据医院具体情况建立ABX PENTRA60血液分析仪复检规则，并在规则指导下通过对2400份标本检测结果和显微镜镜检结果的数据分析，评价结果的可行性和可靠性。结果 在规则控制下,有33.0%的标本需采用复检和复片措施以确保结果准确，虽依旧存在2.4%的假阴性，但已经低于国际标准化委员会血液专家制定的5%的最大允许范围。结论 各临床实验室有必要根据自己所使用的仪器特点制定出合理的血细胞复检和显微镜复片的规则，既保证每个标本的分析结果的准确性，又减少不必要的工作负担。
【关键词】 血液分析仪; 复检规则; 应用评价
Development of review criteria for ABX PENTRA60 hematology analyzer and its evaluationSHAN Yan.Department of Clinical Laboratory, The Central Hospital, Datun Coal and Electricity Limited Company, Jiangsu 221611,China Objective To formulate and evaluate the hematology review criteria of Beckman Coulter ABX PENTRA60 automated hematology analyzer.Methods Based on the rules of our laboratory, review criteria on ABX PENTRA60 hematology analyzer were set by manual microscopic examination. All data were subjected to statistical analysis to find out the reliability of the rules.Results According to the criteria, 33.0% of specimens underwent blood reviews or smear reviews to ensure the accuracy, but still there existed 2.4% false negatives.Conclusions Each laboratory should develop its local criteria for blood cell counts and smear reviews based on the characteristics of the hematology analyzer in order to ensure the veracity of results and reduce the workload.
[Key words] hematology analyzer; review criteria; applied evaluation
五分类血液分析仪在实验室的广泛应用，大大提高了血常规的检验质量和效率，但同时也给临床实验室提出了新的挑战，如何建立使用血液分析仪后复检规则的标准仍然是实验室关心的热点和难点问题。由国外血液专家提出并经不同国家的15个实验室试用的“41条复检规则”[1,2]可供参考，但各实验室必须结合自己实际情况制订规则并经验证后方可使用。我室根据国际血液学复检专家组“41条复检规则”进行评估和修改的基础上[3]结合我院实际情况，对本实验室现有的血液分析仪ABX PENTRA60制订出相关血常规复检规则，并就仪器检测结果与显微镜镜检结果进行统计分析，以评估制订的规则。
1 材料与方法
1.1 标本准备 随机选择我院连续1个月的门诊和住院病人全血标本共2400份，EDTA-K2真空抗凝，于25℃环境下，每份标本分别推制厚薄适宜的血涂片各2张，用瑞姬染色备用于形态学镜检分析。
1.2 仪器与试剂 法国ABX PENTRA60全自动血液分析仪和原装配套校准品、质控品和检测试剂组;日本Olympus显微镜;康泰生物公司的瑞姬染液。
1.3 检测方法
1.3.1 仪器检测法 检测前，仪器用ABX PENTRA60公司专用校准品进行校准，检测期间每日室内质控在控，参加江苏省室间质评均在控。严格遵照仪器操作规程的要求测定标本，记录分析数据。所有检测2h内完成。
1.3.2 显微镜镜检法 由两名经验丰富、技术熟练的中级以上检验人员，分别计数两张血涂片，按细胞形态特征分类计数100个白细胞(WBC)，以2人结果的均值作为靶值，并作全片观察，记录有无血细胞大小、形态、结构异常等情况。
1.4 规则制定 参见国际血液学实验室41条血细胞复检规则、ABX PENTRA60血细胞报警提示及我科室实际情况，与临床医师进行讨论，制订出我院的血细胞计数和白细胞分类复检规则见表1。表1 ABX PENTRA60计数和白细胞分类复检规则
1.5 显微镜镜检阳性判定方法 参照国际血液学复检专家组制定的阳性标准[2,4]作为本次评估标准：RBC形态有中度或更大改变;血片中发现有疟原虫;PLT形态有中度或更大改变;PLT聚集比较多见;杜勒氏小体、毒性改变、空泡的粒细胞有中度或更大的改变;原始细胞≥1个;早/中阶段的细胞≥1个;晚幼阶段细胞≥2;不典型淋巴细胞≥5个;有核红细胞(NRBC)≥1个，浆细胞≥1个。
2 结果
2.1 复检规则的临床应用 每份标本在测定时，如果触及制订的复检规则，则按如下顺序进行，具体操作见表1。(1)观察标本情况：若是抗凝剂和(或)比例不适合，标本溶血、黄疸、乳糜血、存在凝集等干扰，有必要重新采集后再测试;若凝集标本混匀不佳、出现冷凝集，则进一步混匀、温浴后再行检测。由于标本原因造成的误差属实验前质量控制，本次统计占7%，因此在接受标本时应仔细观察，严格把关。(2)仪器复检：仪器不出结果、各类细胞计数超出规定范围、与既往结果有较大波动，在同临床联系，询问病情变化的同时进行复测。(3)通过制片、染色，在显微镜下对检测结果评估：检查RBC的形态、染色有无异常;有无寄生虫;PLT、WBC形态有无异常;有无幼稚细胞、异常细胞等，还可根据血片中细胞的分布、比例，估计仪器给出的WBC和PLT计数是否与显微镜下看到的大致相符，从而纠正由于仪器识别能力的限制或故障造成的误差。(4)人工计数各类细胞：仪器计数结果超出规定范围、与镜下估算有较大出入、仪器提示存在细胞碎片或有核红细胞、直方图不规则，需进行人工血细胞计数。(5)镜下WBC分类计数：凡符合显微镜分类计数的标本必须进行人工镜检，分类计数，重点分析仪器旗标提示的异常部分。
2.2 复检规则的效果评价 对执行复检规则后的2400例标本进行统计分析，需后续处理的情况见表2，检测结果正常可直接发出报告1550例，占64.6%。而需要显微镜人工WBC分类计数的占27.9%，这与美国CAP组织的实验室改进计划中血液分析仪血涂片的复检率相近[5]。表2 血常规复检情况分析
对实行标准后的每份标本仪器检测结果、旗标提示和显微镜复检结果进行统计分析，若符合复检规则且涂片发现有阳性结果，那么该标本视为“真阳性”;若符合复检规则而涂片中没有发现任何阳性结果，那么该标本视为“假阳性”; 若不符合复检规则而涂片中发现了阳性结果，那么该标本视为“假阴性”; 若不符合复检规则且涂片又是阴性结果，那么该标本视为“真阴性”。统计结果： 真阳性16.3%，真阴性64.6%，假阳性16.8%，假阴性2.4%。复检率=真阳性+假阳性/样本数。表3 2400份标本符合标准与血涂片显微镜镜检比较情况
3 讨论
制定复检规则的目的在于尽量减少后续工作量且避免假阴性。在规则控制下，仪器仍有2.4%漏诊率，通过检测的2400份标本对假阴性率进行评估：其2.4%的假阴性率低于国际血液学复检专家组制订5%的最大允许范围[2]，分析假阴性标本的分布情况，主要为单核细胞和嗜酸、嗜碱粒细胞的比值增高(29.8%)、PLT形态异常(33.6%)、WBC形态结构异常(7.9%)、RBC形态结构异常(19.3%)、幼稚细胞(4.8%)、异性淋巴细胞(4.6%)。为了避免假阴性，除急待仪器性能的提高，复检规则的进一步完善，提高检验人员的素质，与临床沟通，听取临床反馈意见，了解患者病情，做好复检复片工作是必不可少的。
现在，许多血细胞分析仪的生产厂家为了减少漏诊，把仪器的灵敏度调试的比较高，我室的ABX PENTRA60分析仪灵敏度相对比较高，然而过高的灵敏度引起可疑旗标的增加，使复检复片率居高不下，这次统计真阳性率占16.3%，而假阳性也高达16.8%，如果我们按照出现可疑旗标就复检的标准，我们每天的复检率在50%以上，如此高的复检率一般实验室是很难安排人员来完成的，通过复检规则的制定，我们现在的复检率可以控制在33.0%，这个比例与其他文献报道基本相符[6],大大提高了工作效率，也确保了那些真正需要复检标本的质量。
按照复检规则，所选2400例样本的复片率为27.8%，对仪器检测结果和镜检分类结果进行统计分析，二者符合率超过75%，换言之，得益于仪器精度和准确度的提高，这部分样本的复检复片只是一个验证过程，如果浏览血片未见明显异常细胞，可以不进行分类计数，只报告分类未见异常[7],这样既可以保证结果的准确性，又提高了工作效率，国外也提倡采用浏览血片方式取代传统的白细胞百分比分类计数。对于异常和幼稚细胞的检出，相对集中于仪器的白细胞旗标提示以及散点图和直方图所提供的信息，而这部分样本最是真正需要我们认真对待的。
目前各级医院普遍存在仅靠仪器检测结果而忽视显微镜检查的现象，异常血细胞被漏诊时有发生，导致误诊和不合理的治疗。因此各临床实验室有必要根据自己所用仪器的特点制定出合理的血细胞复检和显微镜复片的规则。
【参考文献】
1 中华医学会检验分会全国血液学复检专家小组.全国血液学复检专家小组工作会议记要暨血细胞自动技术复检标准释义.中华检验医学杂志，2007，30(4)：380-382.
2 Barnes PW,McFadden SL,Machin SJ,et al.The Lnternational Group for Hematology Review:suggested criteria for action following automated CBC and WBC diferential analysis.LabHematol,2005,11(1):83-90.
3 江虹，曾婷婷，曾素根，等.自动全血细胞分析和白细胞分类复检规则的制定及评价.中华检验医学杂志，2007，30(9)：996-1000.
4 Michael WS.The atypical lymphocyte.International Pediatrics,2003,18(1):10-22.
5 Noris DA, Walsh M, wilkin son D, et al.Laboratory Prodnctivity and the rate of manual peripheral blood smear review: a College of American Pathologists Q Probes study of 95,141 complete blood count determinations performed in 263 institutions.Arch Pathol Lab Med,2001,130(5):596-601.
6 孙芾，王厚芳，于俊峰，等.血细胞显微镜复检标准的制定及临床应用.中华检验学杂志，2005，28(2)：155-157.
7 朱晓辉，何菊英，朱忠勇.应用血液分析仪后复查血片内容有利方法及程序.中华检验医学杂志，2003，26(12)：785-787.