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首页医源资料库在线期刊中华现代中西医杂志2010年第8卷第1期

怡欣乐口服液安全性评价及升高外周血白细胞的实验研究

来源:中华现代中西医杂志
摘要:【摘要】目的研究中药制剂怡欣乐口服液(YXL)的安全性评价和升高外周白细胞的作用机制。方法按照新药审批办法有关规定,分别运用小鼠和大鼠进行了YXL急性和长期毒性实验。分别采用环磷酰胺、苯中毒及60Co-γ辐射等因素诱发小鼠外周血白细胞总数低下运动模型,观察YXL对模型小鼠外周血白细胞数的影响。结果以最大浓......

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【摘要】  目的 研究中药制剂怡欣乐口服液(YXL)的安全性评价和升高外周白细胞的作用机制。方法 按照新药审批办法有关规定,分别运用小鼠和大鼠进行了YXL急性和长期毒性实验;分别采用环磷酰胺、苯中毒及60Co-γ辐射等因素诱发小鼠外周血白细胞总数低下运动模型,观察YXL对模型小鼠外周血白细胞数的影响。结果 以最大浓度、最大体积的YXL给小鼠口服灌胃,每天1次,最大耐受量为35.6g/kg。大鼠给药60天后,高剂量组白蛋白,高、中剂量组总胆红素明显下降,与对照组比较差异有显著性;高、中剂量组的总胆固醇有下降趋势,但与对照组比较差异无显著性;停止给药15天,各项指标均在正常值范围内与对照组比较无差异;给予YXL 3g/kg、2g/kg和1g/kg 3个剂量的药物干预后,3个给药剂量均能提高以上3种诱因所致小鼠外周血白细胞总数低下。结论 YXL以灌胃给药测得最大耐受量为35.6g/kg,接近临床剂量的200倍;长期毒性的各项指标均在正常值范围内与对照组比较无差异; YXL具有明显升高血白细胞作用。本实验YXL临床运用提供了安全性评价依据和药效学方面的实验依据。

【关键词】  怡欣乐口服液;安全性;白细胞;大鼠;小鼠

Safety evaluation of Yixinle oral liquid and experimental research of its role in increasing WBC of peripheral blood

  WU Qu-jing ,SHI Shi-de ,ZHOU Min-wei.Department of Basic Medicine,Guangzhou University of Chinese Medicine School,Guangzhou 510010,China

   Objective To evaluate the safety of YXL oral liquid and to study its mechanism in increasing the WBC in peripheral blood.Method According to the regulation for new drug application, mice and rats were applied for the acute and long term toxic experiment; dynamic low peripheral blood WBC in mouse and rat model were build up by toxic treatment of cyclophosphamide, benzene, and the 60Co-γray irradiation, then the effect on WBC in peripheral blood were observed.Result YXL oral liquid was feed to the mice by gastric perfusion with the maximum concentration and volume, once a day, maximally tolerated dose is 35.6 g/kg. The albumin in the high dosage group and the total bilirubin in the high and medium dosage decreased obviously in rat after the drug was feed for 60 days, which had obvious difference with the control group. The total cholesterol in the high and medium had the trend of decrease, but didn’t have obvious difference with the control group. The treatment of all three different dosage, YXL 3 g/kg,2 g/kg and 1 g/kg could improve the low WBC in peripheral blood of the 3 mouse models.Conclusion The maximum tolerance dosage of YXL oral liquid by gastric perfusion is 35. 6 g/kg, which was about 200 times than the clinical dosage. All the indexes for the long term toxicity are in the normal range which had no difference compared with the control group. YXL has an obvious effect in increasing the amount of WBC. This research provided experimental evidence for the safety evaluation and pharmacodynamics in the clinical application of YXL.

  [Key words] Yixinle oral liquid;safety;white blood cell;rat;mouse

  YXL是由我们在补肾填精,养心安神治法指导下,选用西洋参、冬虫夏草、阿胶、何首乌等药物,采用现代制药技术研制而成的中药复方制剂。为了研究YXL在用药安全性评价和升高外周白细胞方面的机制,我们按新药审批办法有关规定,进行了YXL急性毒性和长期毒性及升高外周白细胞方面实验研究,现将结果报道如下。

  1 YXL毒理学研究

  1.1 材料与方法

  1.1.1 材料

  1.1.1.1 药物及试剂 YXL,由广州军区总医院药剂科制剂中心提供(每1ml相当于生药1g),批号:080618;环磷酰胺(CTX),粉针剂,200mg/瓶,上海华联制药有限公司产品,批号:070318;苯,纯度为99.5%,北京北化精细化学品有限责任公司,批号:080618。

  1.1.1.2 仪器 血液分析仪,MZK-5108K,日本光电工业株式会社产品;60Co远距离治疗机,型号:GWXJ80,中国核动力研究设计院产品。

  1.1.1.3 动物 昆明种小鼠,SPF级,♀♂各半,体重(20±2) g,Wisar大白鼠,SPF级♀♂各半,体重(100±10) g,由广州军区总医院实验动物中心提供,合格证号:粤检证字第2006B020号。

  1.1.1.4 统计方法 实验数据应用SPSS软件进行方差分析,F检验。各组间均值比较采用q检验。结果用均数±标准差(x±s)表示,显著性水准及结果判断按通用的假设检验标准。

  1.1.2 方法

  1.1.2.1 小鼠急性毒性试验 取小鼠20只,♀♂各半,于实验前一天隔夜禁食不禁水,在(20±2)°C的条件下, ig给药。药物浓度为1g/ml(最大浓度), ig体积为0.5ml/20g体重(最大体积),观察7天。

  1.1.2.2 大鼠长期毒性试验 取大鼠80只,按体重随机分组,分为空白对照组、YXL的低、中、高剂量组(为临床的20、40、60倍), ig给药,每天1次,连续60天。最后1次给药24h后,每组取12只大鼠的血液做血液学(红细胞RBC,白细胞WBC,血红蛋白Hb,血小板PC,白细胞分类DC)和血液生物化学(尿素WB,肌酐GREA,葡萄糖GLU,总蛋白TP,总胆红素T-BIC,天门冬氨酸氨基转移酶AST,丙氨酸氨基转移酶ALP,碱性磷酸酶ALT,总胆固醇T-CHO)。取出心、肝、脾、肺、肾、胃、肾上腺、胸腺、子宫、睾丸,精密称重,计算脏器系数和病理检查。15天后,剩余的8只大鼠进行同样实验。

  1.2 结果

  1.2.1 YXL小鼠急性毒性试验 药物浓度为1g/ml(最大浓度), ig体积为0.5ml/20g体重(最大体积),给小鼠灌以YXL 20min后,小鼠略微不适,表现为腹胀、弓背、安静不动等现象, 3 h后恢复正常;在观察期间,全部小鼠存活,剖检,肉眼观察主要脏器,未见心、肝、脾、肺、肾等主要脏器组织明显异常。YXL以灌胃给药测得最大耐受量为45.6g/kg,接近临床剂量的200倍。

  1.2.2 YXL大鼠长期毒性试验

  1.2.2.1 YXL对大鼠体重的影响 大鼠在实验期间活动、饮食、体重与对照组比较无差异。

  1.2.2.2 YXL对大鼠外周血象的影响 连续ig给药60天及停止给药15天检测血液学(红细胞RBC,白细胞WBC,血红蛋白Hb,血小板PC,白细胞分类DC)均在正常值范围内,与对照组比较无差异。

  1.2.2.3 YXL对大鼠血液生化学的影响 连续ig给药60天,尿素、肌酐、葡萄糖、总蛋白、天门冬氨酸转换酶、丙氨酸氨基转换酶、碱性磷酸酶、总胆固醇均在正常值范围内与对照组比较差异无显著性;但高剂量组白蛋白,高、中剂量组的总胆红素明显下降,与对照组比较差异有显著性;高、中剂量组的总胆固醇虽有下降趋势,但与对照组比较差异无显著性。提示:长期服用YXL,对其白蛋白、总胆固醇的代谢有一定作用,停止给药15天检测血液生化学各项指标均在正常值范围内,与对照组比较无差异。

  1.2.2.4 YXL对大鼠脏器系数的影响 连续ig给药60天,每组股动脉放血处死12只,剖检,仔细观察是否有肉眼可见病变,并迅速摘取心、肝、脾、肺、肾、胃、胸腺、肾上腺、子宫、睾丸称重,并折算成100 g体重脏器重量(脏器系数)。结果:仅高剂量组肝脏的脏器系数与对照组比较差异有显著性,停药15天,脏器的脏器系数与对照组比较无差异。

  1.2.2.5 组织学形态检查 光镜检查大鼠的心、肝、脾、肺、肾、胃、胸腺、肾上腺、子宫、睾丸各个脏器未见异常。

  2 YXL升高外周血白细胞研究

  2.1 材料 药物及试剂、仪器、动物均与毒理学研究介绍一致。

  2.2 方法与结果

  2.2.1 YXL升高环磷酰胺诱发小鼠外周血白细胞总数低下作用[1,2] 实验设5组,每组12只,分别为空白对照组;模型对照组;YXL 1.0g/kg组;2.0g/kg组;4.0g/kg组(分别简称为YXL 1、2、3组)。各组均ig给药,1次/d,共13天。YXL 1.0g/kg、2.0g/kg和4.0g/kg 3个剂量组分别以临床成人日剂量(0.10g/kg)的10倍(1.0g/kg)、20倍(2.0g/kg)及40倍(4.0g/kg)。于给药第7天除空白对照组外其余各组均ip环磷酰胺100mg/kg 1次,于第10、13天给药后1h(即ip CTX后第3、6天),尾静脉取血,测定白细胞总数。研究数据均以(x±s)表示,采用组间t测验进行统计学处理。结果:与模型对照组比较,给环磷酰胺后第3天,YXL 1.0g/kg、2.0g/kg及4.0g/kg组白细胞总数均明显升高见表1。表明YXL具有升高免疫抑制剂环磷酰胺诱发小鼠外周血白细胞低下作用。表1 YXL升高环磷酰胺诱发小鼠外周血白细胞总数低下作用注:与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001

  2.2.2 YXL升高苯中毒小鼠外周血白细胞总数作用[3] 实验前预选小鼠尾部取血,测定外周血白细胞总数,取WBC总数值在(10~12)×109/L的小鼠供实验造模之用。小鼠sc 99.5%苯5ml/kg染毒,1次/d,连续5天,取血测定小鼠WBC总数,当小鼠WBC总数降至50%~60%时,被认为造型成功。然后,按小鼠WBC总数均分为4组,每组12只鼠,分别为:苯染毒模型组;YXL 1.0g/kg组;YXL 2.0g/kg组; YXL 4.0g/kg组。各组小鼠继续sc苯染毒5天(共染毒10天),于第7次染毒同时,YXL各组分别每天ig给药1次,连续15天。于第8、15天给药后1h取血测定WBC总数。研究数据均以(x±s)表示,采用组间t检验进行统计学处理。结果:与模型组比较,YXL ig 8天2.0g/kg、4.0g/kg,ig 15天1.0g/kg、2.0g/kg和4.0g/kg组均能明显升高苯中毒小鼠所致外周WBC低下作用。表明YXL具有升高苯中毒小鼠外周血白细胞低下作用。

  2.2.3 YXL升高60Co-γ辐射诱发小鼠外周血白细胞总数低下作用[4] 实验前所有实验鼠尾部取血,测定外周血白细胞总数,筛选WBC总数值在(10~12)×109/L的小鼠供实验造型之用。小鼠随机分为5组,每组12只,分别为:空白对照组;60Co-γ损伤模型组;YXL 1.0g/kg组;YXL 2.0g/kg组;YXL 4.0g/kg组。除空白对照组外其余各组给予1次 60Co-γ全身照射,剂量480Rad/8min(59Rad/min),距离为80cm。照射后当天ig给予YXL,1次/d,连续21天,每周称重1次,调节剂量。各组均于照射7、14、21天给药后1h尾静脉取血测定白细胞总数。研究数据均以(x±s)表示,采用组间t检验进行统计学处理。结果:与模型组比较,照射(给药)7天,YXL 4.0g/kg组白细胞总数明显升高;给药14天,4.0g/kg及2.0g/kg组白细胞总数明显升高;给药21天,4.0g/kg、2.0g/kg及1.0g/kg组白细胞总数均明显升高。

  3 讨论

  中医学认为慢性疲劳综合征属于“虚劳”病范畴,而且慢性疲劳综合征更是亚健康状态的典型临床表现之一,研发中药新药制剂治疗慢性疲劳综合征,具有非常重要的临床意义。 YXL临床上用于慢性疲劳综合征的治疗,取得了比较满意的疗效,同时获得国家发明专利和广州军区联勤部卫生部医院制剂批准文号。本实验结果显示,YXL的急性毒性和长期毒性实验,以最大浓度、最大体积的YXL给小鼠口服灌胃,1次/d,最大耐受量为45.6g/kg。给药60天后,高剂量组白蛋白,高、中剂量组总胆红素明显下降,与对照组比较差异有显著性;高、中剂量组的总胆固醇有下降趋势,但与对照组比较差异无显著性;停止给药15天,各项指标均在正常值范围内与对照组比较差异无显著性,为YXL临床应用提供了毒理学依据。

  环磷酰胺是临床常用的化疗药,但其在杀伤癌细胞的同时,也对人体产生不同程度的毒副作用,其中主要有骨髓抑制和免疫功能低下,造成白细胞减少症。从本研究结果可以看出,YXL具有升高免疫抑制剂环磷酰胺诱发小鼠白细胞低下作用。据资料报道[5],苯可能直接抑制造血细胞核的分裂,从而影响骨髓的造血功能,对机体造血器官有明显的毒性作用,可使外周血白细胞显著降低。本实验通过苯中毒引起白细胞数降低的小鼠动物模型,证明YXL具有明显的升高白细胞的作用。60Co-γ照射后对正常组织可产生电离辐射损伤,造血系统是电离辐射主要靶器官之一,敏感性高,辐射后容易导致骨髓功能损害,表现为外周血全血象减少,严重者可致骨髓干细胞或基质细胞受损,发生辐射损伤后再障。本研究还表明,YXL对60Co-γ辐射诱发小鼠外周血白细胞总数低下均有明显升高作用。以上三类白细胞减少动物模型实验表明,YXL具有明显升高白细胞减少症模型小鼠白细胞数的作用,为YXL临床推广应用于白细胞减少症提供了实验依据。造血系统的各个环节是相互联系的,药物对于造血系统的作用也可能是多环节和多途径的,YXL进一步的药效与机制探索还在进行中,期待新的发现。

【参考文献】
   1 沈海中,刁东海,赵文明,等.MPS对环磷酰胺作用的小鼠白细胞的影响.首都医学院学报,1994,15(2):103-105.

  2 陈书明,聂向庭,刘桂林,等.鹿茸醇提物对白细胞减少动物模型影响初探.实验动物科学与管理,1999,16(4):32-34.

  3 张强,林立,张凯,等.Ge-132对人工诱导小白鼠苯中毒造血功能影响的初步研究.济宁医学院学报,2000,23(1):42-43.

  4 夏薇,孙文欣,张长征,等.硫普罗宁对放疗所致小鼠白细胞减少的预防及治疗作用.河南肿瘤学杂志,2000,13(4):238-239.

  5 周金黄,李晓玉,荣康泰.免疫药理学进展.北京:中国科学技术出版社,1993,185.

  

作者: 伍趣京1,石世德1,周民伟2 2011-6-29
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