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关键词 癫；自身抗体；儿童
癫是一种常见的神经系统疾病，其发病机制至今尚未完全明确，长期的癫发作可破坏血脑屏障，使中枢神经系统的组织或成分暴露在机体的免疫系统中成为异种抗原而起动免疫反应产生自身抗体［1-3］。本研究对癫患儿血清中的各种自身抗体进行检测，明确其与癫发病的关系。
1 资料与方法
1．1 一般资料
病例组为2003年1—12月青岛市妇幼保健院门诊及住院56例患儿，男30例，女26例；年龄3个月~13岁，平均3岁（2~12岁）；患儿均经小儿科医生根据临床表现、脑电图记录及CT或MIR检查确诊，排除有其他免疫系统疾病。全部患者在入院前均未服用过抗癫药物及其他免疫药物。对照组48例为吉化集团总医院同期的儿科门诊健康体检者，男32例，女16例，年龄6个月~14岁，平均4岁（5~12岁）。
1．2 主要试剂和仪器
谷氨酸受体1肽段由吉尔生化（上海）有限公司合成，纯度为98.3％；羊抗人HRP-IgG购自北京天象邦定联合体；抗谷氨酸受体1抗体（Anti-GluR1）购自华美生物工程公司；ACA试剂盒购自北京福瑞生物工程公司；抗核抗体（ANA）试剂盒购自欧蒙医学诊断有限公司；β2糖蛋白1抗体试剂盒购自北京天象邦定联合体。仪器：全自动酶标仪（Biocell 2010）；荧光显微镜（Olympus CX40RF200）。
1．3 方法
1．3．1 抗GluR1抗体的ELISA检测
将合成的GluR1多肽稀释成20μg/ml，每孔100μl包被于微量反应板上，4℃过夜。洗涤3次，用1.5％牛血清白蛋白封闭，每孔100μl,37℃温育2h。同上洗涤3次，每孔加入100μl待测血清（1：50），同时做阴性和阳性对照，37℃温育1h。每孔加入100μl羊抗人HRP-IgG（1：1500），37℃温育1h，洗涤3次。每孔加OPD底物100μl。37℃10min，加1NH2SO450μl终止反应。在酶标仪492波长处测A值，以P/N值（待测孔A值/阴性对照孔A值）≥2.1判定为阳性。
1．3．2 血清ANA测定
采用间接荧光免疫法，血清抗β2糖蛋白1抗体（anti-β2GP1）、抗心磷脂抗体（ACA）和抗谷氨酸脱羧酶抗体（anti-GAD）抗体测定采用ELISA法。
1．3．3 统计学方法
二组间自身抗体阳性率差异比较采用χ2检验。表1 病例组与对照组自身抗体检测结果比较（略） 注：二组比较*P<0.01
2 结果
病例组与对照组自身抗体检测结果见表1，该结果显示病例组血清中Anti-GluR1、anti-GAD、ANA及ACA阳性率与对照组比较差异有统计学意义（P<0.01），anti-β2GP1的检测结果二组间差异无统计学意义（P>0.05）。
3 讨论
抗核抗体是细胞核成分为靶抗原的自身抗体的总称，是一种在自身免疫性疾病中广泛存在的自身抗体。Verrot等［1］非选择性地研究了163例癫患者，其中25%患者有ANA存在，Peltoly等［2］研究了102例癫患者，发现ANA在患者血清中明显升高，并与使用抗癫药物有相关性。我们对56例癫患儿血清中的ANA进行检测，发现ANA的阳性率占46.4％，比Verrot等的检测结果偏高。
ACA是一种以血小板和内皮细胞膜上带负电荷的心磷脂为靶抗原的自身抗体，是抗磷脂抗体的成分之一。Verrot等［1］的研究中19%的患者血清中IgG型ACA明显增高。Debourdeau［3］非选择性地研究了81例癫患者，其中4%患者ACA阳性，与对照组比较差异无统计学意义。本组ACA的检出率为30.4％，与对照组比较差异有统计学意义。ACA致癫的机制还不完全清楚，可能与神经细胞的磷脂发生交叉反应，从而引起CNS损伤有关［4］。
β2糖蛋白1是分析抗磷脂抗体的重要辅助因子，已有文献报道在抗磷脂综合征患者以及动、静脉血栓等临床表现的患者，其血清中都查出了β2糖蛋白1的抗体［2］。β2糖蛋白1抗体在癫患者血清中的检测近年来也有报道。Debourdeau［3］非选择性地研究了81例癫患者，其中5%患者anti-β2GP1阳性，与对照组比较差异无统计学意义。本试验结果显示该抗体的阳性率为3.6％，与Debourdeau检测结果相近。
anti-GAD与I型糖尿病的关系已有大量报道，二者密切相关，但其与癫之间的关系文献报道［5，6］不一致，本研究结果显示二组血清中anti-GAD比较差异有统计学意义。
GluR1是离子型谷氨酸受体AMPA的一个亚型，它与癫之间的关系已引起人们的关注，Dambinova等［7］测定了难治性癫患者血清中的AMPA谷氨酸受体亚单位的自身抗体，与对照组比较，难治性癫患者表现出强烈的对GluR1亚单位的免疫反应性。另有学者进一步发现，在癫发病的起始阶段以及全身性发作时更容易观察到谷氨酸受体自身抗体水平的升高，而与癫的病因无关［8］。动物实验［9］表明，血清中GluR1自身抗体与EEG棘波和癫样发作关系密切，伴有海马硬化的癫患者的海马齿状回细胞可大量表达AMPA GluR1亚单位蛋白质，同时AMPA亚单位能调解快速谷氨酸突触传递活动，因此，AMPA亚单位的自身抗体可能通过影响谷氨酸介导的兴奋性传递过程发挥致病作用。
本研究是以GluR1受体的241～270位置氨基酸序列人工合成多肽为抗原建立测定人血清中GluR1自身抗体的ELISA方法，临床初步应用发现癫患者血清中GluR1的阳性率为33.9%，明显高于对照组，说明癫患者存在抗GluR1的自身免疫反应。综上所述，癫存在自身免疫倾向，自身免疫反应可能是其发病的病因之一。
参考文献
［1］Verrot D,San-Maroc M,Dravet C,et al.Prevalence and signification of antinuclear and anticardiolipin antibodies in patients with epilepsy［J］.Am J Med,1997,103(1):33-37
［2］ Peltola J,Haapala A,Isojarvi J,et al.Antiphospholipid and antinuclear antibodies in patients with epilepsy or new-onset seizure disorders［J］.Am J Med，2000,109(9):712-717
［3］Debourdeau P,Geerome P,Zammit C,et al.Frequency of anticardiolipin,antinuclear and anti-beta2 GPI antibodies is not increased in unselected epileptic patients:a case -control study［J］.Seizue,2004,13(4):205-207
［4］Liou HH,Wang CR,Chou HC,et al.Anticardiolipin antisera from lupus patients with seizures reduce a GABA receptor-mediated chloride current in snail neurons［J］.Life Sci,1994,54(15):1119-1125
［5］Peltola J,Kulmala P,Isojarvi J,et al.Autoantibodies to glutamic acid decarboxylase in patients with therapy -resistant epilepsy［J］.Neurology,2002,55(1):46-50
［6］陈阳美，胡长林，谢运兰，等.难治性癫痫中谷氨酸脱羧酶抗体的测定［J］.中风与神经疾病杂志,2003,20(6):504-506
［7］Dambinova SA,Lzykenova GA,Burov SV,et al.The presence of autoantibodies to N-terminus domain of GluR1 Subunit of AMPA receptor in the blood serum of patients with epilepsy［J］.J Neurol Sci,1997,152(1):93-97
［8］Odinak MM,Dyskin DE,Toropoy IA,et al.The diagnosis of epilepsy by using blood analysis for the content of autoantibodies to glutamate neuroreceptors［J］.Zh Nevropatol Psikhiatr Im S S Korsakova,1996,96(2):45-48
［9］Dambinova SA,Granstrem OK,Tourov A,et al.Monitoring of brain apiking activity and autoantibodies to N-terminus domain of GluR1 Subunit of AMPA receptors in blood serum of rats with cobalt-induced epilesy［J］.J Neurochem,1998,71(5):2088-2093
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大连大学医学院
青岛市妇女儿童保健中心