氨茶碱对哮喘缓解期患者B淋巴细胞白介素-13的影响

　　关键词  氨茶碱；B淋巴细胞；白介素-13；哮喘，缓解期

    支气管哮喘是由多种细胞及细胞因子参与形成的一种气道慢性炎症性疾病，对哮喘患者B淋巴细胞及其产生的白介素-13（IL-13）的研究尚少；氨茶碱是治疗哮喘的常用药，但它对细胞因子的影响如何，目前报道较少，我们初步探讨了氨茶碱对哮喘缓解期患者B淋巴细胞IL-13的影响。

　　1  对象与方法

　　1．1  对象  支气管哮喘组，选择吉首大学附属医院门诊2005年3—5月16例支气管哮喘缓解期患者，诊断符合2003年中华医学会呼吸病学分会哮喘学组的诊断标准［1］，年龄15～41岁，病史6～11年，男10例，女6例，所选病例采血前2周未使用皮质激素、大环内酯类、氨茶碱等药物，且均排除肿瘤，自身免疫性疾病等。对照组，健康体检者16例，男10例，女6例，年龄16～41岁，来自吉首大学统招及成人教育学生。二组性别、年龄比较差异无统计学意义。

　　1．2  方法

　　1．2．1  人外周血B淋巴细胞的分离及培养  16例支气管哮喘缓解期患者及16例健康体检者各取静脉血10ml（患者知情同意），肝素抗疑，应用Ficoll分离外周血单个核细胞，用尼龙毛分离B淋巴细胞，将分离所得B淋巴细胞用Hank’s液洗2次，再用RPMI 1640液洗1次，于所得细胞中加入适量RPMI 1640培养液，调整细胞数至1×106/ml, 健康体检者的B淋巴细胞不加氨茶碱。每个哮喘患者的B淋巴细胞分成4份标本，1份标本不加氨茶碱，另3份标本分别加入10μg/ml,30μg/ml,90μg/ml的氨茶碱，加入PHA 和LPS至终浓度为200μg/ml，置培养瓶中，CO2培养箱内培养，24h收集细胞培养上清液，置-20℃冰箱保存，一次溶解后测定。

　　1．2．2  IL-13的检测  上清液IL-13采用ELISA法检测，试剂盒购于北京晶美生物技术有限公司，检测过程按照试剂盒说明书操作，主要步骤：①酶标的生物素抗体；②加入酶的底物发生显色反应；③酶标仪450nm读取吸光度；④通过标准品曲线计算样品的IL-13的含量。

　　1.2.3  统计学方法  所有数据经SAS 6.12软件统计处理，计量资料以±s表示,组间比较采用t检验，组内比较采用方差分析。

　　表1  不同浓度氨茶碱在体外对哮喘缓解期患者B淋巴细胞IL-13的影响　略

　　2  结果

　　哮喘缓解期患者外周血B淋巴细胞IL-13的水平［（20.52±1.97）ng/L］明显高于健康体检组［（13.31±2.42）ng/L］，二组间比较差异有统计学意义（P<0.05）；10μg/ml的氨茶碱对哮喘缓解期患者外周血B淋巴细胞IL-13无明显影响，但30μg/ml和90μg/ml的氨茶碱则明显抑制哮喘缓解期患者外周血B淋巴细胞IL-13的释放（P均<0.05）。不同浓度氨茶碱在体外对哮喘缓解期患者B淋巴细胞IL-13的影响，见表1。

　　3  讨论

　　支气管哮喘是一种发病机制十分复杂的慢性气道炎症性疾病，IL-13在哮喘的发病中起重要作用。目前认为，IL-13可能通过下列机制参与支气管哮喘的病理生理过程［2］:①诱导细胞内皮表达细胞粘附分子，选择性诱导嗜酸性粒细胞在支气管粘膜层聚集；②哮喘患者的粘膜上皮可检测到高亲和力IgE受体，IL-13可能在支气管粘膜局部诱导IgE分泌。③IL-13与受体结合后，促使转录信号磷酸化和转录基因的激活，从而产生大量的酶，加速支气管内的脂质氧化产生炎症介质（如白三烯），促进炎症反应及过敏反应的发生发展［3］。诸留珍等［4］研究认为儿童支气管哮喘急性加重期、缓解期患者外周血单个核细胞培养上清液中IL-13明显高于正常儿童，并且急性加重期比缓解期更高。我们的研究表明哮喘缓解期患者外周血B淋巴细胞培养上清液IL-13水平高于正常人。IL-13能活化B淋巴细胞，并且和腺苷相互作用，腺苷能增加IL-13的分泌，刺激肥大细胞释放组织胺、花生四烯酸、白三烯等炎症介质，引发气管变应性反应和气管高反应性，同时，IL-13又可以增强腺苷对支气管的炎症反应和损伤［5］。临床上治疗支气管哮喘就是用茶碱结合腺苷使之失活，来减轻这些变应反应。由于腺苷和IL-13的相互关系，所以为我们用氨茶碱来影响哮喘患者B淋巴细胞IL-13的水平提供了契机。我们的研究表明，30μg/ml,90μg/ml的氨茶碱能抑制哮喘缓解期患者外周血B淋巴细胞IL-13的释放，但10μg/ml的氨茶碱则没有明显影响，其机制如何，尚不清楚。IL-13在哮喘等慢性气道炎症性疾病中是增高的，抑制IL-13的释放有助于减轻气道炎症反应，所以进一步探讨氨茶碱对IL-13的影响，能为临床上进一步合理使用氨茶碱提供依据。

　　4  参考文献
 
　　［1］  中华医学会呼吸病学会哮喘学组.支气管哮喘防治指南［J］.中华结核和呼吸杂志，2003，26（2）：132-138
 
　　［2］  徐勤枝，丁彩民.IL-13与支气管哮喘［J］.国外医学免疫学分册，2001，24（3）：156-158
 
　　［3］  Howard TD,Koppelman GH,XU J,et al.Gene-gene interaction in asthma;IL4RA and IL13 in a Dutch population with asthma［J］.Am J Hum Genet,2002,70(1):230-236
 
　　［4］  诸留珍，李晓南.支气管哮喘儿童PBMC培养上清液IL-13水平变化及意义［J］.南京医科大学学报（自然科学版），2004，24（3）：306-308
 
　　［5］  Linden J.Molecular approach to adenosine recepters;receptor-mediated mechanisms of tissue protection［J］.Annu Rev Pharmacol Toxicol，2001,41:775-787

　　湖南省吉首市，吉首大学医学院