共有峰率和变异峰率双指标序列法鉴别千斤拔

【摘要】  目的 以共有峰率和变异峰率双指标序列法分析不同种千斤拔指纹图谱。方法 采用石油醚、氯仿、95 %乙醇、水等四种溶剂分别提取千斤拔药材不同极性部位成分，测定其紫外、红外指纹图谱，研究各个样品之间的异同。结果 该方法可以区别出不同种千斤拔药材。结论 该方法便于两个及以上样品之间的比较，应用范围广，为千斤拔药材质量评价提供了简便的方法。

【关键词】  共有峰率； 变异峰率； 双指标序列； 蔓性千斤拔； 大叶千斤拔； 球穗千斤拔； 指纹图谱

Identification of Radix Moghaniae by Dualindex of Common and Variant Peak Ratio Sequence Analysis Method

    REN Chaoqin,LIU Yuan,YUAN Wei,DAI Xianzhi

    (Ethnic Pharmaceutical Institute of Southwest University for Nationalities,Chengdu 610041,China)

    【Abstract】  Objective:To analyze the fingerprint spectra of Radix moghaniae by the method of common and variant peak ratio in IR﹑UV and dualindex sequence analysis.Methods:Petroleum ether,chloroform,95%ethanol and water were used to distill Radix moghaniae chemical constituents which are different polarities,and the differences among those samples were determinated by the way of analyzing the fingerprint spectra.Results:The method could distinguish different species of Radix moghaniae.Conclusions:The method is convenient for comparing two or more than two samples,and has a large range of application.At the same time,it provides a simple and convenient method to estimate the quality of Radix moghaniae.

    【Key words】  common peak ratio； variant peak ratio； dualindexsequence；Moghania philippinensis(Merr.et Rolfe)Li； M.macrophylla(Willd.)O.Kuntze； M.strobilifera(Linn.)Ait； fingerprint spectra

    常见妇科疾病以经前期综合征、阴道炎、乳腺增生等最为多见，尤其是阴道炎，严重影响患者的生活质量。目前，市面上疗效和销量都较好的妇科千金片，为妇科炎症首选药物。中药千斤拔为千金片的君药，其处方：千斤拔、金樱子根、党参、当归等； 功效：补血、补气、消炎、祛湿、强腰通络，用于妇女急慢性盆腔炎、子宫内膜炎、宫颈炎、白带增多等病症。

    《中华人民共和国药典》2005版·一部附录中收载千斤拔为豆科植物蔓性千斤拔（Moghania philippinensis(Merr.et Rolfei)Li、大叶千斤拔（Moghania macrophylla）(Willd.)O.Kuntze或绣毛千斤拔（Moghania ferruginea）(Wall.ex Benth.)Li.的干燥根［1］，各地方药用的还有球穗千斤拔Moghania strobilifera(Linn.)Ait等品种。主要用于治疗风湿痹痛、腰腿痛、风湿关节炎、腰肌劳损、阳痿、遗精、妇科病、乳房疾病等病症［2］； 蔓性千斤拔、大叶千斤拔分布较广，主产于江西、福建、台湾、湖北、湖南、广西、广东、四川等省区。球穗千斤拔未形成大宗商品，但可见到混杂于蔓性千斤拔的商品药材中［3］。部分千斤拔有地方用药史，其中球穗千斤拔全株可药用，有止咳祛痰、清热除湿、补虚、壮筋骨之效，大叶千斤拔、蔓性千斤拔根供药用，有祛风活血、强腰壮骨之效。

    文献报道千斤拔含有黄酮、多糖、生物碱、β黄酮等多种成分［2］。由于光谱分析操作简便，稳定性好，测试速度快和测试成本低而被广泛应用。红外、紫外指纹图谱用于中药质量控制具有良好的发展趋势。由于单溶剂提取物紫外指纹图谱鉴别不能全面反映提取物所含的全部成分，作者分别用不同极性的四种溶液提取样品，体现指纹图谱的整体性。在分析方面则用共有峰率和变异峰率双指标序列法，并利用样品的整体信息来建立多维指标空间鉴别样品。本文首次利用紫外、红外光谱的指纹性，用共有峰率和变异峰率双指标序列法分析三种千斤拔不同提取液的紫外、红外指纹图谱，为千斤拔药材的鉴别提供了专属性方法。

    1  实验部分

    1.1  仪器与试药、样品

    UV760CRT紫外分光光度仪（上海分析仪器厂）； 傅里叶变换红外光谱仪IR200（美国热电公司）； KQ250B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）； 水为重蒸水； 经刘圆副教授鉴定分别为蔓性千斤拔Moghania philippinensis(Merr.et Rolfe)Li、大叶千斤拔Moghania macrophylla(Willd.)O.Kuntze、球穗千斤拔Moghania strobilifera(Linn.)Ait.的干燥根、茎、叶（见表1）； 其他试剂均为分析纯。表1  千斤拔药材来源

    1.2  样品的制备

    1.2.1  紫外供试溶液制备  将千斤拔药材样品在45℃烘干2 h，粉碎过24目筛。精密称取药材粉0.250 g，置于50 ml具塞锥形瓶中，精密加入20.00 ml石油醚，超声处理1 h,过滤，用石油醚洗涤滤渣，合并滤液，定容至25 ml，作为供试品溶液； 挥干滤渣中残留的石油醚，精密加入20.00 ml氯仿，超声处理1 h，过滤，用氯仿洗涤滤渣，合并滤液，定容至25 ml，作为供试品液； 95 % 乙醇、水组供试品制法同上。以对应的溶剂为参比溶液进行紫外指纹图谱测定［4］。

    1.2.2  红外供试溶液制备  红外供试品制法同“2.2.1”，分为石油醚组、氯仿组、95 %乙醇组、水组供试品。KBr粉末直接压片，取少量红外供试品溶液滴于KBr片上，直接放入傅里叶变换红外光谱仪中测定。

    1.3  最佳提取方法和时间

    实验结果表明：采用超声提取法，石油醚、氯仿、95 % 乙醇和水在1 h均可达到最大且稳定的提取率。

    1.4  稳定性实验

    实验结果表明：4种溶剂提取液在0 ℃～4 ℃保存24 h。

    1.5  重复性试验

    在相同条件下，平行测定3份石油醚提取物的紫外指纹图谱、红外指纹图谱具有良好的重复性。

    1.6  千斤拔指纹图谱及数据

    千斤拔药材不同提取物的指纹图谱见图1，紫外数据见表2、3、4，红外数据见表5、6、7，结果分析见表8. 表2  不同种千斤拔药材根部位紫外指纹图谱共有峰的识别结果表3  不同种千斤拔药材茎部位紫外指纹图谱共有峰的识别结果表4  不同种千斤拔药材叶部位紫外指纹图谱共有峰的识别结果表5  不同种千斤拔药材根部位红外指纹图谱共有峰的识别结果表6  不同种千斤拔药材茎部位红外指纹图谱共有峰的识别结果表7  不同种千斤拔药材叶部位红外指纹图谱共有峰的识别结果

    1.7  千斤拔不同提取物共有峰率和变异峰率双指标序列分析结果

    利用共有峰率和变异峰率双指标序列分析法［4］对上述3个不同种的千斤拔4种提取物进行了相似性研究。

    3种千斤拔样品的最近似关系组及分析，结果为：

    紫外S15:S17(42.6； 69.6,65.2)，S14:S18(52； 42.3,50)，S16:S21(60.9； 21.7,17.4)

    红外S17:S12(72.9； 2.9,34.3)，S13:S18(71.7； 9.1,30.3)，S21:S16(74.4； 21.9,12.5)

    在3个不同种的千斤拔样品紫外测定中，以S1（大叶千斤拔的根）和S4（蔓性千斤拔的根），以S2和S8、S3和S9（大叶和球穗千斤拔的茎和叶）两个样品的相似性最高； 在红外测定中，以S2（大叶千斤拔的茎）和S5（蔓性千斤拔的茎），以S1和S7、S3和S9（大叶和球穗千斤拔的根和叶）两个样品的相似性最高。说明大叶千斤拔具有和蔓性、秋穗千斤拔相近的性质，但是蔓性和球穗千斤拔的性质并不相近。

    采用本方法测定结果相似性也最高，可以说明该方法具有一定的科学性和合理性。表8  不同种千斤拔共有峰率和变异峰率双指标序列分析结果*表示该序列以S7为标准，计算其他样品指纹图谱共有峰率和变异峰率，该序列表示S7与S4的共有峰率为38.6 %，其中S7的变异峰率为81.8 %，S19的变异峰率为77.3 %。

    2  讨论

    2.1  本文采用氯仿、石油醚、95 %乙醇和水为提取溶媒，提取3个不同种的千斤拔药材根、茎、叶三个不同药用部位，利用共有峰率和变异峰率双指标序列分析法对四种提取物进行分析。不同种千斤拔的石油醚提取物图谱之间差别不大，水提取物差别较大，分别分析专属性不强； 最后采用四种提取物综合分析，所得结果专属性强，准确性高。

    2.2  本实验采用超声提取法。该法操作简单，对实验条件要求比较低，且目前超声提取方法广泛应用于药材中成分的提取，故实验的可重复性较强。

    2.3  共有峰率和变异峰率双指标序列分析法分析紫外指纹图谱［46］中常采用以全波长扫描所得到吸收峰作为数据的分析源。然而在紫外光谱中随着阶数的增高，扫描的吸收峰随之增多，进而增加了分析的时间，故本文选择二阶导数法进行扫描，可以得到满意的结果，利于各个品种之间的比较。

    2.4  本文借助红外光谱的指纹性，用共有峰率和变异峰率双指标序列法研究了不同种千斤拔的不同药用部位的红外指纹图谱，可以区分不同种的千斤拔，得到较满意的结果。该方法是一种科学合理的指纹图谱分析方法，具有快速、简便、准确等特点，有望成为药材快速鉴别的一种新方法。

【参考文献】
  ［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典2005版一部［S］.北京:化学工业出版社,2005:附录22.

［2］ 宋立人,洪恂,丁续亮,等.现代中药学大辞典［S］.北京:人民卫生出版社，2001:195.

［3］ 饶伟文,黄建楷,温志芳,等.千斤拔的品种调查与质量研究［J］.中草药,1999,30(3):219222.

［4］ 袁久荣,岳邱华,邹华彬,等.丹皮紫外指纹图谱共有峰率和变异率双指标序列分析［J］.世界科学技术—中医药现代化，2004,6(6):3135.

［5］ 邹华彬,袁久荣,杜爱琴,等.甘草氯仿提取物红外指纹图谱及双指标序列分析法［J］.中国中药杂志，2005,30(1):1620.

［6］ 庞涛涛,杜黎明.苦丁茶红外指纹图谱共有峰率和变异峰率双指标序列分析法［J］.光谱学与光谱分析，2007.27(3):486489.