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【摘要】 目的 探讨泌尿系细菌L型感染情况及其对常用抗生素的耐药性，为临床诊治提供科学依据。方法 用改良Kagan培养基对临床疑为泌尿系感染者的尿液分离培养，并对分离获得的细菌L型进行药物敏感试验。结果 泌尿系L型细菌感染率为42.17%(35/83)，其中大肠埃希氏菌L型占37.14%(13/35)。分离出的细菌L型对丁胺卡那霉素、庆大霉素、诺氟沙星、环丙沙星、青霉素G等耐药性较高。结论 临床对疑为泌尿系感染者应同时检测细菌及其L型，并根据药敏试验结果联合用药，以杀菌并阻止其变为L型。
【关键词】 泌尿系感染 细菌L型 药物敏感试验
细菌L型只有在高渗环境中才能存活和增殖，在普通培养基上不能生长或生长不良；临床对疑为泌尿系感染的患者采用普通培养基不能分离L型病原菌，导致漏诊或误诊[13]。此外，由于L型细菌的细胞壁缺陷，因而对作用于细胞壁的抗生素呈现不同程度的耐药，给临床合理用药造成困难。本文对我院83例泌尿系感染患者进行细菌L型分离鉴定，并测定其对常用抗生素的耐药性。
1 材料与方法
1.1 菌株来源 2005年11月至2006年5月我院住院及门诊患者尿培养为阴性，但有尿频、尿急、尿痛等刺激症状，且伴发低热、乏力、腰痛，临床疑为泌尿系感染者83例，其中男37例，女46例。
1.2 试剂 用L型平板，改良Kagan培养基：蛋白胨20g、牛肉膏6g、氯化钠45g、琼脂10g、蒸馏水800mL，加热溶解，调整pH至7.4，1.05kg/cm2 15min灭菌后冷至56℃，加入灭活人血浆200mL，混匀倾注平板。
1.3 检验方法 嘱患者清洗外阴，取中段尿约5mL送检，2000r/min离心5min，倒掉上清液，将沉渣接种于血平板和L型平板各一个，血平板置37℃、5%(体积分数)CO2培养箱中培养，低倍显微镜观察。若在培养基上观察到油煎蛋或G型菌落时，即将培养物作直接涂片，革兰氏染色，细胞壁染色。有完整细胞壁的细菌胞浆不着色，周边呈紫色；细胞壁缺陷菌体的胞浆有不同程度的浓染，后者用L型平板传代，并用药物纸片扩散法(KB法)对10种常用抗生素的最低抑菌浓度进行分析。抗生素纸片包括丁胺卡那霉素、庆大霉素、诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、头孢唑啉、头孢三嗪、头孢哌酮、红霉素、青霉素G。采用铜绿假单胞菌ATCC27853、金黄色葡萄球菌ATCC29212进行质控，结果判断参照美国临床标准委员会(NCCLS)标准进行。
2 结 果
2.1 泌尿系感染细菌L型分离鉴定结果 从83例泌尿系感染患者尿液中分离培养出细菌46例，检出率为55.42%；其中细菌型11例，L型13例，细菌和L型混合存在22例，故泌尿系L型细菌感染率为42.17%(35/83)(表1)。表1 35例L型细菌种类分布(株数)
2.2 泌尿系感染细菌L型的药敏结果 分离出的L型细菌对丁胺卡那霉素、庆大霉素、诺氟沙星、环丙沙星、青霉素G等耐药率较高；对头孢唑啉、头孢三嗪、头孢哌酮及红霉素等耐药率偏低，多数菌株敏感(表2)。
3 讨 论
细菌、真菌、放线菌、螺旋体、立克次体和衣原体等病原微生物进入机体后，在抗生素、抗体、补体和溶菌酶等体内外因素的作用下可被诱导为L型。细菌成为L型后，由于细胞壁缺失使抗原结构变化，致使由细菌型诱导的体液或细胞免疫不能有效地作用于L型，逃避机体免疫系统的攻击，形成免疫耐受状态而在宿主体内存活，此时泌尿生殖道感染的症状可暂时缓解或消失。一旦阻止细胞壁合成的因素消除，如停止用药，其仍可返祖为原菌，重新对人体致病，引起临床症状。因此，细菌L型的存在是泌尿生殖道感染反复发作、迁延不愈的重要原因[13]。
细菌L型表面抗原成分丢失，使生化反应能力减弱，在普通等渗培养基上生长不良或不生长，是泌尿系感染者细菌检出率低的主要原因。本文收集83例疑为泌尿系感染者的中段尿标本，用普通培养基和L型平板同时培养，结果细菌的检出率为55.42%，其中L型的检出率为42.17%。如不使用L型平板，其检出率仅为13.25%。因此，临床上非常有必要对疑为泌尿系感染者进行L型细菌培养。本组35例患者尿液中分离出L型细菌，其中大肠杆菌13例，占37.14%，居于首位。关于大肠杆菌对泌尿系的致病，以往文献报道其侵入尿道上皮可导致菌尿症，侵入膀胱或肾脏黏膜可引起细胞死亡，也可致膀胱炎或肾盂肾炎[4]。表2 泌尿系感染L型细菌耐药结
抗生素的广泛应用是诱导细菌L型形成的重要因素，患者有可能开始仅为普通细菌感染，经抗生素治疗后形成L型，导致细菌型和L型混合存在。如本组资料46例患者尿培养分离出细菌，其中细菌和L型混合存在者22例，占47.83%。由于L型细菌的细胞壁存在不同程度的缺陷，其药物敏感性与原菌多存在差异，因此临床治疗用药，不仅要考虑原细菌的药敏，也要考虑L型的药敏。我们采用KB法对分离获得的L型菌株进行药敏试验，发现其对作用于细胞壁的头孢唑啉、头孢三嗪、头孢哌酮等以及作用于核酸和蛋白质合成的红霉素等较为敏感，而对抑制肽聚糖合成的青霉素、β内酰胺抗生素等耐药性较高。有学者认为头孢菌素除可影响细胞壁的合成外，对细胞膜也有一定作用；也有学者认为头孢菌素对L型的β内酰胺酶较为稳定，所以不易遭受破坏[5]。
综上，临床对疑为泌尿系感染者应同时采用普通培养基和高渗培养基分离细菌，并同时考虑二者的药物敏感情况，根据所分离到的细菌及L型药物敏感试验结果决定用药，可以联合使用作用于细胞壁和细胞质的抗生素，以达到杀菌并阻止其变为L型的目的。
【参考文献】
\[1\]陈梅，张启英，李杰，等. 泌尿系统感染细菌L型检查的临床意义 \[J\]. 蚌埠医学院学报, 1999, 24(4):281282.
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\[4\]罗海波，张福森，何新生，等. 现代医学细菌学 \[M\]. 北京：人民卫生出版社, 1995:261266.
\[5\]李力，刘海水. L型细菌的耐药性与医院感染 \[J\]. 上海医学检验杂志, 2001, 16(增刊):6061.
作者单位：安徽省淮南市第一人民医院泌尿外科，安徽淮南 232007