CoX2在恶性嗜铬细胞瘤中的表达及意义

【摘要】  目的 探讨环氧化酶2(Cyclooxygenase2, CoX2)能否成为预判恶性嗜铬细胞瘤的一种指标。方法 选取1986年10月至2006年8月在上海交通大学医学院附属瑞金医院住院经手术治疗，且具有完整的临床、病理和随访资料的嗜铬细胞瘤患者存档石蜡标本38例，其中良性嗜铬细胞瘤21例，恶性嗜铬细胞瘤17例,另取20例因良性肾疾患行肾切除时获取的同侧正常肾上腺组织作为对照组,采用免疫组织化学技术，检测良、恶性嗜铬细胞瘤及20例正常肾上腺髓质组织中CoX2的表达情况。结果 CoX2在恶性嗜铬细胞瘤中表达最高(82.40%)，在良性嗜铬细胞瘤中表达较低(23.80%)，在正常肾上腺髓质组织中无表达，恶性嗜铬细胞瘤组与良性嗜铬细胞瘤组、恶性嗜铬细胞瘤组与正常肾上腺髓质组织组之间CoX2的表达有显著性差异(P<0.05)。结论 CoX2有望成为预判恶性嗜铬细胞瘤的一种指标。

【关键词】  嗜铬细胞瘤 环氧化酶 (CoX2 免疫组织化学

　血管生成在肿瘤的生长、侵袭和转移中发挥重要作用。环氧化酶2(cyclooxygenase2, CoX2)可通过促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、促进肿瘤血管形成等多种机制，参与调节肿瘤发生和发展过程。有关CoX2在恶性嗜铬细胞瘤中表达情况的研究甚少。本研究采用免疫组织化学方法，检测良、恶性嗜铬细胞瘤中CoX2的表达情况，旨在探讨CoX2在判断嗜铬细胞瘤性质中的作用。

　　1  资料与方法

　　1.1  临床资料  选取1986年10月-2006年8月在我院泌尿科住院经手术治疗，且具有完整的临床、病理和随访资料的嗜铬细胞瘤存档石蜡标本38例，其中良性嗜铬细胞瘤21例，恶性嗜铬细胞瘤17例。判断嗜铬细胞瘤良、恶性的标准：在手术中或术后的长期随访中发现在没有嗜铬组织的区域出现转移病灶，并经手术获取标本后经病理证实为嗜铬细胞瘤者被判为恶性嗜铬细胞瘤；无论在术后组织病理学的检查中肿瘤是否有侵犯血管或包膜、是否有肿瘤组织块状坏死及在每10个高倍镜下出现大于5个有丝分裂细胞等交界性肿瘤的表现，经长期随访未发现在没有嗜铬组织的区域出现转移病灶者，则被判定为良性嗜铬细胞瘤。恶性嗜铬细胞瘤组：男9例、女8例，年龄19-75岁，平均45.06岁，首次手术确诊为嗜铬细胞瘤后随访4-155个月；良性嗜铬细胞瘤组：男10例、女11例，年龄11-77岁，平均43.05岁，首次手术确诊为嗜铬细胞瘤后随访69-240个月。另取20例因良性肾疾患行肾切除时获取的同侧正常肾上腺组织作为对照组。

　　1.2  免疫组织化学染色  将存档的石蜡标本重新制备4μm厚切片行免疫组织化学Envision法染色，CoX2一抗为兔抗人多克隆抗体(Santa Cruz, USA)，工作浓度1∶200，用已知CoX2阳性的结肠癌组织切片染色结果作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

　　1.3  免疫组织化学结果评价标准  CoX2表达结果判断[1]：以细胞核或细胞浆内出现棕黄色颗粒染色者为阳性，高倍镜下(×400)对每张切片随机选择5个视野，每个视野计数200个细胞。阳性和阴性根据细胞染色强度和染色细胞所占比例两者积分之和来判断。染色强度积分为：不染色=0(基本未着色或染色强度与背景相似者)，轻度染色=1(着色浅，略高于背景色)，中度染色=2(明显高于背景而呈棕黄色)，强染色=3(呈深棕黄色者)；阳性细胞比例积分为：无细胞染色=0，<30%细胞染色=1，30%-60%细胞染色=2，>60%细胞染色=3。若两种积分之和>3则为表达阳性，≤3则为表达阴性。

　　1.4  统计学方法  采用SPSS11.5统计软件包对数据进行分析。各组CoX2之间比较用卡方检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

　　2  结果
   
　　CoX2在恶性嗜铬细胞瘤中表达最高(82.4%)，在良性嗜铬细胞瘤中表达较低(23.8%)，在正常肾上腺髓质组织中无表达(图1-3)。恶性嗜铬细胞瘤组与良性嗜铬细胞瘤组、恶性嗜铬细胞瘤组与在正常肾上腺髓质组织组之间CoX2的表达有显著性差异(P<0.05，表1)。

　　图1  CoX2在恶性嗜铬细胞瘤中呈强阳性表达 (Envision×200)（略）

　　图2  CoX2在良性嗜铬细胞瘤中呈弱阳性表达 (Envision×200)（略）

　　图3  CoX2在良性嗜铬细胞瘤中呈阴性表达 (Envision×200)（略）

　　表1  CoX2在良性嗜铬细胞瘤、恶性嗜铬细胞瘤、正常肾上腺髓质组织中的表达（略）

　　3  讨论
   
　　恶性嗜铬细胞瘤的预后不佳，平均5年生存率仅为40%左右，与良性嗜铬细胞瘤相比较，恶性嗜铬细胞瘤在临床表现和组织病理学上均缺乏特异性诊断依据。在没有嗜铬组织的区域，如在脊柱、淋巴结、肝、肺等处出现转移病灶是目前广泛认可的恶性嗜铬细胞瘤的诊断标准，而此时肿瘤一般已至晚期，如何准确迅速地判断嗜铬细胞瘤的性质，是目前临床工作中亟待解决的问题。
   
　　环氧化酶(CoX)是前列腺素合成步骤中的关键限速酶，可将花生四烯酸代谢成各种前列腺素产物，从而维持机体的各种病理生理过程。CoX至少分为CoX1和CoX2两个亚型，后者为诱导型酶，静息时不表达，但在炎症或肿瘤等病理反应过程中，由于各种细胞因子大量存在，可能促进CoX2的表达增加，合成过量的前列腺素，促进病理反应的继续发展。有研究表明，CoX2持续表达能抑制细胞凋亡，抑制某些免疫细胞，从而导致肿瘤的发生发展。在人类胃肠道肿瘤、肺癌、肝癌、胰腺癌、头颈部鳞癌及多种泌尿生殖系肿瘤中均检出其有不同程度的过度表达现象[210]，CoX2可通过促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、促进肿瘤血管形成等多种机制，参与调节肿瘤发生和发展过程[11]。但CoX2与恶性嗜铬细胞瘤的相关性研究资料很少，国内未见有类似的研究报告。国外仅Salmenkivi[12]做过相关研究，研究发现CoX2在正常人的肾上腺皮质有阳性表达，而在肾上腺髓质表达阴性；Salmenkivi采用免疫组化、原位杂交技术对8例恶性嗜铬细胞瘤、36例良性嗜铬细胞瘤和24例交界性嗜铬细胞瘤(组织学上有恶性表现，但经随访未发生远处转移者)进行CoX2表达情况的研究，结果显示CoX2在所有恶性嗜铬细胞瘤中表达均呈中等程度或强阳性(强阳性：75%，6/8；中等程度:25%，2/8)，而在75%的良性嗜铬细胞瘤中CoX2仅为弱表达或表达阴性，79%的交界性嗜铬细胞瘤中CoX2为弱表达或表达阴性。同时研究还发现，来源于肾上腺恶性嗜铬细胞瘤的转移灶，CoX2表达为弱阳性，而来源于肾上腺外恶性嗜铬细胞瘤的转移灶的CoX2表达为中等程度或强阳性。在本组的研究中我们也观察到CoX2在正常肾上腺髓质中表达阴性，在恶性嗜铬细胞瘤和良性嗜铬细胞瘤中的表达阳性率分别为82.4%和23.8%，恶性嗜铬细胞瘤组与良性嗜铬细胞瘤组、恶性嗜铬细胞瘤组与在正常肾上腺髓质组织组之间CoX2的表达有显著性差异(P<0.05)，其结果与Salmenkivi的研究结果相近。提示CoX2可能是一种预判嗜铬细胞瘤良恶性的指标，对CoX2高表达的嗜铬细胞瘤患者有必要进行更加严密的跟踪随访，以便于早期发现、早期治疗，以改善恶性嗜铬细胞瘤患者的长期生存状况。

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　　(编辑 刘 华)

作者单位：上海交通大学医学院附属瑞金医院