PTEN在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义

【摘要】  目的 探讨膀胱移行细胞癌中PTEN的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学(SP)法对50例膀胱移行细胞癌组织和10例正常膀胱黏膜中PTEN蛋白的表达进行检测。结果 膀胱癌组织中PTEN蛋白阳性表达率为54.0%(27/50)，明显低于正常膀胱组织100.0%(10/10)，两组间的差异有统计学意义(P<0.01)；且其表达水平在不同病理分级、临床分期间也有显著差异(P<0.01)。结论 PTEN蛋白表达的缺失可能在膀胱移行细胞癌的发生及进展过程中起着重要作用，并影响其生物学行为；检测PTEN蛋白表达水平有助于膀胱癌的诊断和预后判断。

【关键词】  膀胱移行细胞癌 PTEN 免疫组织化学

　膀胱肿瘤是我国最常见的泌尿生殖系肿瘤, 膀胱移行细胞癌是其最常见的病理类型。PTEN(phosphatase and tensinhomology deleted on chromosome ten)基因定位于人类染色体10q23.3，是第一个被发现具有磷酸酶活性的抑癌基因，参与细胞正常生长及分化的调控。研究发现，在乳腺癌、卵巢癌、肺癌、肾癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤中均存在PTEN 基因表达的缺失。本实验采用免疫组化(SP)法检测其蛋白的表达情况，初步探讨PTEN在膀胱移行细胞癌发生发展中的作用。

　　1  材料与方法

　　1.1  研究对象  收集武汉同济医院2006年7月至2007年6月间膀胱移行细胞癌患者手术标本50例，获得的标本用甲醛固定后石蜡包埋。其中男性41例，女性9例，年龄35-86岁，平均57.6岁。病理分级：低级别膀胱癌(G12)37例，高级别(G3)13例；临床分期：表浅膀胱癌(Tis1)31例，浸润膀胱癌(T24)19例。另取正常膀胱组织标本10例作为对照组。

　　1.2  免疫组化染色  将石蜡包埋的标本制成4μm厚的切片，采用常规SP法进行免疫组化染色。切片常规脱蜡后水化，用3%(体积分数)甲醇过氧化氢溶液室温孵育10min以灭活内源性过氧化物酶，然后行微波抗原修复。滴加山羊血清室温下孵育20min以封闭非特异性抗原，然后加1∶100稀释的一抗(兔抗人PTEN多克隆抗体)，4℃孵育过夜。加生物素标记的二抗37℃孵育30min，然后加链霉亲和素辣根过氧化物酶室温下孵育30min。DAB显色，苏木素复染，脱水、透明后封片。PBS代替一抗做阴性对照。使用光学显微镜观察结果，细胞浆中有棕黄色颗粒物质为阳性染色细胞。每张切片随机选择10个高倍视野(×400)进行观察，阳性细胞比例≥10%判定为PTEN蛋白表达阳性。兔抗人PTEN多克隆抗体，通用型SP试剂盒及DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

　　1.3  统计学方法  应用SPSS 12.0统计软件包对数据进行统计分析，采用χ2检验或Fisher精确检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2  结果
   
　　PTEN蛋白阳性表达者可在细胞浆中观察到大量棕黄色颗粒物质(图1)，而在阴性表达者的细胞浆中则较少(图2)。在膀胱癌组织和正常膀胱组织中PTEN蛋白表达的阳性率分别是54.0%(27/50)和100.0%(10/10)，两组间差异有统计学意义(P<0.01)。在不同临床分期和病理分级间其阳性率也存在显著差异(P<0.01)，而在膀胱癌初发与复发患者间及不同性别间其差异无显著性(表1)。

　　图1  正常膀胱组织中PTEN表达阳性 (SP×400)（略）

　　图2  TCCB组织中PTEN表达阴性 (SP×400)（略）

　　表1  PTEN蛋白表达与膀胱移行细胞癌临床病理特征的关系（略）

　　TCCB组与正常组比较、高级别组与低级别组比较、浸润性癌与浅表性癌比较，**P<0.01

　　3  讨论
   
　　膀胱肿瘤是我国最常见的泌尿系肿瘤，移行细胞癌是其最常见的病理类型。近年来的肿瘤发病率报告显示，膀胱肿瘤的发病率有增高趋势。术后复发率高是膀胱肿瘤一大特点，部分患者还出现分级、分期的进展甚至发生远处转移。目前，已有BTA、NMP22、Survivin等肿瘤标记物用于膀胱癌的早期诊断和术后随诊检查，但存在敏感性和特异性不高的问题[12]。因此，寻找一种特异性、敏感性较高，能预判膀胱移行细胞癌生物学行为的肿瘤标志物，从而指导临床治疗方案的选择尤为重要。
   
　　PTEN是第一个被发现具有磷酸酯酶活性的抑癌基因，由9个外显子和8个内含子组成，编码由403个氨基酸组成的蛋白。PTEN蛋白不仅具有脂质磷酸酶活性，还有蛋白磷酸酶活性。作为一种双特异磷酸酶，它可作用于某些磷脂或蛋白激酶的位点使之脱磷酸化，从而参与细胞的生长、增殖、迁移及凋亡过程的调控[3]。PTEN可使PIP2和PIP3去磷酸化，拮抗PIP3/AKT信号传导通路，抑制细胞增殖，引起细胞凋亡；PTEN还可使FAK去磷酸化而失活，从而阻断FAK对RasMAPK的调节作用，抑制细胞的转移和黏附[4]。PTEN在正常组织中表达水平较高，其表达的缺失可导致机体对肿瘤细胞抑制能力的降低从而促进肿瘤的发展。PTEN表达的缺失在人类多种肿瘤中普遍存在，如乳腺癌、卵巢癌、肺癌、肾癌、前列腺癌等，且表达缺失者往往预后较差。
   
　　本实验结果显示，在膀胱癌组织中PTEN蛋白的阳性表达率明显比正常膀胱组织低，且其表达水平在不同病理分级、临床分期间有显著差异，提示PTEN基因的缺失可能发生于TCCB发生过程的早期阶段，与TCCB的发生和发展存在一定的关系。检测PTEN蛋白的表达水平有助于膀胱移行细胞癌的诊断及其预后的判断。有研究表明，PTEN基因表达缺失的主要原因有基因突变，杂合性缺失和启动子甲基化[56]。其中，启动子CpG岛甲基化导致的基因转录失活是一个可以逆转的表观遗传学基因修饰过程，已经成为基因治疗研究的热点。
   
　　总而言之，PTEN蛋白的表达缺失在膀胱移行细胞癌的发生及进展过程中起着重要作用，影响着该肿瘤的生物学行为，检测PTEN蛋白的表达可能对于TCCB的早期诊断和预后有一定参考价值，但其表达缺失的具体机制仍有待深入研究。

【参考文献】
  　[1]Dey P. Urinary marker of bladder carcinoma [J]. Clin Chim Acta, 2004, 340(12):5765.

　　[2]魏辉，梅骅. 与判断膀胱肿瘤预后的有关的非创伤性检查和分子标记物 [J]. 现代泌尿外科杂志, 2003, 8(3):184186.

　　[3]Li J, Yen C, Liaw D, et al. PTEN, a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain, breast and prostate cancer [J]. Science, 1997, 275(5308):19431947.

　　[4]BlancoAparicio C, Renner O, Leal JF, et al. PTEN, more than the AKT pathway [J]. Carcinogenesis, 2007, 28(7):13791386.

　　[5]Tashiro H, Blazes MS, Wu R, et al. Mutations in PTEN are frequent in endometrial carcinoma but rare in other common gynecological malignancies [J]. Cancer Res, 1997, 57(18):39353940.

　　[6]Soria JC, Lee HY, Lee JI, et al. Lack of PTEN expression in nonsmall cell lung cancer could be related to promoter methylation [J]. Clin Cancer Res, 2002, 8(5):11781184.

　　(编辑 刘 琳)

作者单位：华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科，湖北武汉 430030