颅内恶性肿瘤体外化疗敏感试验的临床应用观察

　　［摘要］  目的  研究颅内肿瘤组织标本体外化疗药物敏感性与临床疗效的关系，为颅内恶性肿瘤病人个体化化疗提供依据。方法  将新鲜的41例恶性颅内肿瘤组织标本应用MTT法进行7种脑肿瘤常用化疗药物以及与尼莫通（NIM）联合的体外敏感性测定，经筛选后将敏感药物经静脉或颈内动脉超选择应用。结果  41例颅内恶性肿瘤病理标本对7种化疗药物总体上较为敏感，其单独药物敏感顺序依次为卡氮芥（BCNU）、威猛（VM26）、甲氨喋呤（MTX）、顺铂（DDP）、足叶乙甙（VP16）、长春新碱（VCR）、阿霉素（ADM），与NIM联合药物的抑制率顺序依次为BCNU、VM26、VP16、DDP、ADM、VCR。药物治疗随访观察，1年以上存活71.9%（23/32），2年以上存活56.3%（18/32）。结论  常规脑肿瘤化疗药物对不同个体敏感程度不一，因此，体外化疗药物敏感试验可帮助临床医生制定合理的化疗方案，按其结果指导化疗可能有助于提高颅内恶性肿瘤病人的远期存活率。

　　［关键词］  脑肿瘤 ； 药物敏感试验 ；药物疗法

　　CLINICAL STUDY ON IN VITRO CHEMOTHERAPY SENSITIVITY TEST OF INTRACRANIAL MALIGNANT TUMORS

　　WANG HOUZHONG，KONG JUN， GE QIAN， et al

　　(Department of Neurosurgery, Qingdao Municipal Hospital, Qingdao 266011,China)
 
　　［ABSTRACT］ObjectiveTo provide a guidance for individual chemotherapy in patients with intracranial malignant tumors by studying the relativity of chemosensitivity of antitumor drugs. MethodsThe chemosensitivity of seven kinds of antitumor drugs and their combination with nimodipine were tested, in vitro, in 41  intracranial malignant tumors by  MTT method. Results The seven drugs for the tumors were carmustine, VM26, methotrexate, cisplatin, VP16,vincristin and adriamycin, which associated with nimodipine was carmustine, VM26,VP16, cisplatin, adriamycin, and vincristin. The oneyear survival was 71.9% (23/32), and twoyear survival, 56.3% (18/32). ConclusionThe chemotherapy sensitivity in patients with intracranial malignant tumors is different. Chemotherapy under the guidance of chemosensitivity in vitro may establish reasonable methods and improve longterm survival of patients with intracranial malignant tumors.

　　［KEY WORDS］brain neoplasms; chemosensitivity test; drug therapy
   
　　原发性颅内肿瘤的年发病率为（2~19）/10万，约60%为胶质瘤，其中大多数为高度恶性的星形细胞瘤。目前，恶性脑肿瘤是导致死亡的主要肿瘤，手术和放射治疗都不能彻底治愈，化疗效果也不理想，肿瘤常规化疗药物卡氮芥（BCNU）的临床有效率仅20%。其原因除血脑脊液屏障（BBB）限制药物进入中枢神经系统外，肿瘤细胞对化疗药物亦存在着耐药现象，而肿瘤本身是一组高度异质性的疾病，即便是同一种肿瘤不同的病人药物敏感性亦可能完全不同。由于化疗药物种类繁多，临床医师在制定化疗方案时有一定的盲目性，或采用固定的化疗方案，缺乏针对性，影响了临床疗效。化疗药物敏感性试验的方法很多，众多研究表明，MTT法较为成熟，器材要求一般，操作简单，可制定个体化的化疗方案，进而改善化疗疗效［1，2］。本文应用MTT法测定了41例颅内恶性肿瘤组织标本的体外药物敏感性，旨在用于指导临床化疗。

　　1  材料和方法

　　1.1  标本来源  

　　肿瘤组织标本均为脑肿瘤病人手术切除的新鲜标本，其中胶质细胞瘤32例，室管膜瘤3例，恶性脑膜瘤2例，转移瘤4例。胶质细胞瘤中星形细胞瘤30例，少突胶质细胞瘤2例。病人男17例，女24例，年龄13~70岁。

　　1.2  药品与试剂

　　实验所用化疗药物为BCNU、阿霉素（ADM）、威猛（VM26）、甲氨喋呤（MTX）、长春新碱（VCR）、顺铂（DDP）、足叶乙甙（VP16），以及钙离子拮抗剂尼莫通（NIM）；试剂为四甲基偶氮唑盐（MTT，  Fluka or Sigma 公司产品）。

　　1.3  MTT法药敏试验 

　　将肿瘤组织以机械法制成单细胞悬液，在96孔细胞培养板中，细胞和药物一起作用72 h，加入MTT磷酸缓冲液，继续培养3 h，弃上清，每孔加入DMSO 100 μL，振荡使晶体充分溶解后，用酶标仪检测吸光度（A）值。抑制率（IR）=（1 -实验组A/ 无药组A值）×100%。IR<30%为不敏感，>50%为敏感。以常用化疗药物血浆峰浓度的5~10倍作为判断药物敏感的标准浓度［3］。

　　2  结果

　　2.1  药敏试验结果
　　
　　41例颅内恶性肿瘤组织标本对7种化疗药物总体上较为敏感，其单独药物敏感顺序为BCNU、VM26、MTX、DDP、VP16、VCR、ADM，与NIM联合药物的抑制率顺序为BCNU、VM26、VP16、DDP、ADM、VCR。见表1。

　　表1  41例化疗药物敏感试验结果（略）

　　2.2  临床应用观察及结果

　　本组肿瘤切除后，41例中有32例行化疗,32例化疗药物给药方法为颈内动脉给予ＢＣＮＵ者4例；超选择灌注ＶＭ２６者２例，ＶＣＲ＋ＢＣＮＵ者５例；静脉给予ＢＣＮＵ者１０例，ＶＭ２６者４例，ＶＣＲ＋ＢＣＮＵ者３例；颈内动脉超选择灌注＋静脉给予ＢＣＮＵ＋ＶＣＲ者２例，ＢＣＮＵ＋ＶＰ１６者２例。21例化疗同时持续静脉泵注NIM 48 h。本组化疗病人生存超过1年以上者23例，存活率为71.9%,生存超过2年以上者18例，存活率为56.3%。

　　3  讨论

　　颅内恶性肿瘤手术切除后，药物疗法是目前治疗的主要措施之一，但尤其是胶质瘤的化疗效果很不理想，除了BBB这个特殊的因素外，肿瘤细胞对化疗药物的耐受也是个重要的原因［4］。因此，采用肿瘤的药物敏感试验方法，来指导临床个体化化疗很有必要。

　　MTT法体外药敏检测以其简便、快速、准确、重复性好，并可同时进行多种检测等优点，已被广泛应用于细胞系的体外抗癌药物筛选，以及临床肿瘤的化疗药敏检测，以实现临床化疗个体化用药［5］，目前我院已将其作为体外药物筛选的常规方法。

　　由于体外与体内药物作用的条件多有不同，在体外药敏试验中显示为敏感的药物，在体内并不一定敏感。但如果这些药物在体外对培养的原代细胞都不能有效地抑制其生长，其在体内的效果无疑是不理想的，就应避免使用。

　　本试验所选用的7种药物均为目前临床上治疗恶性脑肿瘤常用的化疗药物。由于BBB限制药物进入脑组织，以及肿瘤细胞本身对抗癌药物存在耐药现象，常规化疗药物盐酸嘧啶亚硝脲（ACNU）、BCNU、DDP、VCR、VM26、VP16等临床有效率仅为15%~20%，如何选择有效的药物是临床医生的一个难题，因此，了解不同病人对不同化疗药物的敏感性，对指导临床个体化疗具有重要意义。

　　通过本组7种药物药敏试验可以看到，单独药物的敏感率在26.87%~40.32%；而与NIM联合应用，药物敏感率则可提高到41.00%~60.65%，与文献报道相近［6,7］。联合应用化疗药物的目的是利用作用不同时期的药物，通过不同的机制及相互协同作用，提高疗效，降低毒性，延长病人的生存期。

　　［参考文献］

　　［1］KABESHIMA Y, KUBOTA T, WATANABE M,et al. Clinical usefulness of chemosensitivity test for advanced colorectal cancer ［J］.Anticancer Res, 2002，22:3033.

　　［2］TAYLOR C G, SARGENT J M, ELGIE A W, et al. Chemosensitivity testing predicts survival in ovarian cancer ［J］.Eur J  Gynaecol Oncol, 2001，22:278.

　　［3］孙燕. 临床肿瘤内科手册［M］. 第2版.北京：人民卫生出版社，1996：20.

　　［4］ 陈忠平.肿瘤耐药基因［M］//黄强，陈忠平，兰青.胶质瘤.北京：中国科学技术出版社，2000:376.

　　［5］LAWRENCE N J, RENNISON D, MCGOWN A T, et al. Linked parallel synthesis and MTT bioassay screening of substituted chalcones ［J］. J Comb Chem, 2001，3(5):421.

　　（本文编辑  马伟平）

　　［基金项目］青岛市科技局科研基金资助项目（KZD0257）

　　（青岛市市立医院，山东 青岛  266011  神经外科; 中心实验室）