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［摘要］目的研究对比经数字减影血管造影术（DSA）舌动脉介入灌注与经周围静脉给药两种途径抗癌药 物在血和组织中浓度的不同变化。 方法 选4只杂种健康犬，分为两组，一组先静脉给予氟尿嘧啶（Fu）和卡铂 （CBP）各75 mg，于给药后10 min、20 min、30 min、1 h、2 h、3 h、5 h、3 d、5 d、8 d静脉取血，于给药后10 min、 20 min 、30 min、3 d、5 d、8 d行舌及颊组织活检，应用高效液相色谱法（HPLC）测定血、组织中药物浓度;3周后行 DSA超选择性舌动脉介入灌注抗癌药物栓塞，同上检测血、组织中药物浓度。另一组先行动脉给药，再行静脉给 药，余同前组。 结果 DSA超选择性舌动脉介入灌注抗癌药物栓塞后，血药浓度的衰减比静脉给药变慢，而舌组织 中药物浓度显著增加，给药后10、20、30 min舌组织中Fu浓度是静脉用药组的25、20、4倍，颊组织中药物浓度是静 脉用药组的25、44、25倍，差异有显著性（ F=4.81～52.02，t=2.82～9.75，P <0.01、0.05）。 结论 术前DSA动 脉介入灌注抗癌药物栓塞，能减缓血药浓度的衰减，增加组织中药物浓度。
［关键词］灌注，局部;栓塞，治疗性;药代动力学;卡铂;氟尿嘧啶;色谱法，高压液相
AN EXPERIMENTAL PHARMACOKINETIC STUDY OF FLUOROURACIL AND CARBOPLATIN BY INTRAVENOUS INJECTION OR INTRA-LINGUAL-ARTERY INFUSION EMBOLIZATION
WANG LIANG-ZHONG， LI NING-YI， MA LIN， et al
（De-partment of Oral and Maxillofacial Surgery， The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College， Qingdao 266003， Chi-na）
［ABSTRACT］ Objective To measure the concentration change of anticancer drugs in plasma and tissue after transfemoral superselective intra-lingual-arterial infusion embolization under DSA （digital subtraction angiography） and intravenous injection. Methods Four dogs were randomly divided into group 1 （ n =2）and group 2（n =2）. In group 1， fluorouracil （Fu） 75 mg and car- boplatin （CBP） 75 mg were given intravenously， then transfemoral superselective intra-lingual arterial embolization was done under DSA with Fu 75 mg and CBP 75 mg after three weeks. Venous blood specimens were taken at 10 min， 20 min， 30 min，1 h，2 h，3 h，5 h，3 d，5 d，and 8 d，and the lingual tissue and the buccal tissue specimens at 10 min， 20 min， 30 min，3 d，5 d，and 8 d were collected after drug administration each time. Drug concentrations in plasma and tissue were determined by high-performance liquid chromatography （HPLC）. In group 2，the drugs were given intra-arterially first， then intravenously， the rest were the same as group 1. Results The attenuation of drug concentration in plasma after intra-arterial infusion embolization was lower than af- ter intravenous injection. At 10 min，20 min，and 30 min after intra-arterial embolization， the 5-fluorouracil concentration in tissue of the tongue was 25， 20 and 4 times that after intravenous injection，and 25，44 and 25 times that after intravenous injection in buccal tissue （ F=4.81-52.02; t=2.82-9.75;P <0.01，0.05）. Conclusion Intra-arterial infusion embolization with carbopl-atin and Fu is a better way in treating oral and maxillofacial malignant tumors.
［KEY WORDS］perfusion， regional;embolization， therapeutic;pharmacokinetics; carboplatin;fluorouracil;chromatography，high pressure liquid
选择性动脉介入栓塞化疗已成为治疗许多恶性 肿瘤的主要手段之一，但对于口腔颌面部恶性肿瘤 动脉介入化疗虽然应用较早，但不普遍，而且研究较 少，本文选用治疗口腔癌常用药物氟尿嘧啶（Fu）和 卡铂（CBP）行犬数字减影血管造影术（DSA）舌动脉 介入灌注，明胶海绵栓塞，使用高效液相色谱法 （HPLC）进行药代动力学研究，以期为临床口腔癌 介入化疗提供动物实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物
选用杂种健康犬4只，未孕，体 质量约25 kg，随机分为A、B两组，每组2只。
1.1.2 药品及试剂 CBP及Fu化学对照品（中国 药品生物制品检定所）; Fu（上海旭东海普制药有限 公司）;CBP（山东济南，齐鲁制药厂）;二乙基二硫代 氨基甲酸钠（DDTC）及分析纯AR（上海三爱思试剂有限公司）;液相色谱甲醇（上海陆都化学试剂厂）; 乙酸乙酯（含量>99.5%，宜兴市第二化学试剂厂）。
1.1.3 主要仪器
高效液相色谱仪（美国Alli- ance）;色谱柱（大连依波特）;4F、3F-SP导管;专用 血管造影机（美国GE公司，型号2CLCA）。
1.2 方法
1.2.1 给药、取材 A组:硫喷妥钠定时静脉推注麻醉，前肢头静脉推注CBP、Fu各75 mg后10 min 、20 min、30 min、1 h、2 h、3 h、5 h、3 d、5 d、8 d静脉 取血4 mL，离心，取上清液，置-30 ℃冷藏待测;左 半舌、颊黏膜处于10 min、20 min、30 min、3 d、5 d、8 d 分别手术取组织，称质量，加2.5 mL生理盐水，匀浆，离心，取上清液置-30 ℃冷藏待测。3周后经股动脉DSA Seldinger技术超选择性选择舌动脉插管，推注CBP、Fu各75 mg后，明胶海绵右舌动脉栓塞。栓塞后10 min、20 min、30 min 、1 h、2 h‘3 h 、5 h、3d、5 d、8 d静脉取血4 mL，离心，取上清液，置-30 ℃冷藏待测;栓塞后10 min、20 min、30 min 、3 d、5 d、8 d分别手术取右半舌组织，称质量，加2.5 mL生理盐水，匀浆，离心，取上清液置-30 ℃ 冷藏待测。
B组:先分别以CBP和Fu行DSA介入舌动脉灌注并栓塞，3周后再静脉推注，静脉取血、切取组 织处理同A组。
1.2.2 HPLC法测犬血浆和切取组织中的CBP浓度
①色谱条件:高效液相色谱仪（Waters 2690 Separations Module，Waters 996 Photodiode Array Detector）;色谱柱:HYPERSIR（200.0 mm×4.6 mm ，5 μm ），柱温30 ℃;流动相为甲醇∶水（65∶ 35），流 量为1.0 mL/min，紫外线检测波长254 nm。②样 品处理。血样处理:10 mL具塞试管内加入待测样 品血浆250 μL、100 g/L DDTC溶液150 μL、5 g/L 碳酸钠溶液0.5 mL，旋涡混匀后置37 ℃水浴中衍 生化30 min，冷却后加叔丁基甲醚3 mL，旋涡混合1 min，离心5 min（3 000 r/min），置-30 ℃冷冻后将上层移入另一尖底离心试管内，置60 ℃水浴氮气吹干，残留物用三氯甲烷200 μL重溶，旋涡混匀后取10 μL进样。组织处理:10 mL具塞试管内加入待测组织样品500 μL，余同血样处理。③标准曲线的制作:分别量取1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 mg/L CBP标准应用液，加空白血浆250 μL、100 g/LDDTC溶液150 μL、5 g/L碳酸钠溶液0.5 mL，余同血样处理。连续重复操作3次。
1.2.3 HPLC法测犬血浆和切取组织中的Fu浓度
①色谱条件:流动相为甲醇∶水（94∶6），流量为1.0 mL/min，紫外线检测波长265 nm，余同CBP浓度测定色谱条件。②样品处理。血样处理:10 mL 具塞试管内加入待测样品血浆250 μL、萃取剂醋酸乙酯4 mL，旋涡混匀2 min，离心10 min （ 3 000 r/min ），取出醋酸乙酯层移入另一尖底离心 试管内，置60 ℃水浴氮气吹干，残留物用体积分数 为0.005的甲醇100 μL重溶，旋涡混匀2 min后取10 μL进样;组织处理:10 mL具塞试管内加入待测组织样品1 000 μL，余同血样处理。③标准曲线的制作:分别量取0.5、1.0、2.5、5.0、20.0、50.0 mg/L Fu标准应用液50 μL，加空白血浆250 μL，旋涡混匀2 min后，加萃取剂醋酸乙酯4 mL，旋涡混匀2 min ，余同血样处理。连续重复操作3次。
1.2.4 统计学处理
计量资料用 x±s 表示，用SPSS 11.0统计软件对样本行单因素方差分析之Dunnet t 检验;HPLC法所测药物浓度数据用Alli-ance高效液相色谱仪Glqt软件及Microsoft Excel处理。
2 结果
2.1 色谱图
Fu色谱图见图1，在265 nm检测波长下Fu保 留时间（RT）在3.4 min左右。在254 nm检测波长 下CBP的RT在8.4 min左右，见图2。Fu和CBP 峰形分离很高，使得药物浓度检测得以正常进行。
2.2 标准曲线的制定
分别以不同Fu、CBP标准液浓度为横坐标，色 谱吸收峰面积为纵坐标作回归线性标准曲线，得回 归方程:以Fu浓度（ c ）对峰面积（ A ）作线性回归，得回归方程为 c =2.758×10-5A -0.134，r =0.991; 以CBP浓度 c对峰面A 作线性回归，得回归方程为c = 6.317×10-5A-0.006，r =0.998。
2.3 样品浓度测定
根据药物标准曲线回归方程，测定Fu、CBP血 药浓度变化见表1，组织药物浓度见表2。由表1可知，静脉给药后，Fu、CBP的血药浓度下降较快，到2 h 时已较低（0.24、1.14 mg/L），到3 h时更低（0.06 、0.82 mg/L）;而动脉给药并栓塞后，Fu、CBP 的血药浓度下降较缓慢，在 20 min～2 h 间维持在 一定浓度范围内（1.67～9.35、4.66～8.48 mg/L）， 到5 h时仍有一定浓度（0.26、0.58 mg/L）， 显示出动脉内介入灌注抗癌药物栓塞后，血药浓度的衰减 比静脉给药变慢。由表2可知，在介入灌注药物栓塞后10、20、30 min，舌组织中Fu浓度是静脉用药 的25、20、4倍，颊组织中药物浓度是静脉用药的 25、44、25倍，差异有显著性（ F=4.81～52.02，t=2.82～ 9.75，P <0.01、0.05）。显示动脉内介入灌 注抗癌药物栓塞后，靶组织内的药物浓度增高。组织内CBP浓度，因活检标本量少，只测定1次。 表1 动、静脉用药后血药浓度变化（略）注:IA为动脉内灌注药物并栓塞，IV为静脉内推注药物 表2 动、静脉用药后组织药物浓度变化（略） 注:A为舌动脉内灌注Fu并栓塞后舌组织内药物浓度，B为静脉内推注Fu后舌组织内药物浓度，C为静脉内推注Fu后颊组织内 药物浓度，D为舌动脉内灌注CBP并栓塞后舌组织内药物浓度
3 讨论
介入化疗早期称为区域性动脉化疗，即利用肿 瘤所在解剖位置，经选择性的动脉内插管将化疗药物直接注入肿瘤的一支或多支供血动脉，提高肿瘤内的药物浓度，最大限度地杀伤肿瘤细胞。张锡泽等［1］1963年在国内首次报道了区域性动脉化疗治 疗晚期口腔颌面部癌的经验，邱蔚六［2］1975年对126例病人进行了追踪，疗效虽不突出，但当时对开展综合治疗起到了一定推动作用。随后李树玲［3］ 、王大章等［4］的临床应用取得了一定疗效，积累了丰 富的临床经验。 DSA技术能单独显示血管病变或与之有关的 血管系统，清楚地观测到血管的分布和形态，使区域 性动脉化疗有了新的发展，目前称之为介入化疗。 选择性动脉介入栓塞化疗治疗恶性肿瘤已成为国内 外研究的热点，Fu和CBP是口腔颌面部恶性肿瘤 化疗的主要药物，本文选用Fu和CBP联合用药，行 犬DSA介入舌动脉灌注，明胶海绵栓塞，用HPLC 法进行了药代动力学研究［5～8］。栓塞化疗能一方面减慢抗癌药物的代谢、排泄，另一方面增加栓塞部位组织中的药物浓度，降低栓 塞部位周围组织中的药物浓度，从而进一步提高疗 效，降低周围组织的毒性作用，这是我们进行动脉内 灌注抗癌药物后栓塞的主要目的。以铂类药物为代 表的细胞周期非特异性药物，其细胞杀伤作用呈浓 度依赖性，局部浓度增加1倍，杀灭细胞数量可增加 10倍左右，这些药物更适合局部动脉灌注。对细胞 周期特异性药物，由于其只作用于细胞增殖周期的 一个时相，故较长时间使其保持在较高浓度特别重 要，以便能对更多的增殖期肿瘤细胞发挥作用，Fu 即是一种典型的周期特异性药物。 本研究显示，介入动脉药物灌注栓塞同单纯静 脉用药比较，改变了化疗药物的代谢、排泄，使药物 在体内能较长时间存在，衰减减慢，提高了血、组织 中药物浓度，尤其是组织中药物浓度，在介入灌注药 物栓塞后10、20 min，舌组织中Fu浓度是静脉用药 的25、20倍，颌颊黏膜处药物浓度是静脉用药的 25、44倍，差异有高度显著性;在30 min时，舌组织 中Fu浓度是静脉用药后颊组织中浓度的25倍，差 异具有显著性。由此可见，通过改变给药方式与途 径，改变了药物在全身的分布，实现靶器官的阻断和 药物的被动靶向，靶区的药物长时间地维持较高的 浓度，提高了生物利用度，提高了药物的治疗指数， 从而达到治疗肿瘤的目的。
［参考文献］
［1］ 张锡泽，邱蔚六，刘善学，等. 动脉注射抗癌药物治疗晚期口腔 颌面部恶性肿瘤初步报告［J］. 中华医学杂志， 1963，49:782.
［2］ 邱蔚六. 区域性动脉化疗治疗口腔颌面部恶性肿瘤［J］. 中华 医学杂志， 1975，55:669.
［3］李树玲. 颈动脉插管注入氟尿嘧啶治疗口腔癌30例疗效总结 ［J］. 天津医药:肿瘤学附刊， 1979，6:2.
［4］王大章，王模堂，温玉明，等. 颈外动脉插管化疗在口腔颌面部 恶性肿瘤综合治疗中的应用—— —附500例疗效观察和评价［J］. 中华口腔科杂志，1983，18（2）:80.
［5］ BAUMHAKEL M， KASEL D， RAO-SCHYMANSKI R A， et al. Screening for inhibitory effects of antineoplastic agents on CYP3A4 in human liver microsomes［J］. Int J Clin Phar- macol Ther， 2001，39（12）:517.
［6］ 王娟，陈峻青，马淑清，等. 进展期术前卡铂、腹腔化疗肿瘤组 织聚集浓度的比较及药代动力学研究［J］. 中华肿瘤杂志， 1997，19（4）:300.
［7］ 张枫，王桥，宋学英. HPLC测定静脉给药后大鼠血清中5-氟 尿嘧啶的含量［J］. 中国药学杂志， 2002，37（6）:439.
［8］ 陈紫千，刘承恩，郭克建，等. 氟尿嘧啶腹腔动脉与周围静脉给 药胰腺和肝脏药代动力学实验研究［J］. 中国冶金工业医学杂 志， 2000，17（5）:257.
［基金项目］ 青岛市科技局基金资助项目（2001-KNS-E-3）
青岛大学医学院附属医院，山东青岛 266003
1 口腔颌面外科;
2 药剂科; 3 DSA科