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［摘要］目的 了解特比奈芬对皮肤致病性产孢丝状真菌的敏感性与稳定性。方法 对73株产孢丝状真菌菌落作研磨处理后制备菌液，采用NCCLS M38-A方案微量稀释药敏试验法，检测特比奈芬对产孢丝状真菌的最小抑菌浓度（MIC）。结果 特比奈芬对红色毛癣菌MIC为0.001～0.060 mg/L，须癣毛癣菌为0.002～0.015 mg/L，絮状表皮癣菌为0.001～0.008 mg/L，未发现有耐药菌株。结论 特比奈芬对皮肤癣菌具有良好的抑制作用，NCCLS M38-A方案检测产孢丝状真菌具有结果稳定、重复性好的优点。
［关键词］ 特比奈芬;真菌;皮肤;微生物敏感性试验
SUSCEPTIBILTY TESTING OF ANTIFUNGAL DRUG: TERBINAFINE AGAINST COMMON DERMATOPHYTES
WANG XIAO-JIAN， QIANG XIN
（Department of Microbiology， Qingdao University Medical College， Qingdao 266021，China）
［ABSTRACT］ObjectiveTo evaluate the susceptibility and stability of terbinafine against common dermatophytes. Me- thodsSuspension of conidia prepared by grinding colonies of dermatophytes was used via M38-A method recommended by NC-CLS. ResultsIsolates of dermatophytes tested were highly susceptible to terbinafine， with the geometric mean of minimal inhibit concentrations being 0.001-0.060 mg/L for T. rubrum， 0.002-0.015 mg/L for T. mentagrophytes， 0.001-0.008 mg/L for E. floccosum， respectively. ConclusionThe data suggest that terbinafine can effectively inhibit the growth of dermatophytes in vitro. The results obtained via M38-A method are stable and repeatable.
［KEY WORDS］terbinafine; fungi; skin; microbial sensitivity tests
特比萘芬是一种有效的广谱抗真菌药，主要用于治疗浅部真菌感染。近年来，真菌体外药敏试验方法不断增多［1～3］，但对丝状真菌而言，目前仍以2002年美国国家实验室标准委员会（NCCLS）颁布的M38-A方案为标准。本文参照此方案，以微量稀释法对73株皮肤癣菌作了体外KN-AF特比萘芬敏感试验，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料及其来源
1.1.1菌株 红色毛癣菌49株，须癣毛癣菌16株，絮状表皮癣菌8株，均自门诊病人中分离得到。质控菌株为美国菌种保藏中心提供的红色毛癣菌（ATCC28188）。
1.1.2药物 KN-AF甲涂剂药品，来自美国康尼公司提供的特比萘芬药液，浓度为100 g/L。溶剂为美国康尼公司提供的二甲基亚砜（DMSO）。
1.1.3培养液 严格按M38-A方案的标准配制。RPMI 1640粉47.14 g，加入1 L蒸馏水（其中含三氮吗啡林丙磺酸），NaOH调节pH至7.0，滤器过滤除菌，置4 ℃冰箱备用。
1.2 实验方法
1.2.1药液制备 以RPMI 1640培养液将特比萘芬药液稀释成1 g/L作为储备溶液，然后将其稀释至1 mg/L的工作液，加于无菌96孔微量药敏板中第1孔，每孔100 μL，然后作倍比稀释，筛选浓度为 0.001～ 0.500 mg/L。
1.2.2菌悬液制备 受试菌株经纯化后转种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）上，红色毛癣菌同时接种于燕麦琼脂培养基，30 ℃孵育7～10 d，促进产孢形成。以1～2 mL无菌生理盐水（含1 g/L吐温20）轻轻洗下菌落，置无菌组织研磨器中制成均匀的混悬液，经血细胞计数板计数为含孢子或菌丝片段（1～3）×109CFU/L的菌液。
1.2.3接种与培养 以RPMI 1640培养液将菌液稀释100倍，即终浓度为（1～3）×107CFU/L，加入96孔微量药敏板中，每孔100 μL，并作阳性、空白及DMSO对照。30 ℃湿盒孵育5 d。
2 结果
空白对照组无菌生长，阳性对照组及含DMSO对照组真菌生长良好，须癣毛癣菌、絮状表皮癣菌的对照孔一般在第2天可见生长，红色毛癣菌则在第3天可见生长。以100%生长抑制浓度为其MIC值，实验菌株在第5～7天的MIC值基本上无变化。 特比萘芬对皮肤癣菌具有良好的抑制作用，未见丝 状真菌对特比萘芬有耐药现象。见表1。
表1 KN-AF特比萘酚对丝状真菌的MIC值（略）
3 讨论
真菌体外药敏试验方法较多，目前尚存在着标准欠统一，各实验室间结果重复性差的问题。针对丝状真菌而言，虽然NCCLS推荐了M38-A方案，但其由于缺少相关数据，更由于皮肤癣菌产孢少，产孢条件及接种菌量多少难以控制等难点，使得至今难以形成一个统一的标准，所以该方案的测试菌株尚未包含皮肤癣菌。针对红色毛癣菌含孢子少的特点，GHANNOUM等［4］曾以燕麦培养基来替代PDA，进行了以M38-A方案测试红色毛癣菌的多中心实验研究，室间结果的符合率达到了92%～100%。国内外也相继有学者以M38-A方案测试了皮肤癣菌，证明其结果具有重复性与稳定性［5］。本文以M38-A微量法检测73株皮肤癣菌，结果都稳定在相应的范围内，与王海英［6］报告的特比萘芬对红色毛癣菌的MIC为0.001～0.150 mg/L基本相符。就培养基而言，作者经过试验发现，燕麦培养基与PDA培养基培养结果无明显差异。但对细菌浓度而言，浓度为107CFU/L对照孔真菌生长明显不良，不利于结果的判断，故我们选择109CFU/L的真菌浓度。 特比萘芬为一种有效广谱抗真菌药，属人工合成的丙烯酰胺类化合物，通过抑制真菌麦角固醇的合成，导致细胞膜脆性增加而破裂，起到杀菌作用。其疗效高，副作用少，主要用于治疗浅部真菌感染。临床应用已显示其对皮肤癣菌病具有良好疗效，体外药敏试验也未发现有耐药菌株。综上所述，特比奈芬对皮肤致病性产孢丝状真菌具有明显的杀菌作用。
［参考文献］
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［4］ GHANNOUM M A， CHATURVEDI V， ESPINEL-IN-GROFF A， et al. Intra-and inter-laboratory study of a method for testing the antifungal susceptibilities of dermatophytes ［J］. Clin Microbiol， 2002，42:2977.
［5］ 佟 盼琢，李若瑜，万哲，等. 应用M38P方案测定皮肤癣菌对抗真菌药物的敏感性［J］.中国麻风皮肤病杂志，2001，17:147.
［6］ 王 海英. 中性红染色在抗真菌药物敏感试验中的应用［J］.中华医学检验学杂志，1998，32:34-36.
（本文编辑 黄建乡）
（青岛大学医学院微生物学教研室，山东 青岛 266021）