Apo H基因多态性与冠心病及血脂代谢的关系

　　［摘要］目的 探讨载脂蛋白H（Apo H）外显子3、8基因多态性与冠心病（CHD）及血脂代谢的关系。方法采用聚合酶链式反应结合限制性片段长度多态分析方法，分析了100例健康人及110例冠心病病人的Apo H外显子3、8基因型，并对血脂进行了测定。结果 冠心病组Apo H 外显子3 GG、GA+AA基因型频率及G、A等位基因频率与对照组比较差异无显著性 （ χ2 =1.56～2.15，P >0.05）。冠心病组Apo H外显子8 GC基因型频率及C等位基因频率显著增高（ χ2 =3.91、8.44，P <0.05）。冠心病组Apo H 外显子3 GG、GA+AA基因型病人高密度脂蛋白胆固醇（HDL）显著高于对照组（ t′=8.30，t=4.06 ，P <0.05）;冠心病组及对照组内基因型间的血脂水平比较无明显差异。冠心病组外显子8 GG、GC基因型病人LDL水平也显著高于对照组（ t′=7.97、8.55，P <0.05）;冠心病组GC基因型病人的三酰甘油（TG）水平显著高于GG型及对照组的各基因型（ t′=4.02 ～4.71，P <0.05）。结论 Apo H外显子3基因多态性与冠心病及血脂代谢无相关性;Apo H外显子8 GC基因型及C等位基因频率与冠心病发病有关，Apo H外显子8基因多态性与TG代谢有关。

　　［关键词］ 冠状动脉疾病;载脂蛋白类;基因频率;基因型;高脂血症

　　RELATIONSHIP BETWEEN APOLIPOPROTEIN H GENE POLYMORPHISM WITH CORONARY HEART DISEASE AND LIPI-DEMIA

　　QU CHUN-YAN， CUI GUO-FANG， TANG AI-PING

　　（Department of Internal Medicine， Maternal and Child Health Hospital of Laoshan， Qingdao 266101， China）

　　［ABSTRACT］ObjectiveTo study the relationship between the polymorphism of apolipoprotein H （Apo H） exon 3 and exon 8 with coronary heart disease （CHD） and lipidemia. MethodsPolymerase chain reaction and technique of restriction frag-ment length polymorphism were used to detect the genotypes of Apo H exon 3 and exon 8 in 110 patients with CHD and 100 healthy subjects. Lipidemia was also detected. ResultsThere was no difference between CHD group and control group in terms of the frequency of Apo H exon 3 GG， GA+AA genetype， and G and A allele frequency （ χ2 =1.56-2.15，P >0.05）; the fre-quency of GC genetype and C allele of Apo H exon 8 in CHD group was more higher than in the control group （ χ2 =3.91，8.44; P < 0.05）. LDL of Apo H exon 3 in the CHD group was higher than in the control group （ t′=8.30，t=4.06，P <0.05）. There was no difference of lipidemia of other genetype in CHD group and the control group. LDL of Apo H exon 8 in CHD group was more higher than that in control group （ t′=7.97，8.55;P <0.05）.TG of Apo H exon 8 in CHD group was more higher than GG gene-type and other genetype of control group （ t′=4.02 -4.71，P <0.05）. ConclusionThere was no relativity between Apo H exon 3 gene polymorphism and CHD and lipidemia， Apo H exon 8 GC genetype and C allele have something to do with CHD， and Apo H exon 8 gene polymorphism have something to do with TG.

　　［KEY WORDS］coronary disease; apoproteins; gene frequency; genetype; hyperlipidemia
　　
　　人类载脂蛋白H（Apo H）具有多态性，它由单一基因位点上的4个不同等位基因所编码，其中有3个常见等位基因，即: Apo H* 1， Apo H* 2， Apo H* 3，拷贝出6种表型，即3种纯合体表型（H1/1，H2/2，H3/3）和3种杂合体表型（H2/1，H3/1，H3/2）。Apo H* 2是最常见的等位基因。Apo H* 4仅在黑人中出现，频率为0.1%，为黑人特有的遗传标志［1，2］。 Apo H多态性与三酯甘油代谢及血小板功能有关，因而推测其与冠心病（CHD）发病可能有一定的关系，但文献报道极少。本研究以CHD病人为研究对象，以健康者为对照，探讨Apo H外显子 3、8基因多态性与CHD及血脂代谢的关系。

　　1 资料和方法

　　1.1 对象选择 CHD病人110例，男60例，女50例;年龄（ 62.6± 12.4）岁;有陈旧型心肌梗死史或有心绞痛经冠状动脉造影证实病人存在单支、2支或2支以上冠状动脉病变，狭窄程度≥70%;急性心肌梗死或近一个月内用过降脂药物治疗或有严重肝、肾功能障碍者除外。选择100例健康体检者为对照组，其中男60例，女40例;年龄（61.4±13.5）岁。

　　1.2 主要仪器 DNA浓度测试仪由美国 Beckman公司生产，低温高速离心机由法国Jouan公司生产。
　　
　　1.3 研究方法
 
　　1.3.1Apo H基因3、8外显子多态性检测 抽取受检者外周静脉血2 mL，EDTA抗凝后行DNA提取。紫外线可见分光光度仪分别测样品DNA浓度，建立PCR反应体系。 PCR反应条件为:94 ℃预 变性5 min;94 ℃变性45 min， 54 ℃退火45 s， 72 ℃ 延伸45 s，循环29次;最后72 ℃延伸10 min。取PCR产物5 μL，加变性载样液5 μL，混合后99 ℃变性10 min，立即置冰上5 min，加入样品后180 V 4 ℃电泳16 h。电泳凝胶在200 mL体积分数0.30的乙醇和体积分数0.20的醋酸中固定30 min，在 200 mL体 积分数0.30的乙醇中再固定15 min，加入200 mL去离子水培养5 min，反复3次;按SIL-VERTAINING KIT说明步骤进行银染法染色，最后在200 mL 体积分数0.075醋酸中终止反应 10 min。 凝胶成像分析系统成像、拍照。
 
　　1.3.2血脂测定方法 采用酶法测定血清总胆固 醇（TC） 三酰甘油（TG）;CHOD-PAP法测定高密度脂蛋白胆固醇（HDL）及低密度脂蛋白胆固醇（LDL）。

　　2 结果

　　2.1两组Apo H外显子3基因型及等位基因频率的比较 Apo H外显子3基因存在G341A（Ser88Asn）多态性，分别为3种基因型:GG、GA和AA，由于GA和AA基因型例数较少，在统计时将其合并计算。CHD组与对照组的基因型和等位基因频率比较均无显著性差异（ χ2 =1.56～2.15，P >0.05）。 见表1。
　　
　　2.2两组Apo H外显子8基因型及等位基因频率比较 CHD组Apo H外显子8 GC基因型和C等位基因频率明显高于对照组（ χ2 =3.91、8.44，P < 0.05 ）。见表2。

　　2.3Apo H外显子3基因多态性与血脂水平比较 与对照组比较，冠心病组GG和GA+AA基因型病人的LDL水平均显著升高（ t′=8.30， t= 4.06，P <0.05），但同组各基因型间血脂水平比较无明显差异。见表3。

　　2.4Apo H外显子8基因多态性与血脂水平比较 冠心病组GG与GC基因型病人LDL水平显著高于对照组（ t′=7.97、8.55，P <0.05）;冠心病组GC基因型病人TG水平显著高于冠心病GG型病人及对照组（ t′=4.02～4.71，P <0.05）。见表4。

　　表1 两组Apo H外显子3基因型及等位基因频率比较（略）

　　表2 Apo H外显子8基因型及等位基因频率的比较（略）

　　表3 Apo H外显子3各组血脂水平的比较（略）

　　表4 Apo H外显子8各组血脂水平的比较（略）

　　3 讨论

　　Apo H参与TG的代谢，它的表型影响TG的水平，但Apo H在血脂中的作用并未完全阐明。有研究通过对125例健康蒙古Buryut人Apo E及AeoH基因多态性进行的研究发现，Apo H* 2，Apo H* 3等位基因频率最高，Apo H* 1未检到;不同Apo H基因型间血脂水平比较无显著性差异［3］。CASSADEE研究了意大利217例正常人的Apo H与血脂的关系，结果发现，在人群中频率最高的两个表型H2/2、H3/2，具有杂合子H3/2的男性TG水平显著增高，年龄小于50岁的H3/2杂合子者的TG也显著增高［4］。SEPEHRNIA等［4］对尼日利亚黑人的研究发现，与Apo H* 2等位基因相比，Apo H* 3等位基因可显著升高女性TG水平， 平均可提高99.2 mg/L，但对其他脂蛋白水平无影响。夏键 等［5］分析了长沙地区汉族人 Apo H 基因 G1025C （外显子8）多态位点不同基因型对血脂、脂蛋白水平的影响，发现在脑梗死和对照组中GC基因型病人血清TG水平显著高于GG基因型，这与我们的研究结果相似。MEHDI等［6］和KAMBON等［7］分别研究了美国白人Apo H基因多态性对血浆Apo H浓度的影响，结果发现外显子8多态性是Apo H浓度变化的一个决定因素，C等位基因可显著降低血浆Apo H的水平，其可能的机制是C等位基因通过影响Apo H基因启动区的功能及减少mRNA的合成，使Apo H的血浆水平降低。因Apo H对脂蛋白酶的活性有促进作用，最终含C等位基因的个体因脂蛋白酶的活性降低导致TG水平升高。关于ApoH外显子3、8基因多态性与缺血性脑血管病关系的报道较多。夏健等［5］对140例原发性脑出血病人及100例健康人Apo H基因多态性进行了研究，通过对外显子3、7、8基因多态性研究结果表明，国人Apo H有G341A（Ser88Asn）、G817T（Leu247Val）、G1025C（Try316Ser）和T108C多态位点，而T108C位点以前尚未见有文献报道，G341A（Ser88Asn）位点之A等位基因频率与白人相近。研究发现G341A（Ser88Asn）位点在脑出血病人与对照组间有显著差异，而其他3处多态位点在两组中无明显差异。G341A组中A等位基因频率在原发性脑出血病人较对照组显著增高。进一步的研究发现，A等位基因有家族集中分布的倾向，且与脑卒中家族史有关;同时发现G817T（Len247Val）多态性与原发性脑出血组之高血压呈正相关，原发性脑出血高血压病人G341A型A等位基因频率显著高于对照组，故认为G341A型与原发性脑出血发病有关，其机制可能与高血压的介导相关［8，9］。Apo H外显子3、8基因多态性与冠心病关系的研究国内外未见报道。本研究显示，Apo H外显 子8基因多态性与冠心病有关，即冠心病病人GC基因型及C等位基因频率增高，推测GC基因型与C等位基因可能是冠心病的遗传危险因子。本研究未发现Apo H外显子3基因多态性与冠心病有关，但由于本研究是初步的，两者的确切关系还需要进一步研究证实。
　　
　　［参考文献］

　　［1］ 胡 志雄，刘湘林，周杨，等. 载脂蛋白H的新进展及与心脑血管病的关系［J］.中国医师杂志 ，2004（增刊）:340-342.
 
　　［2］ CARDIGAN R A， DONOHOE S， PURDY G， et al. The as-sociation of factor Ⅶa，Ⅻa and beta 2-glycoprotein Ⅰ with tri-glyceride-rich lipoprotein in normolipidaemic subjects［J］. Blood Coagul Fibrinolysis， 1998，9:323-332.

　　［3］ CASSADER M， RUIU G， FAMBINO R， et al. Influence of apolipoprotein H polymorphism on levels of triglycerides ［J］. Atherosclerosis， 1994，110:45-48.

　　［4］ SEPEHRNIA B， KAMBOH M I， ADAMS-CAMPBELL L L， et al. Genetic studies of human apolipoprotein: role of the apo-lipoprotein H polymorphism irrelation to serum lipoprotein concentrations［J］. Hum Genet， 1989，82:118-122.

　　［5］ 夏 键，杨期东，杨期明，等. ApoH基因多态性与脑卒中的相关性研究及其对血脂的影响［J］.中华医学杂志，2003，20:114-118.

　　［6］ MEHDI H， ASTON C E， SANGHERA D K， et al. Genetic variation in the apolipoprotein H gene affects plasma apoli-poprotein H concentrations［J］. Hum Genet， 1999，105:63-71.

　　［7］ KAMBOH C， MANZI S， MEHDI H， et al. Genetic variation in apolipoprotein H affects the occurrence of antiphospholipid antibodies and apolipoprotein H concentrations in systemic lu-pus erythematosus［J］. Lupus， 1999，8:742-750.

　　［8］ SAHARA D K T， KRISTENSEN， HAMMAN R F， et al. Molecular basis of the apolipoprotein H protein polymorphism［J］. Hum Genet， 1997，100:57-62.

　　［9］ 于 辛，邵晓光，谭兰，等. 载脂蛋白E基因多态性与脑梗死的关系［J］.青岛大学医学院学报，2000，36（4）:265-267.

　　（本文编辑 厉建强）

　　（青岛市崂山区妇幼保健院内科，山东 青岛 266101; 青岛市海慈医疗集团心内科）