子宫内膜癌组织TGFβ1及其受体表达和意义

【摘要】  目的 研究转化生长因子β1（TGFβ1）及其Ⅰ型受体（TβRⅠ）在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用RTPCR方法检测72例子宫内膜癌及62例正常子宫内膜组织中TGFβ1及TβRⅠ mRNA的表达水平，分析其与临床病理参数之间的关系。结果 子宫内膜癌组织中TGFβ1 mRNA的表达明显高于正常内膜组织，而TβRⅠ mRNA的表达明显低于正常内膜组织（t=16.57、15.49，P<0.01）。TGFβ1 mRNA及TβRⅠ mRNA在子宫内膜癌中的表达均与肿瘤的临床分期、组织学分级、肌层浸润深度、淋巴结转移有关（F=8.01～25.40，t=3.73～9.68,P<0.05)。结论 TGFβ1及TβRⅠ在子宫内膜癌的发生、发展中可能起重要作用。

【关键词】  子宫内膜肿瘤 转化生长因子β 受体 转化生长因子β

　　EXPRESSIONS AND SIGNIFICANCE OF TGFβ1 AND ITS RECEPTORS  IN ENDOMETRIAL CARCINOMA

　　LI XUEMEI, MA DEHUA, ZHAO SHUPING
　　
　　Department of Gynecology, The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266003, China

　　［ABSTRACT］ Objective To explore the expressions and clinical significance of transforming growth factor β1 (TGFβ1) and its type Ⅰ receptor (TβRⅠ) in endometrial carcinoma. Methods The mRNA expressions of TGFβ1 and TβRⅠ were evaluated by RTPCR in 72 cases  of endometrial carcinoma and 62 normal endometria. Their correlation  with pathological parameters was analyzed. Results The mRNA of TGFβ1  in the cancer tissue was higher than that in the normal one (P<0.05), and the mRNA of TβRⅠ was lower (P<0.05).  The mRNA levels of TGFβ1 and TβRⅠ were related with clincal and histological staging, the depth of muscular infiltration and lymph node metastasis (P<0.05). Conclusion TGFβ1  and TβRⅠ  may play an important role in genesis and development of endometrial carcinoma.

    ［KEY WORDS］ Endometrial neoplasms; Transforming growth factor beta; Receptors, transforming growth factor beta

    转化生长因子β1（TGFβ1）属一类多功能的多肽类细胞因子，已有研究表明TGFβ1在细胞的增殖与分化、细胞外基质形成、血管生长、细胞凋亡、免疫抑制及肿瘤发生中起重要作用。TGFβ1Ⅰ型受体(TβRⅠ)是一种在细胞膜发挥作用的新的抑癌基因，近年来研究认为两者与肿瘤的发生高度相关。子宫内膜癌是一种严重影响妇女身心健康的恶性疾病[1]，但是目前关于 TGFβ1、TβRⅠ在子宫内膜癌组织中表达及其关系的研究结果极不一致。本研究拟通过检测TGFβ1及TβRⅠ在子宫内膜癌组织及正常子宫内膜组织中的表达，探讨其在子宫内膜癌发生、发展中的可能作用及临床意义。

　　1  资料与方法

　　1.1  一般资料

    2003年1月～2006年1月，选取因子宫内膜癌在我院行手术治疗的病人72例，年龄29～73岁，中位年龄55 岁。按照FIGO（2000年）子宫内膜癌分期：Ⅰ期30例，Ⅱ期20例，≥Ⅲ期22例；组织学分级：高分化腺癌32例, 中分化腺癌30 例，未分化腺癌10例；肌层浸润深度≤1/2者44例，肌层浸润深度＞1/2者28例；无淋巴结转移者52例，有淋巴结转移者20例。所有病例均经病理证实，术前均未经任何治疗，临床资料均完整。术中取瘤体组织（>5 cm）迅速置入液氮中速冻，-70 ℃冰箱保存备用。选取同期因子宫肌瘤行全子宫切除的病人正常内膜组织62份作为对照组。

　　1.2  主要试剂和仪器

    RNA提取试剂盒Trizol Reagant为美国Gibco公司产品，引物由上海生物化工有限公司合成，RTPCR试剂盒QIAGEN OneStep RTPCR Kit为德国QIAGEN公司产品。

　　1.3  方法

　　1.3.1  总RNA的提取 

　　取50～100 mg标本，应用Trizol Reagant试剂盒，按照其说明书要求提取RNA，所提取的总RNA用紫外线分光光度计测定A260/A280值，并检测其纯度，其中A260/A280居于1.8～2.0之间认为合格，同时将提取的RNA样品经10 g/L琼脂糖凝胶电泳后比较核糖体RNA（rRNA）28S和18S两条带，如果在EB作用下显色强度为2∶1，说明本实验提取的RNA比较完整，于-70 ℃冰箱保存待用，整个提取过程在无RNA酶的环境下进行，防止RNA酶的污染。

　　1.3.2  RTPCR反应 
　　
　　取0.18 μg细胞总RNA，在50 μL体系中扩增，按照QIAGEN OneStep RTPCR Kit handbook进行。TGFβ1引物序列primer 1:5′CCAGATTGAGACCCTCCTCA3′，primer 2: 5′ATGCAATGCTGTTCTTGCAG3′， 扩增产物长度381 bp；反应条件：94 ℃ 3 min，94 ℃ 45 s， 59 ℃ 45 s 72 ℃ 45 s，共30个循环。TβRⅠ引物序列primer 1：5′GCACGTGGAGATCTTCGGTA3′， primer 2：5′ GTCAGTCC ACTTGTAGGAC3′，扩增产物长度252 bp；反应条件：94 ℃ 5 min，94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，共35个循环。内参照GAPDH的引物序列 primer 1: 5′TCACCATCTTCCAGGAGCGA3′, primer 2: 5′CACAATGCCGAAGTGGTCGT 3′，扩增产物长度为293 bp；反应条件：94 ℃ 3 min，94 ℃ 45 s，59 ℃30 s，72 ℃ 1 min，共28个循环。

　　1.3.3  RTPCR半定量分析 

　　取3 μL PCR产物经20 g/L琼脂糖凝胶电泳分离，用自动电泳凝胶成像分析仪及分析软件进行图像扫描和分析。分别将TGFβ1、TβRⅠ mRNA与GAPDH PCR产物电泳条带扫描灰度值相比，其比值为TGFβ1 及TβRⅠ基因表达数值。

　　1.4  统计学处理

    用SPSS 11.5统计软件进行统计学处理,两组之间比较采用t检验，肿瘤的临床病理参数间的比较采用单因素方差分析，两两比较采用SNK法。

　　2  结果

　　2.1  子宫内膜癌及正常内膜组织TGFβ1、TβRⅠ mRNA的表达

    正常子宫内膜组织TGFβ1、TβRⅠ mRNA表达水平分别为2.96±0.99、2.36±0.51；子宫内膜癌组织中二者表达水平分别为6.01±1.12、1.02±0.49。TGFβ1 mRNA在子宫内膜癌组织中的表达明显高于正常子宫内膜组织（t=16.57，P<0.01）；TβRⅠ在子宫内膜癌中的表达则显著低于正常子宫内膜组织（t=15.49，P<0.01）。

　　2.2  TGFβ1、TβRⅠ mRNA在子宫内膜癌组织表达水平与临床病理参数的关系

    TGFβ1 mRNA在子宫内膜癌组织表达与肿瘤的临床分期、组织学分级、肌层浸润深度、淋巴结转移有关（F=8.01、19.60，t=9.68、5.48,P<0.05）；TβRⅠ mRNA在子宫内膜癌组织表达与肿瘤的临床分期、组织学分级、肌层浸润深度、淋巴结转移有关（F=20.20、25.40，t=3.73、5.12,P<0.05）。见表1、图1。表1  子宫内膜癌中TGFβ1、TβRⅠ mRNA的表达与临床病理参数间的关系（略）
   
　　3  讨 论

    子宫内膜癌近年来发病率呈明显的增高趋势，其发生、进展和转移是一个高度复杂的过程，涉及到多种因素，目前研究较多但尚无定论，其中TGFβ1信号传导途径异常可能起到重要作用。TGFβ1在肿瘤发生和进展过程中的作用很复杂，最初研究认为它只是肿瘤生长抑制因子，但越来越多的研究发现，TGFβ1还通过诱导肿瘤细胞发生上皮间质转变、促进血管生成以及对肿瘤微环境产生免疫抑制效应等促进肿瘤进展[2]。

    TGFβ1受体分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型受体。Ⅰ和Ⅱ型受体是糖蛋白，属于跨膜的丝氨酸苏氨酸激酶，它们之间相互作用，并互为信号，TGFβ1通过Ⅰ型受体介导细胞外基质的合成和沉积，通过Ⅱ型受体介导细胞的生长和增殖。Ⅲ型受体也叫β聚糖，其功能是把结合的TGFβ1传递给其他受体。关于TβRⅡ研究较多，认为可能与肿瘤的信号转导相关，但有研究表明，如果没有TβRⅠ的表达，TβRⅡ介导的信号也不能继续向下传递[3]，而目前有关TβRⅠ与肿瘤的关系研究较少。

    目前研究发现，在多种肿瘤中如前列腺癌、结直肠癌、胃癌、神经胶质瘤和黑色素瘤等TGFβ1 表达增高，TGFβ1表达升高和对作为生长抑制因子的TβRⅠ失去反应性与组织恶性转化及进展相关[4]。然而，对于TGFβ1在子宫内膜癌组织中的表达有两种截然不同的观点。有研究表明，从正常子宫内膜到子宫内膜癌组织，TGFβ1 mRNA表达逐渐降低[5]，认为TGFβ1负调控的削弱直接造成细胞的癌变;但也有文献报道，子宫内膜癌组织TGFβ1的转录和表达均强于正常子宫内膜组织[6]。本研究结果显示，子宫内膜癌组织中TGFβ1 mRNA表达明显高于正常子宫内膜组织，与后者结果相符。本文结果还显示，TβRⅠ在子宫内膜癌组织表达明显低于正常子宫内膜，这与PAREKH等[7]的研究结果相符，后者报道TGFβ1 mRNA在子宫内膜癌中的表达明显少于非瘤组织，我们认为TGFβ1在子宫内膜癌发生、发展中的作用可能与TβRⅠ表达降低密切相关。

    本研究结果还显示，子宫内膜癌中TGFβ1的表达与肌层浸润深度、临床分期、淋巴结转移、组织学分级有关，肌层浸润越深、临床分期越高、组织分化程度越低，TGFβ1 mRNA表达水平越高，有淋巴结转移的子宫内膜癌中的表达明显高于无淋巴结转移者。由此提示TGFβ1 mRNA表达水平在一定程度上反映肿瘤的局部浸润能力与转移潜能，反映肿瘤的负荷和肿瘤进展的程度，可能与肿瘤的转移、分期及预后密切相关。作为具有调节细胞生长和分化功能的超家族多肽的主要成分，TGFβ1在肿瘤的发生发展过程中起着双向调节作用。一般认为，在肿瘤形成早期，TGFβ1具有明显的抑制肿瘤形成的作用，而在肿瘤发生、进展和转移过程中，则起促进作用[8]。结合TGFβ1具有对于正常上皮细胞发挥普遍的生长抑制效应，具有控制细胞生长、促进细胞凋亡作用，我们认为在子宫内膜癌转化的早期阶段， TGFβ1表达轻度增强，其作用是限制肿瘤的恶性转化，在肿瘤进展的过程中， TGFβ1可能是由肿瘤细胞或其周围的基质细胞产生，表达逐渐增强，肿瘤细胞因为TGFβ1的抑制增殖作用消失而出现优势生长，在肿瘤生长的晚期阶段，TGFβ1表达也进一步增强，作为肿瘤的促进因子，可能通过刺激血管生成、细胞播散、免疫抑制及合成细胞外基质等提供肿瘤生长、浸润及转移的微环境。

　　我们将TβRⅠ在子宫内膜癌中的表达与肿瘤病理参数相联系显示，深肌层浸润者表达明显低于无或浅肌层浸润者，组织学分化差者表达水平低于高分化者，低分化及深肌层浸润是子宫内膜癌重要的预后高危因素[9]，提示TβRⅠ含量降低可能预示病人预后不良。TβRⅠ在子宫内膜癌中的表达还与临床分期、淋巴结转移有关，淋巴结有转移者TβRⅠ的表达低于无转移者，随临床期别的增高TβRⅠ表达降低。结合TGFβ1与子宫内膜癌临床病理参数的关系，我们认为，TβRⅠ表达水平与TGFβ1 mRNA的表达呈反相关系，提示可能在肿瘤形成早期，TβRⅠ水平降低使TGFβ1对肿瘤抑制的信号不能传递，反射性地引起TGFβ1表达水平的增高，而高水平的TGFβ1 是肿瘤发展转移的一个促进因素，TβRⅠ缺失或表达下降可能是子宫内膜癌形成及发展过程的一个环节。这与MURAOKA等[2]的研究结果类似， 后者认为TGFβ1 丧失对肿瘤细胞生长的负性调控作用与Ⅰ型受体表达下降或缺如有关，Ⅰ型受体的异常表达，失去了与TGFβ1 的结合的能力，TGFβ1 生长抑制信号不能传入细胞内,从而导致肿瘤细胞逃逸TGFβ1 的生长抑制效应。肿瘤细胞对TGFβ1诱导的生长抑制信号失去敏感性，从而使TGFβ1抑制免疫反应,刺激血管生成，促进肿瘤外基质形成的作用表现出来[10]。

    TGFβ1的表达增高及TβRⅠ的表达缺失或减少与子宫内膜癌的发生、发展、转移及预后密切相关，通过研究TGFβ1及其受体的异常表达，可进一步阐明子宫内膜癌发生发展的规律，提出选择性治疗方案，逆转异常调节，对提供子宫内膜癌的早期诊断及有效的防治措施可能具有重要意义。

【参考文献】
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　　[2]MURAOKA R S, DUMONT N, RITTER C A, et al. Blockade of TGFbeta inhibits mammary tumor cell viability, migration, and metastases[J]. J Clin Invest, 2002,109(12):15511559.

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　　[6]彭幼兰,叶海燕,罗东兰. 子宫内膜癌组织中转化生长因子β1及其受体表达的临床研究[J]. 广东医学, 2005,26(10):13961397.

　　[7]PAREKH TV, GAMA P, WEN X, et al. Transforming growth factor beta signaling is disabled early in human endometrial carcinogenesis concomitant with loss of growth inhibition[J]. Cancer Res, 2002,62(10):27782790.

　　[8]朱红,项锋钢. TGFβ1 mRNA在肺腺癌组织中的表达[J]. 青岛大学医学院学报, 2007,43(5):419420.

　　[9]郎景和. 子宫内膜癌诊治的几个问题[J]. 中华妇产科杂志, 2000,35(5):261263.

　　[10]TEICHER B A. Malignant cells, directors of the malignant process: role of transforming growth factorbeta[J]. Cancer Metastasis Rev, 2001,20(1/2):133143.

作者单位：青岛大学医学院附属医院妇产科，山东 青岛 266003