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【摘要】 目的 探讨Survivin 和eIF4E在喉鳞癌组织中的表达及其相互关系。方法 应用免疫组化法测定40例喉鳞癌组织标本及20例声带息肉组织中Survivin 与eIF4E的表达，并进行比较。结果 Survivin在喉鳞癌标本中的阳性表达率为65%,而在声带息肉组织中的阳性表达率为25%，二者比较差异有显著性(χ2 =12.19，P<0.05)。Survivin的表达与喉鳞癌临床分期、分化程度有明显的相关性(χ2=8.993、7.238，P<0.05)，而与淋巴结转移无相关性（χ2=1.134,P>0.05）。eIF4E在喉鳞癌和声带息肉组织中的阳性表达率分别为97.5%和65.0%,二者比较差异有显著性（χ2=8.54,P<0.05）,其与临床分期、分化程度、淋巴结转移情况无明显相关性（χ2=0.054～2.477，P>0.05）。Survivin 和eIF4E在喉鳞癌组织中的表达无相关性(r=0.11,P>0.05)。结论 Survivin 与eIF4E在喉鳞癌组织中的过度表达与喉鳞癌的发生有关，但两者在喉癌组织中表达的相关性还有待进一步研究。
【关键词】 喉肿瘤 Survivin蛋白质 eIF4E蛋白质 免疫组织化学
THE EXPRESSIONS OF Survivin AND eIF4E IN LARYNGEAL SQUAMOUS CELL CACINOMA AND THEIR CORRELATION
LI FU, ZHAO SHU²YOU
(Department of Otolaryngology, Qingdao Municipal Hospital, Qingdao University Medical College, Qingdao 266011, China) ;
［ABSTRACT］ Objective To investigate the expressions of Survivin and eIF4E in laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC) and their correlation with this disease. Methods Expressions of Survivin and eIF4E in specimens of 40 LSCC and 20 cases with polyp of vocal cord (PVC) were detected via immunohistochemical technique. Results The positive rates of Survivin were 65% in LSCC and 25% in PVC, the difference was significant (χ2=12.19,P<0.05). Survivin expression was correlated with the clinical stage and the tumor differentiation (χ2=8.993,7.238;P<0.05), but not with lymph²node metastasis (χ2=1.134,P>0.05). The positive rates of eIF4E in LSCC and PVC were 97.5% and 65.0%, respectively, the difference was significant (χ2=8.54,P<0.05). The expression eIF4E in LSCC was not correlated with the clinical stage, tumor differentiation and lymph²node metastasis (χ2=0.054-2.477,P>0.05).There was no correlation between the expressions of Survivin and eIF4E LSCC (r=0.11,P>0.05). Conclusion Overexpressions of Survivin and eIF4E are associated with the pathogenesis of LSCC, but the relationship between the two expressions in the disease needs further study.
［KEY WORDS］ Laryngeal tumor; Survivin protein; eIF4E protein; Immunohistochemistry
Survivin 是新近发现的一种结构独特的哺乳类凋亡抑制蛋白，表达于人与鼠的胚胎发育组织和人类的大多数肿瘤组织中，但在成人组织中不表达(胸腺除外)，其与肿瘤的发生和发展有关。它还参与细胞周期的调控。以Survivin基因为靶点的基因治疗，为肿瘤的治疗提供了新思路。eIF4E是一种胞浆蛋白，直接参与蛋白质的翻译起始阶段。它的过度表达可以导致细胞明显异常，包括细胞的快速增殖和恶变，其与多种肿瘤的发生相关。本实验采用免疫组化SP法检测喉鳞癌组织中两者的表达以及两者之间的关系，探讨其与喉癌病人临床及病理特征的关系。现将结果报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集我院2002～2005年喉鳞癌标本40例,男37例, 女3例; 年龄39～78岁, 平均58岁。根据2002年AJCC 的TNM分类分期标准：Ⅰ期19例，Ⅱ期10例，Ⅲ期9例，Ⅳ期2例。组织病理学分级：高分化鳞癌21例, 中分化鳞癌18例, 低分化鳞癌1例。其中2例术前检查发现有颈部淋巴结转移, 术后经病理证实。选取20例声带息肉组织作为对照。所有标本都经40 g/L的甲醛溶液固定，石蜡包埋，4 μm层厚连续切片。
1.2 试剂
山羊抗人Survivin多克隆抗体、山羊抗人eIF4E多克隆抗体均购于上海康成生物制品有限公司。免疫组化试剂盒购于福州迈新生物技术开发公司。
1.3 方法
石蜡切片脱蜡水化后, 用PBS 冲洗。体积分数0.03的过氧化氢灭活内源酶，非免疫动物血清阻断，加一抗,4 ℃冰箱过夜。PBS冲洗,加生物素标记的二抗,室温下孵育20 min。PBS 冲洗, 加链霉亲和素²过氧化物酶室温下孵育10 min。PBS 冲洗3次,滴加新鲜配制的DAB溶液, 冲洗, 苏木精复染，中性树胶封固。
1.4 结果判断
Survivin、eIF4E阳性表达为细胞浆及细胞核中出现棕黄色和淡染黄色颗粒。阳性判断采用半定量积分方法,积分≥3分为阳性，积分<3分为阴性。
2 结果
2.1 Survivin阳性表达情况
Survivin在喉鳞癌组织中阳性表达率为65%;而在声带息肉组织中的阳性表达率为25%,二者比较差异有显著性(χ2 =12.19，P<0.05)。见表1。Survivin表达与肿瘤临床分期、病理分化程度相关（χ2=8.993、7.238，P<0.05），而与淋巴结转移无相关性（χ2=1.134,P>0.05）。见表2。
2.2 eIF4E阳性表达情况
eIF4E在喉鳞癌组织中的阳性表达率为97.5%；而在声带息肉组织中的阳性表达率为65.0%，二者比较差异有显著性(χ2 =8.54，P<0.05)。见表1。eIF4E表达与肿瘤临床分期、病理分化程度、淋巴结转移情况无明显相关性（χ2=0.054～2.477，P>0.05）。见表2。
表1 Survivin、eIF4E蛋白在不同组织中的表达情况（略）
表2 Survivin 和 eIF4E 与喉鳞癌临床病理参数之间的关系（略）
2.3 Survivin 与eIF4E表达的相关性
喉癌组织中,39例eIF4E蛋白阳性表达, 其中25例Survivin蛋白阳性表达;14例Survivin蛋白阴性表达的喉癌组织中，14例eIF4E蛋白阳性表达。相关性分析结果显示，二者的表达无显著相关性(r=0.11,P>0.05)。
3 讨论
肿瘤是严重危害人类健康的疾病，医学领域对肿瘤的研究已经进入了基因水平。因而肿瘤基因标志物在头颈部肿瘤诊断和治疗中的作用将越来越重要。人们可以通过检测肿瘤标志物,对肿瘤进行早期准确诊断和有效治疗,为病人提供良好的治疗时机,改善预后。
细胞凋亡是机体重要的生理过程,越来越多的研究表明，恶性肿瘤的发生发展与细胞凋亡、增殖调节失控密切相关。Survivin基因约由1.5×103个碱基对组成,定位于染色体17q25上，有4个外显子和3个内含子,编码链包含1个与EPR²1 基因互补的426个核苷酸开放阅读框架。Survivin基因可能是通过抑制正常细胞凋亡信号传导通路,使一些受损细胞逃避机体免疫系统的监视而无法清除,从而异常存活、累积形成优势克隆而参与肿瘤的发生、发展[1～6]；它还参与细胞周期的调控。Survivin 蛋白是一种结构独特的哺乳类凋亡抑制蛋白，是由142个氨基酸组成的胞质蛋白,在正常成年组织中不表达，广泛表达于人类的各种恶性肿瘤中，如胃癌[3]、食管癌[6]等。本研究结果显示，Survivin蛋白在喉癌组织中也有较高的表达，并与临床分期和病理分化程度相关，且随着临床分期的增高和病理分化程度的降低，Survivin蛋白的阳性表达率也升高，提示Survivin基因可能参与喉癌的发生，并与喉癌自然病程相关,可能影响喉癌的发生、发展，此可为喉癌的诊断和预后提供依据。
eIF4E 基因是近年来发现的又一种重要原癌基因,可特异性地与真核细胞mRNA 的5′端帽结构结合,参与mRNA的翻译,在帽依赖的翻译起始阶段起限制调控作用。eIF4E 的过度表达不仅能促进细胞的增殖反应,而且更能促进细胞的恶性转化[4]。近年来研究显示，eIF4E 过度表达与多种恶性肿瘤的发生及发展有关, 其机制可能是通过提高血管内皮生长因子、纤维母细胞生长因子、血管渗透因子的翻译促肿瘤血管生成,或通过c²myc、cyclin D1 调节细胞周期,促进细胞增生[5]。本研究表明，eIF4E蛋白在喉癌组织中表达程度较高，阳性率高达97.5%，提示喉癌的发生与eIF4E相关，癌基因eIF4E可能参与喉癌的发生和发展，并且eIF4E蛋白在喉癌中表达较敏感，可以考虑将其作为喉癌早期诊断的病理学参考指标。ZHOU等[7]用免疫组织化学方法检测122例乳癌石蜡标本显示，eIF4E过表达,且过表达的eIF4E与肿瘤血管生长及侵袭相关,与肿瘤病理分级、临床分期相关, eIF4E的表达越高病人预后越差、无瘤生存时间越短,认为eIF4E可以作为乳癌独立的预后指标。本研究显示，eIF4E与临床分期、病理分化程度及淋巴结转移无相关性，故认为其不能作为一种判断喉癌病人预后因素来考虑。齐鲁医学杂志2009年4月第24卷第2期 Med J Qilu, April 2009, Vol.24, No.2
总之，喉癌发生是一个多基因、多步骤、多阶段的复杂过程。本文提示Survivin与eIF4E和喉癌的发生均有关，但两者在喉鳞癌中的表达无相关性，二者在喉鳞癌中表达的关系还有待进一步研究。
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作者单位：青岛大学医学院附属青岛市市立医院耳鼻咽喉科,山东 青岛 266011