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【摘要】 目的 探讨子宫内膜异位症（EM）病人异位内膜和在位内膜中核受体共激活因子(AIB1)蛋白的表达，以及其与雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）表达的关系。方法 采用免疫组化法，分别检测45例EM病人的异位内膜和在位内膜以及42例正常子宫内膜(对照组)的AIB1、ER、PR蛋白的表达。结果 异位内膜和在位内膜AIB1的表达均显著高于对照组 (t=15.897、14.430,P<0.01);异位内膜中ER、PR的表达显著低于对照组 (t′=4.482、2.937,P<0.05)；异位内膜中AIB1与ER呈负相关(r=-0.712,P<0.01)。结论 AIB1、ER和PR 在子宫内膜中的异常表达可能与EM的发生发展有关。
【关键词】 核受体共激活因子 子宫内膜异位症 性腺甾类激素 免疫组织化学
子宫内膜异位症（EM）虽是生育期妇女常见的良性疾病，却具有侵袭、种植等恶性行为特点。已有研究结果表明，EM是一种雌激素依赖性疾病，雌、孕激素通过作用于核受体活化相应的转录过程，对子宫内膜的生长发挥调控作用。核受体共激活因子(AIB1)能够与核受体相互作用, 可以强烈地增强其活性，激活靶基因转录的效应。已有研究证明，AIB1与子宫内膜癌、乳癌等激素依赖性肿瘤的发生、发展、复发、转移、治疗、预后等各个方面相关，但关于AIB1在EM中表达的研究鲜有报道。本实验通过免疫组化的方法观察AIB1在EM在位及异位内膜中的表达情况，以及与雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）的相关性，探讨AIB1、ER、PR在EM发病机制中的可能作用。现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本及其来源
2004年9月～2007年1月，选取青岛大学医学院附属医院妇科因卵巢EM行全子宫及双侧附件切除术病人的异位和在位内膜标本45例，经病理学检查确诊，其中增生期24例，分泌期21例；病人年龄39.5～48.5岁，平均（45.7±3.0）岁；用修订的美国生育协会评分法(rAFS) 进行分期,其中Ⅰ～Ⅱ期20例,Ⅲ～Ⅳ期25例。选取同期因子宫颈原位癌行子宫切除的正常子宫内膜标本42例作为对照组,病人年龄38.0～51.5岁，平均(43.0±2.0)岁；增殖期22例，分泌期20例。所有病人术前3个月内均未接受性激素及抗EM药物治疗，无其他内分泌病史，月经周期根据末次月经及子宫内膜病理学诊断结果确定。
1.2 检测指标及方法
采用免疫组化SABC法分别检测EM异位内膜、在位内膜以及对照组内膜中AIB1、ER和PR的表达情况。山羊抗人多克隆抗体AIB1由美国Santa Cruz公司生产。ER、PR一抗单克隆抗体IgG、即用型SABC免疫组化染色试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。实验步骤均严格按照说明书进行。取已知阳性乳癌切片作为阳性对照，PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。
1.3 结果判定
免疫组化染色结果利用德国Sample PCI图像分析系统进行测量分析，结果以吸光度（A）表示。每张切片测定5个视野（200倍），取平均值。
1.4 统计学方法
采用SPSS及PPMS 1.5［１］统计学软件进行数据处理，数据间比较采用t检验和方差分析；相关性比较采用Spearman 相关分析。
2 结 果
2.1 各组子宫内膜中各检测指标表达的比较
AIB1蛋白阳性染色大部分以胞浆为主，部分胞核染色；ER、PR主要在腺上皮细胞核内表达,但也有少量表达于间质中。AIB1在异位、在位内膜中的表达显著高于对照组内膜(t=15.897、14.430,P<0.01)。异位内膜中ER、PR表达显著低于对照组（t′=4.482、2.937,P<0.05）。见表1。
2.2 各组子宫内膜增殖期与分泌期各检测指标表达的比较
AIB1在增殖期异位和在位内膜的表达高于相应期别的对照组内膜，差异有显著性(F=409.15,q=33.391、36.906,P<0.01)。AIB1在分泌期异位内膜表达显著高于相应期别的对照组内膜(F=5.96,q=4.883,P<0.01）。ER、PR在增殖期异位内膜的表达显著低于同期对照组（F=6.66、3.26,q=5.158、3.547,P<0.05、0.01）。对照组增殖期与分泌期AIB1、ER表达差异有显著性（t=20.511、4.319,P<0.01）。见表2。
2.3 各组子宫内膜中AIB1与ER及PR的相关性
异位内膜中AIB1与ER呈显著负相关(r=-0.712,P<0.01)。而其他内膜中AIB1与ER、PR均无相关性（r=0.467、0.314，P>0.05)。
3 讨 论
AIB1是类固醇激素受体共激活因子SRC家族中的一员，又称为SRC3。AIB1与甾体类激素受体相互作用,通过多种机制增强靶基因转录和表达,在许多生物学过程中发挥重要作用［2］,因此在很多正常组织中均有表达［3］。GLAESER 等［4］研究结果显示， AIB1在乳癌、前列腺癌、子宫内膜癌等激素依表1 AIB1和ER、PR在3组内膜中的表达比较表2 AIB1和ER、PR在3组内膜增殖期及分泌期的表达比较赖性肿瘤组织中过表达，可能作为一种致癌因子,并影响其激素治疗的敏感性及预后。而EM的发生发展与雌激素密切相关,是一种激素依赖性疾病,但其发病机制至今尚未完全明确。因此，AIB1作为激素受体信号传导通路的重要调节元件而成为目前研究的重点。
ANZICK 等［5］将外源性的AIB1 cDNA 转染入低表达AIB1 的乳癌细胞中, 由其衍生的高表达AIB1 mRNA克隆中ER总体的转录活性增强20倍,进而促进细胞增殖和肿瘤的形成。本文结果显示，AIB1在EM异位、在位内膜表达均显著高于对照组。提示上调的AIB1蛋白很可能通过增强核受体的活性，促使子宫内膜对雌激素的敏感性提高，从而引发内膜细胞增殖，易于内膜异位种植和生长。子宫内膜细胞上ER、PR与相应激素结合后发挥作用，并且ER、PR的合成和循环利用等过程受雌、孕激素影响［6］。本实验结果显示，异位内膜中ER、PR表达均低于对照组。提示异位灶激素受体含量减少，可能与局部雌激素代谢异常以及雌激素效应发生改变有关。
关于EM病因现已提出一系列学说，如SAMPSON经典经血倒流学说、间皮化生学说、免疫学说等，但任何学说均不能完美解释EM。郎景和［7］提出了EM的“在位内膜决定论”，认为EM发病与否取决于在位内膜的特性，经血逆流只是实现EM由潜能到发病的桥梁。这一学说是对经血逆流种植学说的重大修正，很好地解释了大多数妇女有经血反流但仅一部分妇女患病的现象。本文研究结果显示，EM在位内膜AIB1的表达显著高于对照组，提示EM病人在位内膜可能因为AIB1的过度表达使ER活性被激活，雌激素效应发生改变，继而产生比对照组内膜更强的黏附、侵袭和血管形成能力。特性改变的在位内膜一旦有机会逆流至腹腔，便很容易产生异位病灶。本研究结果还显示， AIB1、ER在对照组内膜表达均存在显著周期性，而EM在位内膜组AIB1、ER则均丧失此变化。以上两者佐证了“在位内膜决定论”的观点，证明EM发生不只是“条件致病”，其在位内膜的生物学行为与正常子宫内膜有本质区别，是解释EM的家族倾向和遗传性的理论基础。
GREGORY 等［8］研究显示，正常育龄期妇女月经周期内膜中AIB1 的表达受到调控, 分泌晚期AIB1基因的表达会明显升高。此外，无排卵的多囊卵巢综合征(PCOS) 病人增殖期内膜AIB1 表达水平也明显升高,更易患雌激素依赖的子宫内膜增生和内膜癌。有关AIB1在EM的研究鲜有报道。本文结果同GREGORY等的研究结果一致，对照组内膜中AIB1的表达受到调控，分泌晚期AIB1基因的表达显著增高；而AIB1在EM病人的异位、在位内膜中均失去周期性变化规律，且在异位内膜增殖期和分泌期、在位内膜的增殖期表达均显著高于相应期别的对照组内膜。提示AIB１促进异位灶形成的过程贯穿于整个月经周期，可能是病程迁延不愈的原因。由于雌激素可在转录水平促进ER、PR的合成,孕激素则在转录和转录后水平抑制二者的合成,正常子宫内膜受增殖期高雌激素和分泌期高孕激素的影响,呈现周期性变化［6］。本文实验结果提示，异位内膜增殖期ER、PR含量较同期对照组高,且异位和在位内膜的ER、PR丧失了正常周期变化规律，可影响到局部雌激素代谢,致异位内膜呈现不成熟的生长而使异位灶持续增长,有可能是激素治疗失败的原因之一。
既然AIB1是性激素受体辅活化因子,它在EM中与雌、孕激素受体的关系如何？目前，关于AIB1与激素受体的相关性研究结果始终没有达成共识。KERSHAH等［9］研究结果显示，在正常子宫内膜组织中AIB1与ERa存在明显的正相关，而BUORAS等［10］认为乳癌组织中SRC3/AIB1蛋白水平的表达强度与ER和PR的缺失有关，二者呈负相关。本实验显示,异位内膜中AIB1与ER表达呈负相关,与PR无相关性，此与BUORAS等［10］的研究结果一致。SHAOW等［11］研究认为，AIB1关系到ER的转录活性和稳定性。在存在较低ER的情况下，AIB1能通过表达上调，并和许多转录因子相互作用而促发EM进展。关于二者呈负相关的具体机制仍需进一步研究证实。
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作者单位：青岛大学医学院附属医院妇产科，山东 青岛 266003