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【摘要】 目的 探讨胃癌病人外周血白细胞中DNA 修复基因XPD751基因多态性与奥沙利铂化疗效果的关系。方法 收集经病理学检查确诊的胃癌128例，所有病例化疗前取静脉血，提取白细胞DNA，用TaqManMGB探针等位基因分型技术检测XPD751基因型。比较其基因型与接受奥沙利铂化疗病人临床疗效的关系。结果在128例胃癌病人中，XPD751 A/A、A/C和C/C基因型分别为 104(81.3%)、23(17.9%)和1例(0.8%)。经化疗后，63例病人有效，总有效率为49.2%。XPD751 A/A、A/C+C/C基因型有效率分别为53.3%(56/105)、30.4% (7/23)，两者相比差异有统计学意义（χ2=3.958，P＜0.05）。携带A/A基因型病人的腹泻程度高于A/C+C/C基因型病人（χ2=7.212，P＜0.05）。结论 XPD751基因多态性可能与胃癌对奥沙利铂为基础的化疗敏感性相关。
【关键词】 胃肿瘤 XPD基因 多态性,单核苷酸 奥沙利铂
THE RELATIONSHIP BETWEEN GENETIC POLYMORPHISM OF XPD751 AND SENSITIVITY TO OXALIPLATINBASED CHEMOTHERAPY IN PATIENTS WITH GASTRIC CANCER
SUN YINGYING, LIANG JUN, YUAN SHENGLI, et al
(Department of Oncology, The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266021, China);
［ABSTRACT］ Objective To investigate the relationship between genetic polymorphism of peripheral blood monocytic cell (PBMC) DNA repair gene XPD751 and therapeutic effect of oxaliplatinbased chemotherapy in patients with gastric cancer. Methods A total of 128 patients with gastric cancer were recruited for the study. PBMC DNA was abstracted from venous blood obtained from patients before chemotherapy, and XPD751 genotypes were detected with TaqManMGB probes. Results Of the 128 cases, the frequencies of XPD751 A/A, A/C and C/C genotype were 104 (81.3%), 23 (17.9%) and 1 (0.8%), respectively. The overall response rate of the therapy was 49.2% (63/128). The response rates in patients with XPD751 A/A, A/C+C/C genotype were 53.3% (56/105), and 30.4% (7/23), respectively, the difference of the efficacy between the two genotypes was significant (χ2=3.958,P＜0.05). The incidence of diarrhea in A/A genotype patients was higher than those of A/C+C/C genotype(χ2=7.212，P＜0.05). Conclusion The polymorphism of XPD751 gene might be associated with the clinical responses of patients with gastric cancer receiving oxaliplatinbased chemotherapy.
［KEY WORDS］ stomach neoplasms; XPD gene; polymorphism, single nucleotide; oxaliplatin
以奥沙利铂为基础的联合化疗是胃癌术后辅助治疗及晚期胃癌治疗的主要方法之一[1]。奥沙利铂作为新一代铂制剂对胃癌、结直肠癌有较好的疗效，常作为临床一线化疗药物。但不同个体接受相同的化疗方案、相同的药物剂量后，疗效及耐受性方面存在较大的个体差异。研究发现，着色性干皮病基因（XPD）第751密码子A向C多态转化与核苷酸切除修复（NER）功能改变有关，可能影响奥沙利铂化疗的疗效及预后[24]。本文对128例胃癌病人XPD基因多态性与奥沙利铂为基础的联合化疗方案的疗效关系进行了研究，以探讨XPD基因多态性与奥沙利铂化疗敏感性的关系。
1 材料与方法
1.1 标本来源
收集2007年9月8日—2009年1月4日我院肿瘤科收治的胃癌病人128例，男76例，女52例；年龄31～74岁，中位年龄59岁。所有病例均经病理学确诊，CT检查有可测量肿瘤病灶。按照AJCC TNM (2002)分期，Ⅲ期病人58例（ⅢA期23例，ⅢB期35例），Ⅳ期病人70例。化疗前病人血常规、肝肾功能均正常，心电图无明显异常，Karnofsky评分均>60分。所有病人均接受奥沙利铂为基础的联合方案化疗，其中接受xelox方案治疗54例，folfox方案治疗74例。以上化疗方案均每3周为1个周期，所有病例均在化疗2个周期后评定疗效。参照RECIST实体瘤近期客观疗效评定标准分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定(SD)和进展(PD)，以CR+PR为有效。不良反应评价参照WHO标准。
1.2 标本收集
所有病例均在化疗前取静脉血3 mL，EDTA2Na抗凝，用小量血液DNA提取试剂盒提取白细胞DNA, 并置于-20 ℃低温冰箱冻存备用。
1.3 主要仪器及试剂
主要仪器：微量离心机 SIGMA 113（Sigma公司，德国），高压消毒柜(Microm series SA300VA STURDY INDUSTRIAL CO.LT)，电热恒温干燥箱(山东医疗器械厂)，紫外线分光光度仪 DUOR 640(Beckman，USA)，RotorGene荧光定量PCR仪RG3000(澳大利亚Corbett Research公司)。 主要试剂：小量血液DNA提取试剂盒（北京百泰克生物技术有限公司）、20×Taqman SNP Genotyping Assay Mix及Taqman Universal PCR Master Mix（Applied Biosystems, Foster City, CA）。
1.4 实验方法
采用小量全血基因组DNA提取试剂盒（离心柱法）提取外周血DNA。采用TaqManMGB探针等位基因分型技术[5]对外周血DNA XPD基因751位点进行基因分型。PCR 反应总体积25 μL，含样本DNA 4 μL，20×TaqManSNP基因分型试剂1.25 μL，TaqMan 通用PCR扩增试剂12.5 μL，超纯水7.25 μL。每25 μL反应体系中含DNA 20 ng。SNP基因分型试剂含一对扩增引物，两条MGB探针，一条以VIC标记碱基T，对应样本基因突变位点为A；一条以FAMTM标记碱基G，对应样本基因突变位点为C。用RotorGene RG3000荧光定量PCR仪进行SNP分型。反应条件为：95 ℃ 10 min，92 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，共38个循环。
1.5 统计学方法
采用SPSS 13.0统计软件进行统计分析。以HardyWeinberg 遗传平衡定律检验基因分布情况，采用χ2检验及Fisher精确检验分析不同基因型的分布频率，并比较各基因型在不同疗效组的分布差异。用Logistic回归模型校正病人的年龄、性别、分化、转移灶数目、ECOG评分、化疗方案、TNM分期等因素后，分析不同基因型与化疗疗效之间的关系，并计算相对危险比（OR）及其95％可信区间（CI），表明不同基因型个体的化疗敏感性。
2 结果
2.1 基因型分布
本研究中128例胃癌病人XPD基因751位密码子存在3种等位基因型，其频率分别为：A/A型104例(81.3%), A/C型23例(17.9%), C/C型1例(0.8%)。经χ2检验差异无显著性,符合HardyWeinberg遗传平衡规律，因此该人群具有代表性。
2.2 XPD基因型与化疗敏感性关系
128例胃癌病人治疗2周期后评价疗效，总有效率为49.2%。由于XPD751 C/C基因型病人例数过少，将其与A/C基因型合并。并按疗效将病人分为敏感（CR+PR）组和不敏感（SD+PD）组。XPD751基因型A/A与A/C+C/C在化疗敏感组中分别为56例（53.3%）、7例（30.4%），而在不敏感组中分别为49例（46.7％）、16例（69.6%）。两组间分布频率的差异具有统计学意义（χ2=3.958，P＜0.05）。经Logistic回归统计校正此组病人的年龄、性别、分化、转移灶数目、ECOG评分、化疗方案、TNM分期等因素后，XPD基因型仍与化疗敏感性明显相关（P=0.042），其OR值为1.98，提示XPD基因第751位密码子携带A/A基因型的个体化疗敏感性是A/C与C/C合并基因型的1.98倍,其95%CI为1.268～8.984。
2.3 XPD751基因型与胃癌化疗不良反应的关系
91例胃癌病人不良反应主要表现为骨髓抑制、恶心呕吐、腹泻、脱发及肝功能损害，以≤Ⅱ度为主。携带 A/A基因型的病人的腹泻程度高于A/C+C/C基因型病人，差异有统计学意义（χ2=7.212，P＜0.05）。而在骨髓抑制、恶心呕吐、脱发和肝脏损害方面，两型差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。表1 XPD基因多态性与胃癌化疗不良反应的关系（略）
3 讨论
研究表明，铂类药物进入肿瘤细胞后，形成PtDNA加合物，使DNA内部和DNA之间形成交联，破坏DNA结构。如果肿瘤细胞DNA修复能力降低，PtDNA清除减少，病人对铂类药物的临床缓解率相应提高，疗效提高。XPD基因是DNA修复基因之一，其编码的蛋白是一种ATP依赖的DNA解螺旋酶，是Ⅱ型转录因子H（ⅡH）的重要组成部分，参与了DNA核苷酸切除修复过程，在DNA损伤修复中起着重要作用[6]。
XPD基因多态性可以改变DNA修复能力，与铂类药物的化疗敏感性密切相关。第751位密码子是XPD基因研究最多的位点之一，而且其突变表型与DNA损伤修复能力密切相关。许多临床研究表明，携带XPD751 A/A基因型的病人对铂类药物化疗更为敏感。LUNN等[7]报道，XPD751 A/A基因型可提高染色体畸变的水平，降低DNA损伤修复能力。西班牙肺癌协作组对52例接受铂类药物化疗的Ⅳ期肺癌病人进行分析发现，XPD751 A/A基因型病人的中位疾病进展时间较长，而C/C型病人的生存趋势较差。PARK等[8]报道，接受5Fu+奥沙利铂治疗的转移性肠癌病人，XPD751基因多态性与化疗疗效有关，A/A基因型病人获得了更高的客观缓解率(P=0.015)；中位生存期也与该多态性显著相关，A/A基因型病人中位生存期为17.4个月，而A/C杂合子为12.8个月，C/C纯合子为3.3个月。SARRIES等[9]对109例接受吉西他滨顺铂化疗的晚期非小细胞肺癌病人外周血中XPD 751和312密码子的SNP进行检测显示，XPD 751密码子的突变与中位疾病进展时间(TTP)和MST明显相关, 312密码子的突变与MST明显相关，与TTP无关。尹智华等[10]研究结果显示，非吸烟女性人群中携带XPD751 A/C或C/C基因型的个体罹患肺癌的风险是携带A/A基因型个体的2.80倍。但也有报道认为，XPD基因多态与铂类化疗敏感性无相关性。ROSELL等[11]的研究表明，XPD基因第751位密码子多态性和化疗效果的关系与化疗药物的联合使用有关，在接受吉西他滨+顺铂治疗的进展期NSCLC病人中，具有A/C基因型病人的疾病进展时间(9.6个月)明显长于具有A/A基因型的病人(4.2个月，P=0.03）。齐鲁医学杂志2010年4月第25卷第２期 Med J Qilu, April 2010, Vol.25, No.２
目前，XPD751基因型与铂类药物敏感性的关系在胃癌病人中的研究较少见。本文的研究结果显示，XPD751 A/A、A/C、C/C等3种基因型频率分别为81.3%、17.9%、0.8%，纯合突变型呈低频分布，符合亚洲人群中该基因位点分布[12]。携带XPD751 A/A和A/C基因型的病人，客观有效率分别为53.3%、30.4%，携带A/C基因型病人化疗失败的可能性是A/A基因型病人的1.98倍，携带A/A基因型病人的腹泻程度高于A/C和C/C基因型病人。这些均提示，在胃癌病人中，XPD751基因型与铂类药物化疗敏感性有相关性，检测XPD751基因型可以预测胃癌化疗的敏感性。但本研究例数较少，且为单中心研究，结果可能会产生偏倚，需要进行大样本、多中心研究详细分析、论证，以期更好地指导胃癌病人的个体化治疗。
【参考文献】
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