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关键词 慢性充血性心力衰竭 细胞凋亡
Clinical significance of serum levels of soluble Fas，soluble
Fas ligand and sTNFR-Ⅱin patients with chronic congestive heart failure
Xie Songye，Ding Xing，Cai Yiting，et al.
Shanghai First People’s Hospital，Shanghai200080.
【Abstract】 Objective To observe the serum levels of soluble Fas（sFas）and soluble Fas ligand（sFasL）and soluble tumor necrosis factor receptorⅡ（sTNFR-Ⅱ）in patients with chronic congestive heart failure（CHF）and anˉalyze their clinical significances.Methods Enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）was usedfor detection of sFas，sFasl and sTNFR-Ⅱ.Results sFas in patients with CHF were higher than that in the control group（P<0.01）.sFas in patients with heart function of grade（NYHA）ⅢandⅣwere higher than that in patients of gradeⅠandⅡ（P<0.01），sFasL were also higher than that in the control group（P<0.01）.The serum level of sFasL was not different in patients with heart function of gradeⅠ，Ⅱand that in the control group（P>0.05）.sTNFR-Ⅱin the patient with CHF were higher than that in control group（P<0.01）.sTNFR-Ⅱin patients with heart function（NYHA）ofⅢandⅣclasses were higher than that in patients ofⅠandⅡclasses（P<0.01）.Moreover，sTNFR-Ⅱand sFas，sFasL were positively correlated in patientswith CHF（P<0.01）.Conclusion sFas，sTNFR-Ⅱlevel is closely correlated with the severity of patients with CHF.sFasL was higher in patients with heart functionof gradeⅢandⅣ.All these can be used for prediction of the prognosis of CHF.
Key words chronic congestive heart failure apoptosis
Fas是肿瘤坏死因子受体超家族成员之一，是细胞死亡信号接受器，与可溶性Fas配体（sFasL）或其相应配体结合后激活半胱天冬蛋白酶（caspase）导致细胞发生蛋白水解，诱导凋亡 ［1］ 。Fas配体（FasL）存在于活化的T、B淋巴细胞及各种组织细胞的表面。在金属蛋白酶的作用下，可脱落形成sFasL。而血循环中的sFas则是Fas基因变异的产物，sFas和Fas竞争与FasL结合影响细胞凋亡，因而被认为是凋亡的抑制因子。sFas和Fas的平衡影响着细胞的生存与凋亡。肿瘤坏死因子受体存在于许多肿瘤细胞和正常细胞表面，肿瘤坏死因子（TNF）的多种生物学作用的实现必须通过其受体的介导。人的血浆及尿中存在着可溶性TNF受体（Soluble TNF receptor，sTNFR），sTNFR分sTNFR-Ⅰ和 TNFR-Ⅱ两种，分别来源于TNFR-P 55 和TNFR-P 75 sTNFR能高度亲和特异地与mTNFR竞争结合TNF，从而参与免疫调节。当TNF释放时，sTNFR也迅速释放，高浓度的sTNFR-Ⅱ具有抑制TNF活性，低浓度的sTNFR-Ⅱ对TNFα的结构具有稳定作用。因此，血清中sFas、sFasL、sTNFR-Ⅱ的水平可反映心肌细胞凋亡的情况。本研究采用ELISA双抗体夹心法检测慢性充血性心力衰竭（CHF）血清sFas、sFasL、sTNFR-Ⅱ的水平及其临床意义。
1 资料与方法
1.1 病例选择 实验组为慢性CHF患者30例，男14例，女16例，年龄34～89岁，平均（74.5±9.8）岁。导致CHF的病因包括缺血性心脏病、原发性扩张性心肌病、风湿性心脏病及高血压性心脏病。实验组按纽约心脏学会（NYHA）心功能分级分成2组亚组:心功能Ⅰ、Ⅱ级为轻度组，患者12例;心功能Ⅲ、Ⅳ级为重度组，患者18例，所有对象排除肿瘤、组织严重感染及脏器功能不全者。对照组为健康者（献血体检合格者）30例，其男20例，女10例，年龄27～42岁，平均（31.7±8.2）岁，排除各系统疾病，所测得的值我们认为可以作为正常生理参考值。
1.2 试剂与方法 sFas和sFasL测定采用法国Diaclone公司生产的原装试剂盒由上海贝西科技发展有限公司提供。sTNFR-Ⅱ测定采用美国Genzyme公司生产的试剂盒由晶美生物工程有限公司提供。均采用ELISA双抗体夹心法，参照说明书操作。同时测定患者肝、肾功能。
1.3 统计学处理 t检验或t′检验，资料采用ˉx±s表示。各指标相关性应用直线相关分析。
2 结果
2.1 CHF组与对照组血清sFas、sFasL、sTNFR-Ⅱ测定结果比较 sFas在试验组的轻、重两组间以及与对照组比较差异均有非常显著性（P<0.01）。试验组的轻、重两组间的sFasL比较差异有非常显著性（P<0.01）。轻度组与对照组sFasL比较差异无显著性（P>0.05）。重度组与对照组sFasL比较差异有非常显著性（P<0.01）。sTNFR-Ⅱ在对照组与心力衰竭轻度、重度组之间差异有非常显著性（P<0.01）。轻度组与重度组两组间差异亦有非常显著性（P<0.01）。sFas、sTNFR-Ⅱ浓度随心功能的恶化而升高，sFasL心功能Ⅲ、Ⅳ亦升高（见表1）。试验组与对照组患者的肝、肾功能差异均无显著性。
表1 试验组与对照组的sFas、sFasL、sTNFR-Ⅱ浓度比较
注:与对照组比较， a P<0.01;与轻度组比较， b P<0.01
2.2 CHF病人血清sTNFR-Ⅱ和sFas、sFasL水平的关系 sTNFR-Ⅱ水平与sFas水平存在显著正相关（r=0.615，P<0.01），sTNFR-Ⅱ水平和sFasL水平也存在显著正相关（r=0.591，P<0.01）。
3 讨论
近年研究表明心肌细胞凋亡是心力衰竭致病机制中的一个重要因素，心力衰竭时心肌细胞凋亡与心力衰竭时心室收缩功能不全，左室重构有密切关系 ［2～4］ ，但心力衰竭时心肌细胞凋亡的机制还未阐明。有学者证实 ［5］ 心肌梗死后及心室起搏诱导的慢性心力衰竭患者有心肌细胞负荷过重。循环中血管紧张素Ⅱ，炎症细胞因子水平升高，心肌细胞缺血和缺氧等因素均可导致心肌细胞结构、功能的表型改变，从而诱导心肌细胞凋亡，凋亡使工作心肌细胞数量绝对减少，而导致心肌收缩力下降，因此心肌细胞凋亡可能是CHF发病机制中的一个重要环节。近年的研究发现CHF患者血浆中的sFas和sFasL水平均有所变化，有sFas水平升高而sFasL水平不变 ［6］ 的报道，有的则是sFas不变 ［7］ ，有的结果显示sFasL水平升高 ［8］ 。sFas是Fas基因变异所致，故可由细胞分泌而进入外周血被认为是凋亡的抑制因子。可以部分抑制Fas介导的细胞凋亡。国外有学者报道 ［9］ 心力衰竭患者心包液富含的巨噬细胞表达sFas显著增加，而非衰竭心脏心包液富含的巨噬细胞无这一表达。凋亡相关 因子sFas水平升高并与心功能状况好坏有较好的相关。我们的试验结果显示:慢性心力衰竭患者血清sFas含量升高，并随心力衰竭的加重而显著升高，可能主要来源于巨噬细胞表达sFas增多，由于衰竭心肌细胞表达sFas与Fas之间的失衡，衰竭心肌细胞对Fas途径介导的细胞凋亡更加敏感，通过Fas途径介导的细胞凋亡可能增多。sFasL是凋亡的诱导因子，而sFas是它的受体，sFas水平升高应该是机体的良性代偿反应，使两者达到新的平衡。sFasL水平升高见于严重的CHF患者循环中，有学者 ［8］ 认为衰竭心肌细胞中sFasL水平可能高于体循环，增高的sFasL与心肌受体Fas结合而成为诱凋亡的重要因子，提示sFas水平升高是CHF失代偿的一个重要指征。我们也发现心力衰竭重度组（Ⅲ、Ⅳ）患者血清sFasL与正常对照组比较差异有非常显著性（P<0.01）。心力衰竭轻度组患者（Ⅰ、Ⅱ）血清中sFas含量虽升高，但sFasL与正常对照组比较差异无显著性（P>0.05）。有关TNFα诱导引起的生物学活性早已研究。它们是通过相应的细胞膜受体。人血清sTNFR-Ⅱ是从TNˉFR的胞外段上脱离的片断能以高度的亲和力和高度的特异性与膜受体TNFR竞争地与TNFα结合，阻断TNF的生物学活性。在较高的sTNFR-Ⅱ浓度下，TNF与其膜受体结合减少，细胞毒作用也受到抑制。该抑制强度随sTNFR-Ⅱ剂量的增高而递增。低浓度的STNFR-Ⅱ对TNFα的结构具有稳定作用。因此，sTNFR-Ⅱ在进行性心力衰竭患者血清中浓度增高可能是由于机体产生高水平的sTNFR-Ⅱ来拮抗TNFα活性以减慢慢性充血性心力衰竭的过程。
本实验提示患者轻度心功能不全时，sTNFR-Ⅱ已升高，且随心力衰竭的加重显著增高。sTNFR-Ⅱ升高幅度可反映心功能损害的严重程度。并且sTNFR-Ⅱ水平与sFas水平存在显著正相关（r=0.615，P<0.01），s