肿瘤患者血清中可溶性Fas水平及其临床意义

    【摘要】 目的  分析可溶性Fas（sFas）在不同年龄健康人和不同肿瘤患者血清中含量变化及其在肿瘤诊断与治疗中的临床意义。 方法  采用ELISA法检测人血清中sFas的含量。 结果  恶性肿瘤患者血清中sFas的含量显著高于健康人和良性肿瘤患者（P均<0.01），健康人血清中sFas含量与年龄无关。 结论  血清sFas检测对良性恶性肿瘤的鉴别及对指导恶性肿瘤的临床治疗和判断预后具有参考价值。

    The clinical significance of soluble Fas in the sera of malignant tumor patients

    Zhai Yanling，Liu Yanxin，Liu Fuqiang，et al.

    Affiliated Beijing Tong Ren Hospital，Capital Medical University，Beijing100730.

    【Abstract】 Objective To analyse the soluble Fas（sFas）levels in the sera of various tumor patients and health individuals at different ages，and evaluate the clinical significance in diagnosis and treatment of cancers.Methods The ELISA was used for detection of the human sFas levels.Results The sFas in the patient sera with malignant tumors，but not the patients with benign tumors，increased significantly.There was no remarkable change in the sera of healthy controls at different ages.Conclusion Detection of sFas levels in the sera is valuable for distin-guishing malignant tumors from benign tumors and for guidance treatment appraise prognosis the patients with malig- nant tumors.

  

    细胞凋亡是机体的一种基本生物学现象，在生物体进化、内环境稳定及多系统发育中与细胞增殖、分化和衰老起着互补与平衡的作用。细胞凋亡也是基因严格控制的复杂过程，多种基因的过表达或被抑制可导致凋亡失控，与重大疾病的发生发展相关。研究表明，肿瘤细胞的恶性转化就是一种细胞增殖过度而凋亡不足的疾病，与一系列的癌基因、原癌基因和细胞凋亡基因的表达调控状态有着极为密切的关系。因此，如何将这些基因的表达和激活用于肿瘤的诊断与治疗一直是生物医学中的热点课题。Fas是一种细胞表面受体，为Ⅰ型跨膜蛋白，属于肿瘤坏死因子（TNF）家族，病毒感染或抗原的刺激能诱导T淋巴细胞产生Fas配体（FasL），FasL与Fas受体结合可引起Fas + 淋巴细胞凋亡 ［1］ 。当Fas不含跨膜区和胞内区时，则以可溶性Fas（sFas）形式存在，sFas可与膜型Fas竞争结合FasL。近来研究表明，血清sFas水平增高可使Fas介导的细胞凋亡减少，从而导致自身免疫病 ［2］ 。但在肿瘤发生机制中，sFas存在的意义还缺乏研究，本文通过对184例不同年龄健康人和180例临床肿瘤患者血清中sFas的分析，获得了具有重要意义的实验数据，为恶性肿瘤的诊断和治疗提供了新的资料。

    1 材料与方法

    1.1 材料 随机选取体检健康人184例作对照，男86例，女98例，年龄14～75岁，平均47岁。184例健康人按照年龄分成20岁以下、20～29岁、30～39岁、40～49岁、50～59岁和60岁以上6个组，分别测定sFas的表达。取明确诊断为肿瘤的患者180例，男97例，女83例，年龄21～75岁，平均年龄51岁。肿瘤患者中良性肿瘤患者35例（良性肿瘤组），包括消化道腺瘤息肉患者15例和乳腺纤维瘤患者20例。恶性肿瘤患者145例（恶性肿瘤组），包括消化系统肿瘤患者53例、胃癌患者16例（粘液细胞癌6例和低分化腺癌10例）、结直肠癌患者25例（腺癌17例和浆细胞癌8例）、肝细胞癌患者12例，血液系统肿瘤患者44例（白血病20例和非霍奇金淋巴瘤24例）和其他恶性肿瘤患者48例（乳腺癌23例、肺癌2例、喉癌11例、膀胱癌10例和甲状腺癌2例）。以上研究对象均除外自身免疫性疾病患者。于治疗前空腹抽取静脉血获血清后置-80℃冰箱保存，1个月内完成检测。

    1.2 方法 使用购自美国BIOSOURCE公司的ELISA试剂盒，按照说明书进行操作:加100μl稀释标准品及样本和质控血清于相应反应孔中，除空白孔，每孔加50μl anti-APO-1/Fas生物素结合物混匀置室温60min。洗4次，除空白孔，每孔加100μl Streptavidin-HRP置室温30min，洗4次，每孔加100μl Stabilized Chromogen，置室温适宜时间后加终止液，于酶标仪（BIO-TEK ELX800）450nm处测光吸收值。测定的质量控制为批内和批间差≤5%，灵敏度≤0.1ng/ml。1.3 统计学方法 数据均采用SPSS6.0统计软件进行统计学处理。

    2 结果

    2.1 不同年龄的健康人血清中sFas水平 不同年龄组相互比较无统计学意义（P均>0.05）见表1，表明:75岁以下健康人群中，随着年龄的增加sFas的表达未见明显变化。

    表1 不同年龄的健康人血清sFas表达水平的分析 年龄范围（略）

    2.2 恶性肿瘤患者血清中的sFas显著增高 对184例健康人、35例良性肿瘤和145例恶性肿瘤患者血清中sFas表达水平进行分析，比较结果如表2所示，良性肿瘤患者和健康人血清中sFas的表达水平没有明显的差别（P>0.05），但恶性肿瘤患者血清中sFas的表达水平明显高于正常人和良性肿瘤患者（P均<0.01）。

    表2 不同肿瘤患者和健康人sFas表达水平的分析（略）注:良性肿瘤组与对照组比较 * P>0.05;恶性肿瘤组与对照组和良性肿瘤组比较 ** P均<0.01

    2.3 恶性肿瘤和良性肿瘤患者血清中的sFas阳性表达结果 以表2中184例健康人血清的sFas含量作为参考值，分析恶性肿瘤患者与良性肿瘤患者血清中sFas的水平，将高于（4.23+3.7）ng/ml者视为sFas阳性。比较结果如表3所示，恶性肿瘤组的sFas阳性率高达75.8%（P<0.01），而良性肿瘤组的阳性率只有11.4%，表明临床检测sFas在血清中的水平对于鉴别良、恶性肿瘤具有显在的临床意义。

    3 讨论

    机体内sFas的表达水平与多种疾病的关系受到国内外科学家的重视。本文的比较研究结果表明，恶性肿瘤患者血清中sFas的表达水平较健康人有显著的升高，但与良性肿瘤患者相比，未见显著差异。同样，以健康人血清中sFas的表达水平作为本底，高出者为阳性进行统计，恶性肿瘤患者的阳性率也高达70%以上，而良性肿瘤患者的阳性率只有其1/6左右。结果有力地证明sFas的表达与肿瘤的恶化程度相关。测定sFas的表达水平对于鉴别良、恶性肿瘤可能具有潜在的临床应用价值。值得注意的是，本研究所测定的184例不同年龄健康人sFas水平与年龄无关，该结果与国外报道的sFas趋向于随龄增加而升高的结果不一致 ［3］ 。这可能与所测样本的来源和例数有关，有待进一步的研究。另外，与sFas不同的是，我们也曾分析了1079例正常人外周血淋巴细胞中的膜 

表3 良性和恶性肿瘤患者sFas表达阳性率的比较（略）

     结合型Fas的阳性表达率，结果表明，290例35岁以下人群的Fas阳性表达率平均为25.92%，而789例60岁以上老年人的Fas阳性表达率平均43.44%，老年组明显高于青年组。为什么膜结合型Fas和sFas会有如此不同的表达规律呢?有研究表明，Fas诱导的细胞凋亡作用是免疫系统清除恶变倾向细胞的主要机制之一，sFas的主要功能是和膜结合型Fas一起共同维持细胞凋亡和细胞增殖间的平衡 ［4～6］ 。sFas表达增高可导致恶变倾向细胞逃逸免疫监视，形成肿瘤。膜结合型Fas表达增高则导致凋亡作用增强。老年人的免疫功能较年轻人大大降低，表现为识别自身和异己的能力下降，导致多种退行性病变的发生，膜结合型Fas表达增高极可能就是潜在的生物学原因。

    参考文献

    1 Nagata S，Golstein P.The Fas death factor.Science，1995，267:1449-1456.

    2 Yufu Y，Cho I，Hirase N，et al.Soluble Fas in the serum of patients with non Hodgkins lymphoma:higher concentrations in an gioimmuno blastic T-cell lymphoma.Am Hematology，1998，58（4）:334-339.

    3 Mrrsuru S，Masao T，Kuniaki S，et al.Highly sensitive ELISA for solu-ble Fas in serum:increased soluble Fas in the elderly Clinical Chemistry1996，42:121911-1914.

    4 Cheng J，Zhou T，Liu C，et al.protection from Fas mediated apoptosis by a soluble form of the FAS molecule.Science，1994，263（5154）:1759 -1762.

    5 Hughes DPM，Crispe IN.A naturally occuring soluble is form of murine Fas generated by alternative splicing，J Exp Med，1995，182（5）:1395 -1399.

    6 仇生龙，彭志海，王裕发，等.大肠癌患者血清可溶性Fas（sFas）水平表达.肿瘤，2000，（3）:195-197.

 

    作者单位:100730北京首都医科大学附属北京同仁医院
    100005北京中国医学科学院基础医学研究所